Universidad Autónoma Indígena de México
Ingeniería En Biotecnología
ASIGNATURA: ANALISIS QUIMICO INSTRUMENTAL
UNIDAD 3: Métodos Cromatográficos.
" HPLC "
Alumna: Luz Maili González González
Semestre: 4° Grupo: 2 Matricula: 22040867
Catedrática: Ing. Sara Cristina Álvarez Ibarra
ENERO 2026
Realizar una investigación sobre cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).
La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC, por sus siglas en inglés) es un método
analítico utilizado para separar, identificar y cuantificar componentes en una mezcla.
funciona manipulando líquidos, que consisten en una mezcla compuesta por el analito o
la muestra de interés, y uno o más solventes que actúan como la fase móvil; Esta técnica
se basa en el paso de una muestra líquida a través de una columna rellena con un material
sólido (fase estacionaria), utilizando un solvente o mezcla de solventes (fase móvil) que
fluye a alta presión. Las diferentes sustancias se separan debido a su distinta afinidad por
la fase estacionaria y la fase móvil, lo que permite su análisis detallado y preciso
- Fundamento
El fundamento de la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) radica en la
interacción diferencial de los componentes de una muestra con dos fases: la fase móvil
(líquido) y la fase estacionaria (sólido). Cuando la muestra se inyecta en el sistema, cada
compuesto viaja a través de la columna a diferentes velocidades, dependiendo de su
afinidad química y física por la fase estacionaria y la fase móvil. De esta manera, las
sustancias se separan en función de sus características, permitiendo su identificación y
cuantificación precisa. Generalmente, la detección se realiza mediante dispositivos como
detectores UV-Vis o de fluorescencia, que registran la presencia de los compuestos
conforme eluyente sale de la columna.
A diferencia de la cromatografía líquida convencional, como la del papel o la de la
columna rellena con sílice gel, la HPLC no depende de la gravedad para que el líquido
moje la fase estacionaria. En su lugar, trabaja con bombas de altas presiones, las cuales
irrigan la fase móvil o eluyente por la columna con mayor intensidad
-Componentes del equipo
El sistema HPLC se compone de varios elementos clave que funcionan de manera
coordinada para lograr una separación eficiente. Entre los principales componentes
destacan: el depósito de solventes, que almacena la fase móvil; la bomba, encargada de
impulsar el solvente a alta presión a través del sistema; el inyector, donde se introduce la
muestra; la columna cromatográfica, que contiene la fase estacionaria y es el corazón de
la separación; el detector, que identifica y cuantifica los compuestos eluidos; y finalmente,
el cromatograma, que muestra y almacena los resultados para su análisis posterior.
Adicionalmente, algunos equipos cuentan con sistemas de control de temperatura para
mantener condiciones óptimas y válvulas de selección para cambiar entre diferentes fases
móviles o columnas según las necesidades del análisis. Todos estos componentes
trabajan en conjunto para garantizar resultados reproducibles y de alta precisión.
-Ejemplos de aplicaciones
• Cromatografía de fase normal. La cromatografía de fase normal es aquella donde
la fase estacionaria es de naturaleza polar, mientras que la móvil apolar. Aunque se
le llame normal, de hecho, es la menos utilizada, siendo la de la fase inversa la más
difundida y eficiente.
• Cromatografía de fase inversa. Al tratarse de una fase inversa, ahora la fase
estacionaria es apolar y la fase móvil polar. Esto es especialmente útil en análisis
bioquímicos, pues muchas biomoléculas se disuelven mejor en agua y en solventes
polares.
• Cromatografía de intercambio iónico. En este tipo de cromatografía el analito, con
carga positiva o negativa, se desplaza a través de la columna sustituyendo los iones
que alberga. Mientras mayor sea la carga, mayor será su retención, por lo que es
ampliamente utilizada para separar complejos iónicos de metales de transición.
• Cromatografía de exclusión molecular. Esta cromatografía, más que separar, se
encarga de purificar la mezcla resultante. Como su nombre indica, el analito se
separa ya no en función de qué tan afín sea a la fase estacionaria, sino de acuerdo
con su tamaño y masas moleculares. Las moléculas más pequeñas serán más
retenidas que las moléculas grandes, pues estas últimas no quedan atrapadas
entre los poros de los rellenos poliméricos de las columnas.
-Conclusión que resalte la importancia de las técnicas
Por lo anterior, es una herramienta fundamental en laboratorios de análisis clínico,
farmacéutico, alimentario, ambiental y de investigación química, ya que permite detectar
contaminantes, determinar la pureza de medicamentos, analizar ingredientes activos y
estudiar metabolitos, entre muchas otras aplicaciones. Gracias a su alta sensibilidad y
precisión, la HPLC es indispensable en el control de calidad y en el desarrollo de nuevos
productos químicos y biotecnológicos.
-Su evolución a través de la historia
1903 – Mijaíl Tswett introduce la cromatografía en columna, sentando las bases del principio
1900–1950: Bases de la cromatografía de separación.
Décadas de 1930–1940 – Se desarrollan técnicas de cromatografía en papel y en capa fina
1952 – A. J. P. Martin y R. L. M. Synge reciben el Premio Nobel por su trabajo en cromatografía
1950–1960: Nace la cromatografía de partición.
líquida moderna Finales de los 50 – Se reconoce la necesidad de usar presiones más altas para mejorar la
eficiencia de las separaciones líquidas
1962–1965 – Se introducen las primeras columnas empacadas con partículas pequeñas, lo que exige
bombas de alta presión.
1960–1970: Aparición del HPLC 1967 – Horváth y colaboradores desarrollan los primeros sistemas que hoy reconocemos como HPLC.
Finales de los 60 – Surgen las primeras bombas de alta presión y detectores UV más sensibles.
1970–1975 – Las primeras compañías lanzan equipos comerciales de HPLC.
1970–1980: Comercialización y 1976 – Se populariza el uso de fase reversa (C18), que hoy es la técnica más utilizada.
estandarización Finales de los 70 – Se integran los primeros sistemas de inyección automática.
1.- Se desarrollan detectores más sofisticados: Diodo Arreglo (DAD/UV-Vis), Fluorescencia,
1980–1990: Avances en detectores y Electroquímicos
2.- Aparecen columnas con partículas más pequeñas (5 µm) y mejores fases estacionarias.
columnas
• los equipos incorporan software avanzado, permitiendo control total del sistema, integracion automatica
1990–2000: Automatización y control de picos y metodos reproducibles
• Se optimizan las bombas de gradiente y los sistemas de desgasificación
por computadora
• 2004 – Se introduce el UHPLC (Ultra High Performance LC) con partículas < 2 µm.
• se logran separaciones mas rapidas, mayor resolucion y menor consumo de solventes
2000–2010: Nace el UHPLC
1.- Se vuelve estándar el acoplamiento HPLC-MS/MS, especialmente en: Farmacéutica, Toxicología,
2010–2020: Integración con Análisis ambiental
2.- Se desarrollan columnas monolíticas y tecnologías híbridas.
espectrometría de masas
-Referencias bibliográficas
Day, R., Underwood, A. Química Analítica Cuantitativa (quinta ed.). PEARSON Prentice Hall.
Bussi, J. Cromatografía de líquidos de alta eficacia. Recuperado de [Link].
High-performance liquid chromatography. Recuperado de [Link].
Clark, J. High Performance Liquid Chromatography. Recuperado de [Link].
Barkovich, M. High Performance Liquid Chromatography. Recuperado de [Link].