INFORME DE LABORATORIO
CURSO DE BIOQUÍMICA
UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE BOLÍVAR
EXTRACCION DE LA CASEÍNA Y DETERMINACION DE PUNTO ISOELECTRICO
PRÁCTICA DE LABORATORIO No. _#3_
Estudiantes: Karol Lucia Chajin Narvaez, Maria Alejandra Escorcia Jiménez
Fecha de la práctica: _06 / 09 /_2023_
Profesor: Juan Alberto Rebollo
RESUMEN: La práctica tiene como objetivo la extracción de la caseína de la leche y determinar su punto
isoeléctrico. La proteína utilizada en la práctica es la caseína. La práctica de laboratorio se encuentra
dividida en 3 partes, en la parte a, se aísla la caseína con ayuda del ácido acético y agua. En la parte b, se
prepara una solución de caseína por medio de la disolución de la proteína en agua destilada y NaOH para
finalmente diluirla en un matraz con ácido acético y agua destilada. Y, por último, en la parte c se
determino el pI de la caseína por medio de la absorbancia de la solución con pH distintos.
Abstract. The objective of the practical is to extract casein from milk and determine its isoelectric point.
The protein used in the practical is casein. The laboratory practice is divided into 3 parts, in part a,
casein is isolated with the help of acetic acid and water. In part b, a casein solution is prepared by
dissolving the protein in distilled water and NaOH and finally diluting it in a flask with acetic acid and
distilled water. And finally, in part c, the pI of the casein was determined by the absorbance of the
solution at different pH.
OBJETIVOS
El objetivo principal es la determinación del punto isoeléctrico de la caseína después de su extracción.
Realizar mezclas de leche con ácido acético y agua destilada para aislar la caseína.
Preparar una solución de caseína y encontrar su punto isoeléctrico por medio del cambio de pH.
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
En una tabla registre los datos de Absorbancia a 640nm (A640) y pH.
pH A640nm
2,9 0,348
3,13 0,323
3,26 0,321
3,48 0,333
3,7 0,326
4,01 0,317
4,37 0,094
5,24 0,043
5,61 0,165
En una gráfica represente los resultados de A640 vs pH.
pH VS Absorbancia (A640nm)
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05 0.043
0
2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5
Gráfica No. 1 “Absorbancia vs pH”
Con base en los resultados obtenidos diga cuál es el punto isoeléctrico de la caseína.
PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA CASEÍNA:
Con base a lo mostrado en la gráfica no. 1 podemos decir que el punto isoeléctrico de la caseína es 0,043
a un ph de 5,24, esto, con respecto al punto en que la gráfica presenta una inflexión en su punto más bajo.
DISCUSION
En la práctica de laboratorio se busca medir el punto isoeléctrico de la caseína, utilizando la relación entre
la absorbancia a 640 nm (A640nm) con el pH. En primer lugar, sabemos que la caseína, es una proteína
de la leche, que cambia su carga eléctrica según el pH del medio en que esta encuentre y que el punto
isoeléctrico (pI) es donde la carga neta de la caseína es cero. Entonces, al momento de medir la
absorbancia de la caseína a 640nm en un rango de pH, se pueden observar los cambios que se presentan
en la absorbancia respecto al ph (como se evidencia en la Gráfica No. 1) esto debido a la capacidad de la
caseína para absorber la luz a esa determinada longitud de onda. En resumen, la absorbancia a 640 nm se
relaciona con el pH, siendo máxima o mínima en el punto isoeléctrico de la caseína, según la carga
eléctrica que presente.
Cuando se mide la absorbancia de una solución de caseína a 640 nm a lo largo de un rango de pH, es
posible observar cambios en la absorbancia a medida que el pH se acerca al punto isoeléctrico. Esto se
debe a que la caseína, en su forma no cargada o en su punto isoeléctrico, tiene una mayor capacidad para
absorber la luz a 640 nm en comparación con las formas cargadas positiva o negativamente.
Al momento de llevar a cabo la extracción de la caseína, buscamos obtener su forma más pura, por lo
tanto, para poder lograr esto a través de la medición del punto isoeléctrico se nos permite verificar si tal
pureza fue exitosa, ya que, en el pI la caseína no debería estar cargada eléctricamente lo que nos confirma
la ausencia de contaminantes eléctricamente cargados presentes.
En este caso, para poder determinar el punto isoeléctrico de la caseína anteriormente extraída, tuvimos en
cuenta el comportamiento que esta presentó en la gráfica registrada con los valores de absorbancia a
distintos pH. Al ser esta poco soluble en agua, notamos que en la gráfica se muestra un punto de inflexión
generado en la curva, en donde con respecto a él podemos determinar el punto isoeléctrico de la caseína
tomado de forma experimental.
CONCLUSION
La medición del punto isoeléctrico de la caseína mediante la relación entre la absorbancia a 640 nm y el
pH es una técnica valiosa en el ámbito de la química y la bioquímica. Esta práctica nos permite
comprender cómo la carga eléctrica de la caseína varía con el pH y cómo esta propiedad afecta su
capacidad para absorber luz a una longitud de onda específica.
A partir del pH de la caseína obtenido experimentalmente podemos concluir que la extracción de la
caseína fue exitosa, ya que, se pudo extraer la caseína de la leche usada en el laboratorio y encontrar su pl
para así tener conocimiento de que se extrajo en su forma más pura.
La caseína, siendo una proteína esencial en la leche, desempeña un papel fundamental en la industria
alimentaria y en la investigación científica. Por lo tanto, conocer su punto isoeléctrico es esencial para
garantizar la pureza en los productos lácteos, ajustar las propiedades de la caseína en diversas
aplicaciones y comprender sus interacciones en contextos biológicos y químicos.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué sucedería si en vez de graficar la absorbancia se representa la transmitancia?
R// La transmitancia disminuirá a medida que la concentración aumenta, esto debido a que la
concentración de la muestra aumenta y la luz que pasa por medio de esa muestra disminuye y la
transmitancia también disminuirá. [1]
2. ¿Por qué las proteínas tienen solubilidad mínima en el pI?
R// La solubilidad de una proteína es mínima en su punto isoeléctrico, ya que su carga neta es
cero y desaparece cualquier fuerza de repulsión electrostática que pudiera dificultar la formación
de agregados.
3. ¿A qué pH una proteína tendría una carga neta negativa?
R// Su pI será mayor que el pH del entorno en el que se encuentra.
4. Describa un método diferente al visto en la práctica para determinar el punto isoeléctrico
de una proteína.
R// El método de electroforesis es un método que permite separar las moléculas cargadas en
función del tamaño del gel. Si se realiza la técnica en gel de la sustancia, se puede observar el
punto que no se mueve y por ende su pI
La electroforesis se aplica en el campo de la Bioquímica a la separación de compuestos que
poseen grupos ionizables (aminoácidos, péptidos, proteínas, ácidos nucleicos) teniendo en cuenta
que la
carga neta de estas sustancias depende del pH del medio en que se encuentren.
5. ¿Qué utilidad tiene determinar el pI de una proteína?
El punto isoeléctrico se define como el pH en el cual el número de cargas positivas se iguala al
número de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de una molécula. En el punto
isoeléctrico la carga neta de la molécula es cero (0). En los aminoácidos los grupos ionizables
corresponden a grupos carboxilos, amino, fenólicos y tiólicos.
La determinación del pl permite predecir cuál será el comportamiento de la proteína en distintos
medios, además se tiene una mejor comprensión de su funcionalidad y estructura.
También es fundamental para comprender las interacciones proteína-proteína en sistemas
biológicos, diseñar experimentos y estudiar la estabilidad y solubilidad de la proteína en
diferentes condiciones de pH. Además, el pI se utiliza en técnicas de detección y cuantificación
de proteínas.
BIBLIOGRAFÍA
[1] Físico Química de Biomoléculas Licenciatura en Biotecnología. (s/f). [Link]. Recuperado el 28 de
septiembre de 2023, de
[Link]
[2] Electroforesis, nb, sb y wb. (s/f). [Link]. Recuperado el 28 de septiembre de 2023, de
[Link]
[3] Punto isoeléctrico. (s/f). [Link]. Recuperado el 27 de septiembre de 2023, de
[Link]