CAPÍTULO 1

GENOMA Y GENES EUCARIOTAS: ASPECTOS ESTRUCTURALES Y

FUNCIONALES
Genoma y genes eucariotas: Soria, Liliana A; Motter, Mariana M y Huguet, Miguel J.
Aspectos estructurales y funcionales
Introducción
Soria, Liliana A; Motter, Mariana M. y Huguet, Miguel J. El genoma de un organismo está constituido por el contenido total de ADN que tiene
cada célula. En los organismos el material hereditario está contenido en la molécula de
ADN y su organización depende de la complejidad de la estructura del mismo. Los
procariotas, las mitocondrias y los cloroplastos contienen una molécula de ADN corta, y
generalmente circular. Las células eucariotas contienen un genoma nuclear de mayor
tamaño y organizado en forma de fibras de cromatina, con varias moléculas de ADN
formando los múltiples cromosomas.
Proyectos de secuenciación de genomas de diferentes organismos se realizan en
distintas
comopartes del mundo
unidades dey tienen
masadiferente grado de avance.
(picogramos (pg) =Una 10base
-12 de datos que
g) o en
Introducción reúne está información está disponible en: [Link]
número de pares de bases (generalmente megabases, 1Mb=
El contenido de ADN de los genomas de más de 10.000 especies de hongos, plantas y
El genoma de un organismo está constituido por el contenido 1 x 106 pb).
animales está disponible en tres bases de datos independientes. La base que contiene
total de ADN que tiene cada célula. En los organismos el Un genoma
información mamífero
sobre animales tiene
se llama aproximadamente
Animal Genome Size Database 3000 Mbdisponible
y está (ó 3
material hereditario está contenido en la molécula de ADN y x 10 9
pb) y contiene
en [Link] aproximadamente 20.000 genes.
su organización depende de la complejidad de la estructura El No existe
tamaño relación
del genoma consistente
se expresa entre
generalmente comoel contenido
valor dedecADN y la comple-
de una gameta
-12
del mismo. Los procariotas, las mitocondrias y los cloroplas- y sejidad
llamade [Link],
Se expresa como unidades
esto de masa (picogramos
se denomina paradoja (pg)del
= 10valor
g) o en
6
tos contienen una molécula de ADN corta, y generalmente número de pares de bases (generalmente megabases,
c. Un ejemplo bien representativo de dicha paradoja, surge1Mb= 1 x 10 pb).
Un genoma mamífero tiene aproximadamente 3000 Mb (ó 3 x 109 pb) y contiene
circular. Las células eucariotas contienen un genoma nuclear de la comparación entre mamíferos y anfibios, con promedios
aproximadamente 20.000 genes.
de mayor tamaño y organizado en forma de fibras de cro- No3,5 pgrelación
existe y 16,7 pg respectivamente
consistente entre el valor de c y(Tabla 1). de un organismo, esto
la complejidad
matina, con varias moléculas de ADN formando los múltiples se denomina paradoja del valor c. Un ejemplo bien representativo de dicha paradoja,
cromosomas. surge deTabla 1. Resumen
la comparación entredel contenido
mamíferos de ADN con
y anfibios, de algunas
promedios especies,
3,5 pg y 16,7 pg
respectivamenteinformación
(Tabla 1).publicada en Animal Genome Size Database
Proyectos de secuenciación de genomas de diferentes or-
(Gregory et al, 2007).
ganismos se realizan en distintas partes del mundo y tienen
diferente grado de avance. Una base de datos que reúne
Taxón N° N° de especies Tamaño del genoma Promedio del tamaño
está información está disponible en: [Link] (rango, pg) del genoma (pg
gov/sites/genome. Vertebrados
El contenido de ADN de los genomas de más de 10.000 Anfibios 870 463 0,95 - 120,1 16,7
Reptiles 406 309 1,1 - 5,4 2,3
especies de hongos, plantas y animales está disponible en Aves 274 205 1,0 - 2,2 1,5
tres bases de datos independientes. La base que contiene Mamíferos 600 432 1,7 - 8.4 3,5
Invertebrados
información sobre animales se llama Animal Genome Size Insectos 512 433 0,1 - 16.9 1,6
Database y está disponible en [Link] Crustáceos 259 227 0,16 - 38,0 3,1
El tamaño del genoma se expresa generalmente como con- Arácnidos 120 117 0,08 - 7,5 2,4
Moluscos 202 183 0,4 - 5,9 1,8
tenido de ADN de una gameta y se llama valor c. Se expresa
9
Tabla 1. Resumen del contenido de ADN de algunas especies, información publicada
en Animal Genome Size Database (Gregory et al, 2007).
 1. El genoma eucariota Los transposones son secuencias de ADN “moviles” (es decir,
secuencias de ADN genomico que se separan y se vuelven
Las células
1. El genoma eucariota de los animales tienen dos tipos diferentes de a insertar en otra posición del mismo o de otro cromosoma).
Los transposones más complejos, poseen en su estructura
Las célulasgenomas: el nuclear
de los animales y eldos
tienen mitocondrial.
tipos diferentes de genomas: el nuclear y el
El genoma nuclear contiene grandes cantidades de ADN no los genes que codifican para las proteínas necesarias para su
mitocondrial.
El genomacodificante. Una muy
nuclear contiene baja
grandes fracción (1,5
cantidades %) del
de ADN no mismo Una muy inserción
codifica
codificante. baja y solo en algunos casos utilizan proteínas celulares.
proteínas
fracción (1,5 (Grafico
%) del mismo 1). proteínas (Grafico 1).
codifica Las secuencias medianamente repetitivas pertenecientes a
Loslosgenes
Los genes de de los
eucariotas eucariotas
se organizan dese organizan
diversas de diversas
maneras, desde copias la familia
ma-únicas hasta LINE y Alu (SINE) tienen una estructura de transpo-
familias deneras, desde copias
genes relacionados, únicas hasta
dispuestas familias de genes relacio-
en tándem. son. Se supone que juegan un rol importante en la plasticidad
nados, dispuestas en tándem. del genoma durante la evolución, el desarrollo y el origen de
enfermedades. Se conoce la inserción de secuencias LINE y
Gráfico 1. TipoGráfico 1. Tipo deque
de secuencias secuencias
componen que el
componen
genomaelnuclear
genoma nuclear SINE dentro de distintos genes. El mecanismo más probable
es que se trate de fenómenos de retrotransposición. Este
mecanismo se realiza a través de la transcripción en un ARN,
el cual por medio de la transcriptasa reversa es retranscripto
en ADN y finalmente se integra al ADN celular.
Si bien aun se sabe muy poco sobre la transposición en las
células eucariotes superiores, por ejemplo en caninos la in-
serción de una secuencia Line-1 (1,5 kilobases o kb), dentro
del intrón 5 del gen que codifica para el factor de coagulación
IX produce un splicing aberrante reduciendo los niveles de
transcripción de dicho gen. Este evento es responsable que
los animales que padecen este tipo de alteración produzcan
solo el 5% del factor IX de la coagulación, manifestando
hemofilia de tipo B.
Referencias: Referencias:
LTR: LongLTR: Interspersed Nuclear
Long Interspersed Elements,
Nuclear Elements, SINE:
SINE: Short
Short Interpersed
Nuclear Elements, LINE:
Interpersed LongElements,
Nuclear Interpersed
LINE:Nuclear [Link] Elements.
Long Interpersed Las mitocondrias y los cloroplastos se cree que han evolu-
cionado a partir de bacterias que establecieron una relación
simbiótica con células nucleadas ancestrales. La mayoría
El ADN
El ADN nuclear nuclear
contiene contienesecuencias
abundantes abundantes secuencias
repetidas, algunasrepetidas, de los genes contenidos originalmente en estas organelas
dispersas (elementos
algunas
transponibles) y otrasdispersas
en tandem(elementos transponibles)
(microsatélites, minisatélitesyyotras en tan-
satélites). se han transferido al genoma nuclear durante la evolución,
Los genomasdemgrandes
(microsatélites,
contienenminisatélites y satélites).
una gran proporción de elementos transponibles dejando algunos genes en el ADN de la organela.
Los ygenomas
(transposones) grandes
una proporción máscontienen
baja de genesuna que
grancodifican
proporción de queEllos
proteínas genoma mitocondrial es circular y mide aproximadamente
genomas más pequeñ[Link] (transposones) y una proporción
elementos 16 kb de longitud, tiene escaso ADN codificante y no tiene
Los transposones
más baja sondesecuencias
genes quedecodifican
ADN “moviles”
proteínas (esquedecir, secuencias de ADN
los genomas intrones. El ADN mitocondrial codifica ARNt, ARNr y enzimas
genomico que se separan
más pequeños. y se vuelven a insertar en otra posición del mismo o de otro
involucradas en la fosforilación oxidativa.
cromosoma).
Los transposones
10
más complejos, poseen en su estructura los genes que codifican para
las proteínas necesarias para su inserción y solo en algunos casos utilizan proteínas
celulares.
Las secuencias medianamente repetitivas pertenecientes a la familia LINE y Alu (SINE)
tienen una estructura de transposon. Se supone que juegan un rol importante en la
 ARN polimerasa II: ARNm, lncRNA, snRNA, miRNA, siRNA y snoRNA.
ARN polimerasa III: ARNt, ARNr 5S, lncRNA y algunos snRNA.
La vía de expresión de un gen comienza con la transcripción, proceso de síntesis de un
ARN por parte de la ARN polimerasa, a partir de un molde de ADN. Si dicho gen
codifica un ARNm, el producto final será una proteína (Fig. 1).

Las mutaciones en el genoma mitocondrial presentan un pa-

trón de herencia materna, porque las mitocondrias se heredan
de los oocitos y no de los espermatozoides. En humanos,
dichas mutaciones pueden provocar graves enfermedades
neuromusculares.
El código genético del genoma mitocondrial en animales es
diferente del nuclear, porque el sentido de muchos codones
es distinto.

2. Gen eucariota
Un gen es la secuencia completa de ADN que es necesaria
para la síntesis de un producto funcional (proteína o ARN). De
acuerdo a esta definición un gen no sólo es la secuencia de Figura 1. Etapas de la expresión de un gen que codifica una proteína
ADN que codifica la secuencia de aminoácidos de Figura una pro-1. Etapas de la expresión (Fitzgerald-Hayes and Reichsman).
de un gen que codifica una proteína (Fitzgerald-Hayes
teína (secuencia codificante) sino también la correspondiente
and Reichsman).
2.1. Genes para ARN mensajeros
a ARNs no codificantes (ARNnc). Estos ARNs están involu- 2.1. Genes para ARN mensajeros
Un gen es una unidad de transcripción, la cual está delimitada por la secuencia a la que
crados en la traducción (ARNt y ARNr), en la regulación de Un gen es una unidad de transcripción,
se une inicialmente la ARN polimerasa para iniciarlalacual está delimitada
transcripción (promotor) y la
la expresión génica (miRNA o microARN, siRNA o pequeños por la secuencia a la que se une inicialmente la ARN polime-
secuencia donde dicho proceso finaliza (secuencia terminadora), estas secuencias 3
ARN de interferencia y lncRNA o ARN no codificantes largos)
limitan larasa para
región queiniciar la transcripción
contiene la información (promotor) y la secuencia
para una proteína, denominada región
y en la modificación química de otros ARNs (snRNA o peque- donde dicho proceso finaliza (secuencia terminadora), estas
codificante (Fig. 2).
ños ARN nucleares y snoRNA o pequeños ARN nucleolares). secuencias limitan la región que contiene la información para
Todos estos genes son transcriptos por tres tipos de ARN una proteína, denominada región codificante (Fig. 2).
polimerasas diferentes:
• ARN polimerasa I: ARNr, excepto ARNr 5S,
• ARN polimerasa II: ARNm, lncRNA, snRNA, miRNA,
siRNA y snoRNA.
• ARN polimerasa III: ARNt, ARNr 5S, lncRNA y algunos
snRNA.
La vía de expresión de un gen comienza con la transcripción,
proceso de síntesis de un ARN por parte de la ARN polime-
rasa, a partir de un molde de ADN. Si dicho gen codifica un
ARNm, el producto final será una proteína (Fig. 1).
Figura 2. Estructura de una unidad de transcripción (Pierce, B).

Figura 2. Estructura de una unidad de transcripción (Pierce, B).

11
La mayoría de los genes de los organismos eucariotas que codifican proteínas tienen
una organización particular, en ellos se distinguen secuencias que se expresan (exones)
y secuencias no codificantes o que no tienen su contrapartida en la proteína traducida
(intrones). En eucariotas hablamos de genes interrumpidos o discontinuos. La existencia
La mayoría de los genes de los organismos eucariotas que dad para iniciar la transcripción. En todos los casos se utilizó
codifican proteínas tienen una organización particular, en un fragmento de ADN que pudiera servir de molde para la
ellos se distinguen secuencias que se expresan (exones) y transcripción, esto significa que incluye un promotor funcio-
secuencias no codificantes o que no tienen su contrapartida nal. Entonces, los límites de la secuencia de ese promotor
en la proteína traducida (intrones). En eucariotas hablamos se determinaron reduciendo la longitud del fragmento, desde
de genes interrumpidos o discontinuos. La existencia de cada extremo, hasta que en algún punto dejara de ser activo.
intrones fue descubierta en el gen de la β globina de ratón Los promotores utilizados por la ARN polimerasa II mues-
(3 exones y 2 intrones) y en el gen de la ovoálbumina de la tran una mayor variación en secuencia que los promotores
gallina (8 exones y 7 intrones). procariotas y además, la enzima es incapaz de iniciar la
El número de exones e intrones que contiene cada gen, transcripción sola, requiere de una serie de factores de
como la longitud de la secuencia de los mismos, es variable transcripción los cuales son primariamente responsables de
entre diferentes genes, y en muchos casos los intrones tie- la especificidad con que es reconocido un promotor particu-
nen mayor longitud que los exones, pudiendo medir varias lar. Estos factores son denominados genéricamente como
kb. Los ARNm transcriptos a partir de genes interrumpidos TFII X, donde TF II significa transcripcion factor II ó factor
tienen que madurar (splicing) antes de ser traducidos, esto de transcripción para la ARN polimerasa II y X es la letra
significa que deben perder los intrones. que identifica a un factor individual (ej.: TFIIA). Hay muchos
La activación de la expresión génica en eucariotas es más factores basales, cada uno con una función particular.
compleja que en procariotas. El inicio de la transcripción re- En cuanto a la secuencia de bases que contienen los distin-
quiere que las secuencias necesarias para la ARN polimerasa tos promotores, uno podría esperar que el sitio específico de
II y otras proteínas sean accesibles, pero el ADN eucariota contacto con la polimerasa tuviese regiones comunes a to-
está formando los nucleosomas. Los nucleosomas consti- dos los promotores. Así, mediante el aislamiento y posterior
tuyen una verdadera barrera física que impide el ensamble secuenciación de regiones promotoras de muchos genes,
del complejo transcripcional. Para que la transcripción se se encontraron bases en común o conservadas. Estas se-
pueda producir deben ocurrir cambios en la estructura de la cuencias halladas con relativa frecuencia en los promotores
cromatina, que determinen una apertura transitoria para que chequeados, se llaman secuencias de consenso.
la maquinaria responsable de la transcripción pueda actuar, Se denomina punto +1, el que corresponde con el inicio de
dichos cambios serán tratados en el capítulo 3 (Regulación la transcripción (start point o transcription start site, TSS).
de la expresión génica). Con números negativos (-) se señalan a las bases ubicadas
a la izquierda de tal punto y con números positivos (+) a las
2.1.1. El promotor para la ARN polimerasa II ubicadas a la derecha del mismo, como se puede observar
El primer paso o etapa en la transcripción es la unión de la en la figura siguiente. Se utiliza el término upstream, o co-
ARN polimerasa II a una molécula de ADN. La unión ocurre rriente arriba, para indicar secuencias ubicadas más allá en
en una región particular denominada promotor. el sentido opuesto al sentido de la transcripción, y downs-
El promotor eucariota se estudió a través de sistemas de tream o, corriente abajo, para las secuencias ubicadas más
comprobación in vivo e in vitro en los que se midió la capaci- allá en el sentido de la transcripción.

12
transcription start site, TSS). Con números negativos (-) se señalan a las bases ubicadas
a la izquierda de tal punto y con números positivos (+) a las ubicadas a la derecha del
mismo. Se utiliza el término upstream, o corriente arriba, para indicar secuencias
ubicadas más allá en el sentido opuesto al sentido de la transcripción, y downstream o,
corriente abajo, para las secuencias ubicadas más allá en el sentido de la transcripción.

Inicio de la Transcripción secuencia Inr (initiator element). Los genes con TATA box y
secuencia Inr tienen un punto de iniciación de la transcrip-
ción exacta. Sin embargo algunos genes, particularmente
3’ 5’
Figuralos 3. responsables
Determinación dede la las reacciones
secuencia básicas
de consenso celulares
del TATA box por(genes
comparación
-20 +1 +10 de 900housekeeping) no tienen
genes eucariotas (Lodish ninguna de las dos secuencias men-
y col).
cionadas, pero presentan dentro de las 100 pb corriente arriba
Sentido de la Transcripción
del punto de inicio, secuencias ricas en CG (islas CG) de 20
Mutaciones en dicha secuencia no sólo disminuyen la tasa de transcripción sino que
tambiéna 50 pb deellongitud.
modifican punto de inicio de la misma, el cual se vuelve errático.
A partir de la transcripción en sistemas in vitro y secuenciado En el punto Otra secuencia común
de inicio algunos del core
promotores es lalasecuencia
tienen secuencia de consenso
conservada YYANT/AYY
de nucleótidos se pudo determinar la estructura de los promo- (dondepara la unión adel
Y corresponde factorpirimidina,
cualquier de transcripción
C o T y NTFIIB o secuencia
a cualquier nucleótido) y se
tores para la ARN polimerasa II. Dichos promotores contienen denomina BREsecuencia
(TFIIB Inr (initiator element).
recognition element),Los está
geneslocalizada
con TATA box entrey secuencia
32 y Inr
A partir de la transcripción en sistemas in vitro y secuenciado de nucleótidos tienen38unsepb pudo
punto de iniciación
corriente arriba dedel
la transcripción
punto de exacta.
inicio y Sin embargo
tiene la algunos genes,
secuencia
básicamente dos regiones o partes: el core y las regiones
determinar laregulatorias.
estructura de los promotores para la ARN polimerasa II. Dichoslos responsables de las reacciones básicas celulares (genes
particularmente
G/CG/CG/CCGCC.
housekeeping) no tienen ninguna de las dos secuencias mencionadas, pero presentan
promotores contienen básicamente
El core del promotor dos regiones
está ubicado o partes: del
en las proximidades el punto
core ydentro
lasElderegiones
core también
las 100 puede
pb corriente tener
arriba la secuencia
del punto DPE (downstream
de inicio, secuencias ricas en CG (islas
regulatorias. de inicio de la transcripción, y contiene una o más secuencias CG) decore 20 apromoter element) con el consenso RGA/TCGTG (donde
50 pb de longitud.
El core del depromotor
[Link]á
La ubicado
más común endelas proximidades
ellas es la secuencia delTATA
punto
box de
Otrainicio
secuencia decomún
R corresponde la del core purina,
a una es la secuencia
A o G)de consenso
ubicada para la unión del factor de
aproximadamente
transcripción,oyCaja
contiene una o más secuenciasdede consenso. La más transcripción
común de 30TFIIB
a +ellas o secuencia
pbescorriente BRE del
abajo (TFIIB recognition
punto element), está localizada entre
de inicio.
de Hogness, una secuencia consenso TATAA (Fig. 3)
32 y 38 pb corriente arriba del punto de inicio y tiene la secuencia G/CG/CG/CCGCC.
la secuencia TATA boxentre
localizada o Caja25 de Hogness,
a 30 una arriba
pb corriente secuencia de consenso
del punto de [Link] Estas(Fig.
El core también 3) tener la
secuencias
puede
(elements) que conforman el core del pro-
secuencia DPE (downstream core promoter element) con
localizada entre 25 a 30 pb corriente arriba del punto de inicio. el consenso RGA/TCGTG (donde R correspondedonde
motor actúan como una plataforma a una se ensambla
purina, A o G) elubicada
complejo basal
aproximadamente a + 30 de la transcripción
pb corriente abajo del o PICde
punto (preinitiation
inicio. complex)
Estas formado
secuenciaspor (elements) que conforman
los distintos factores elTFIIscoreodelGTFspromotor actúan
(general como una
trans-
plataforma donde se ensambla el complejo basal de la
cription factors) y la ARN polimerasa II y permiten una tasatranscripción o PIC (preinitiation
complex) formado por los distintos factores TFIIs o GTFs (general transcription
basal de transcripción. Sin embargo, no todas las secuencias
factors) y la ARN polimerasa II y permiten una tasa basal de transcripción. Sin
señaladas
embargo, no todas lasestán presentes
secuencias enestán
señaladas todos los promotores
presentes para la para
en todos los promotores
la ARN ARN polimerasa
polimerasa II (Fig. II
4).(Fig. 4).

Figura 3. Determinación de la secuencia de consenso del TATA box por

comparación
Figura 3. Determinación desecuencia
de la 900 genes eucariotas
de consenso del(Lodish y col).
TATA box por comparación
de 900 genes eucariotas (Lodish y col).
Mutaciones en dicha secuencia no sólo disminuyen la tasa de
transcripción
Mutaciones en dichasino que no
secuencia también modifican
sólo disminuyen el punto
la tasa de iniciosino
de transcripción deque
la misma,
también modificanelelcual
puntose
de vuelve
inicio de errático.
la misma, el cual se vuelve errático. 5
En En el punto
el punto dealgunos
de inicio iniciopromotores
algunostienenpromotores tienen
la secuencia la secuencia
conservada YYANT/AYY
(donde Y corresponde a cualquier pirimidina, C o T y N a cualquier nucleótido) y se
conservada YYANT/AYY (donde Y corresponde a cualquier
denomina secuencia Inr (initiator element). Los genes con TATA box y secuencia Inr
pirimidina,
tienen un punto deC iniciación
o T y Ndea lacualquier nucleótido)
transcripción y se denomina
exacta. Sin embargo FiguraFigura
algunos genes, 4. Estructura
4. Estructura de un promotor
de un promotor para lapara
ARNlapolimerasa
ARN polimerasa II (Pierce,
II (Pierce, B). B).
particularmente los responsables de las reacciones básicas celulares (genes
housekeeping) no tienen ninguna de las dos secuencias mencionadas, pero presentan
dentro de las 100 pb corriente arriba del punto de inicio, secuencias ricas en CG (islas
13
CG) de 20 a 50 pb de longitud. 6
Otra secuencia común del core es la secuencia de consenso para la unión del factor de
transcripción TFIIB o secuencia BRE (TFIIB recognition element), está localizada entre
32 y 38 pb corriente arriba del punto de inicio y tiene la secuencia G/CG/CG/CCGCC.
 activadoras de la transcripción, las cuales pueden actuar directamente o no (por
intermedio de coactivadores) sobre el complejo basal de la transcripción, aumentando la
tasa de iniciación de la transcripción. También algunos promotores pueden tener
secuencias represoras, a las cuales se unen proteínas que disminuyen la tasa
transcripción.

El core del promotor es suficiente para la expresión de aquellos actuar directamente o no (por intermedio de coactivadores)
genes que se expresan más o menos constantemente (genes sobre el complejo basal de la transcripción, aumentando la tasa
housekeeping). El core del promotor es suficiente para la expresión de aquellos
de iniciación degenes que se expresan
la transcripción. También algunos promotores
más o menos constantemente (genes housekeeping).
La mayoría de los genes que se expresan en forma más se- pueden tener secuencias
La mayoría de los genes que se expresan en forma más selectiva, no solo en espacio
represoras, a las cuales se unen pro-
lectiva, no solo en espacio sino también en tiempo, tienen una teínas
sino también en tiempo, tienen una región regulatoria. que disminuyen la tasa transcripción.
región regulatoria. La región regulatoria del promotor se puede dividir Las secuencias regulatorias
en región proximal y región distales,
distal, en cambio, están locali-
de acuerdo a su cercanía con
La región regulatoria del promotor se puede dividir en región el punto de inicio. zadas más alejadas del punto de inicio. Algunas de estas se-
La regióna regulatoria
proximal y región distal, de acuerdo su cercanía proximal
con el se localiza inmediatamente
punto corriente arriba
cuencias incrementan del core la tasa de transcripción de
notablemente
(hasta unas pocas cientos de pb) y es variable en cuanto al tipo y número de secuencias
de inicio. algunos genes y por ello se denominan enhancers o exaltadores.
de consenso que puede tener (Fig. 5) y a las mismas se pueden unir diferentes proteínas
La región regulatoria proximactivadoras
al se localiza inmediatamente co-
de la transcripción, las cuales puedenLa posición
actuar del enhancerorespecto
directamente no (por del gen que regulan no es
rriente arriba del core (hasta unas pocas
intermedio cientos de sobre
de coactivadores) pb) yelescomplejo crítica y por
basal de ello puedenaumentando
la transcripción, estar a miles la de pares de bases corriente
tasa de de
variable en cuanto al tipo y número iniciación
secuenciasde ladetranscripción.
consenso También algunos
arriba o abajo,promotores
e inclusopueden
dentro tener
de un intrón del gen que regulan
secuencias
que puede tener (Fig. 5) y a las mismasrepresoras,
se puedena unirlas diferen-
cuales se unen proteínas
(Fig. 6). Losque disminuyen
enhancers la tasa
tienen secuencias de consenso que
transcripción.
tes proteínas activadoras de la transcripción, las cuales pueden son reconocidas por proteínas activadoras de la transcripción.

Figura 5. Secuencias de consenso de la región regulatoria proximal de tres genes

eucariotas (Pierce, B).

Las secuencias regulatorias distales, en cambio, están localizadas más alejadas del punto
de inicio. Algunas de estas secuencias incrementan notablemente la tasa de
transcripción de algunos genes y por ello se denominan enhancers o exaltadores. La
posición del enhancer respecto del gen que regulan no es crítica y por ello pueden estar
a miles de pares de bases corriente arriba o abajo, e incluso dentro de un intrón del gen
que regulan (Fig. 6). Los enhancers tienen secuencias de consenso que son reconocidas
por proteínas activadoras de la transcripción.
Figura 5. Secuencias de consenso de la región regulatoria proximal de tres genes eucariotas (Pierce, B).
Figura 5. Secuencias de consenso de la región regulatoria proximal de tres genes
eucariotas (Pierce, B).

Las secuencias regulatorias distales, en cambio, están localizadas más alejadas del punto
de inicio. Algunas de estas secuencias incrementan notablemente la tasa de
transcripción de algunos genes y por ello se denominan enhancers o exaltadores. La
posición del enhancer respecto del gen que regulan no es crítica y por ello pueden estar
a miles de pares de bases corriente arriba o abajo, e incluso dentro de un intrón del gen
que regulan (Fig. 6). Los enhancers tienen secuencias de consenso que son reconocidas
por proteínas activadoras
Figura de lageneral
6. Modelo transcripción.
de un promotor eucariota (Lodish y col).
Figura 6. Modelo general de un promotor eucariota (Lodish y col).
14

7
 2.1.2. La transcripción en eucariotas es un proceso algo complejo
La iniciación de la síntesis del ARN mensajero se produce con la unión de la ARN
polimerasa II al ADN de doble cadena, a nivel del promotor, conjuntamente con las
proteínas que la asisten en dicho proceso. Para que la cadena molde esté disponible para
Los silencersel son secuencias regulatorias
apareamiento de bases distales
con losqueribonucleótidos,
re- La secuencialas de
dosconsenso
cadenas quede conforma
ADN eldebenpromotor de un
gulan la transcripción; de igual modo que los enhancers, gen va a determinar cuándo, dónde y cuánto ese gen va a ser
separarse. El desenrollamiento es local y se produce
pueden estar localizados a miles de pares de bases del gen
a nivel del punto de inicio.
transcripto.
La terminación requiere que todos
que controlan. Sin embargo, cuando las proteínas regulado- los puentes de hidrógeno que mantienen
En las diferentes secuencias que puedenal híbrido
componer el core
ras se unen ARN
a ellos,- la
ADN se rompan,
expresión después
de los genes de lo cual sedel
que controlan vuelve a restituir
promotor se uniránellas
ADN dúplex.
distintos complejos de preiniciación
es [Link] secuencia de consenso que conforma el promotor (PICs) formados
de un genpor los
vafactores generales
a determinar de la transcripción
cuándo,
dónde y cuánto ese gen va a ser transcripto. (GTFs). A las secuencias regulatorias proximales y distales
se unirán distintas proteínas específicas, reguladoras de la
2.1.2. La transcripción en eucariotas es un proceso
algo complejo
En las diferentes secuencias que pueden componer el core
transcripción, del promotor
llamadas represoras se unirán las las cuales
o activadoras,
La iniciacióndistintos complejos
de la síntesis del ARNde preiniciación
mensajero (PICs) formados
se produce por los
en algunos casos factores
se unen al ADNgenerales de lade ARNnc.
por intermedio
con la unión transcripción
de la ARN polimerasa(GTFs). A las
II al ADN secuencias
de doble cadena, regulatorias proximales y distales se unirán
Algunos activadores o represores unidos a las secuencias re-
a nivel del promotor,
distintas conjuntamente con las proteínas
proteínas específicas, que
reguladoras de la transcripción, llamadas represoras las
gulatorias pueden interactuar directamente con o proteínas
la asisten en dicho proceso. Para que la cadena molde esté asociadas al core del promotor o a través de co-reguladores
activadoras, las cuales en algunos casos se unen al7).
(Fig. ADN porco-reguladores
Algunos intermedio de ARNnc.
pueden modificar la estructura
disponible para el apareamiento de bases con los ribonucleó-
Algunos activadores o represores
tidos, las dos cadenas de ADN deben separarse. El desen- unidos a las secuencias regulatorias pueden
de la cromatina de ese gen para permitir interactuar
la transcripción.
directamente con las proteínas
rollamiento es local y se produce a nivel del punto de [Link] al
La core del
regulación promotor
de la o
transcripcióna través
es uno delosco-
de niveles más
reguladores
La terminación requiere que(Fig.
todos7). Algunos
los puentes co-reguladores pueden modificar la estructura de la conceptos
de hidrógeno importantes del control de la expresión génica, estos
que mantienen al híbridodeARN serán mas extensamente tratados en el capítulo 2 (Regulación
cromatina ese- ADN
gen se rompan,
para después
permitir de
la transcripción.
de la expresión génica).
lo cual se vuelve a restituir el ADN dúplex.

Figura 7. Interacción entre diferentes proteínas y factores de transcripción (Fuda y col).

Figura 7. Interacción entre diferentes proteínas y factores de transcripción (Fuda y col).
15

La regulación de la transcripción es uno de los niveles más importantes del control de la

expresión génica, estos conceptos serán mas extensamente tratados en el capítulo de
 reacción es catalizada por la enzima unida a la ARN polimerasa II en su CTD (carboxi
tail domain). En este extremo se pueden agregar uno o más grupos metilos (Fig. 8).
La adición de CAP tiene un significado biológico importante, ya que una vez en el
citoplasma el CAP es el sitio de reconocimiento y unión de IF4E (factor de iniciación de
la traducción).
La síntesis continúa a lo largo del ADN hasta que la enzima
encuentra una secuencia específica de la molécula de ADN,
denominada secuencia terminadora. En este punto la enzima
deja de añadir nucleótidos a la cadena de ARN en crecimien-
to, libera al producto terminado y se disocia del ADN molde.

2.1.3. Procesamiento del pre-ARNm

La transcripción de un ARNm en eucariotas tiene ciertas
particularidades que la diferencian del mismo proceso en
procariotas. Estas diferencias son:

• El extremos 5’ no es un 5’ trifosfato sino una compleja

estructura denominada CAP (caperuza o capping).
• En la mayoría de los ARNm el extremo 3’ tiene una se-
cuencia de ácido poliadenílico denominada cola Poly (A).
• La molécula de ARNm maduro que será traducido es más
corto que el transcripto primario o pre-ARNm. Esto se
debe a que los pre-mARN de eucariotas sufren un proceso
de maduración o splicing donde se eliminan secuencias
no codificantes o intrones. Figura 8. CAP agregado en el extremo 5’ de un ARNm eucariota

Procesamiento de los extremos 5’Figura y 3’ 8. CAP agregado en el (Fitzgerald-Hayes

extremo 5’ and deReichsman).
un ARNm eucariota (Fitzgerald-Hayes
and Reichsman).
Casi todos los ARNm eucariotas sufren una modificación en el La adición de CAP tiene un significado biológico importante,
extremo 5’ inmediatamente después de iniciada la transcripción ya que una vez en el citoplasma el CAP es el sitio de recono-
por el agregado del CAP, el cual tieneLa mayoría
función cimiento yeucariotas
de los ARNm
para el inicio unión de IF4Etienen
(factor deuna
iniciación de la traducción).
secuencia de 20-200 nucleótidos de
de la traducción. La mayoría de los ARNm eucariotas tienen una secuencia de
adenina en el extremo20-2003’. Este segmento terminal de residuos A se denomina cola Poly
nucleótidos de adenina en el extremo 3’. Este seg-
El extremo 5’ de un pre-ARNm podría ser representado como
A. La secuencia Polymento A no está de
terminal codificada
residuos A en el ADN,
se denomina sino
cola Polyque
A. Laes añadida al ARNm
5’-pppNpNpN…., donde cada N representa un ribonucleótido
y p a un fosfato. Un vez iniciada la transcripción, uno de los secuencia Poly A no está codificada en el ADN, sino que es
tres fosfatos del extremo es eliminado y una guanina (G) es añadida al ARNm después de finalizada la transcripción. El
agregada en enlace 5’-5’ de modo que el extremo se trans- corte y agregado de la cola Poly A involucra varias proteínas
o factores. Para que la enzima nuclear Poly A polimerasa 9
forma en 5’-GpppNpNpN….. Esta reacción es catalizada por
la enzima unida a la ARN polimerasa II en su CTD (carboxi (PAP) pueda agregar la Poly A, previamente los factores
tail domain). En este extremo se pueden agregar uno o más responsables del corte reconocen la secuencia AAUAAA
grupos metilos (Fig. 8). denominada sitio de reconocimiento de la poliadenilación

16
que está ubicado a 10-25 nucleótidos upstream del sitio de finalidad eliminar las secuencias no codificantes o intrones.
adición de Poly A (Fig. 9). El splicing ocurre en el núcleo celular, es co-transcripcional
No todos los ARNm están poliadenilados, en células animales y da origen al ARNm que será trasladado al citoplasma para
los ARNm quedespués depara
codifican finalizada la carecen
las histonas transcripción. El cortesery traducido
de secuen- agregadoa proteína
de la cola en losPoly A involucra
ribosomas.
cia AAUAAAvarias proteínas
y de cola o decir
Poly A, es factores. ParaA negativos.
son Poly que la enzimaEnnuclear Poly A de
el procesamiento polimerasa
los pre-ARNm (PAP) pueda superiores
en eucariotas
La fracción agregar
de ARNm la PolyPoly A, previamente los factores responsables del corte reconocen laprimario. Los
A negativos es muy pequeña. se descartan entre el 50% y el 90% del transcripto
La función principal
secuencia de AAUAAA
la cola Poly A es la de aumentar
denominada segmentos remanentes
la reconocimiento
sitio de (exones) son unidos
de la poliadenilación o ensamblados.
que está
estabilidad de los ARNm, y está relacionada con el proceso Esta escisión de los intrones y la formación de una molécula
ubicado a 10-25 nucleótidos upstream del sitiode
de traducción. deARNm
adición de Poly
maduro A (Fig. 9).
por ensamblaje de los exones se denomina
No todos los ARNm están poliadenilados, en células animales
splicing del ARNm. los ARNm que codifican
Procesamiento (Splicing)
para las histonasdecarecen
los precursores de AAUAAA
de secuencia y deel procesamiento
Durante cola Poly A, no essedecir sonlos
eliminan Poly A agregados
grupos
ARNm en los extremos 5’ y 3’. El splicing del ARNm comprende la ro-
negativos. La fracción de ARNm Poly A negativos es muy pequeña.
Todos los precursores
La funcióndeprincipal
ARNm o transcriptos
de la colaprimarios
Poly A esde la detura de los enlaces fosfodiéster en los límites exón - intrón y la
aumentar la estabilidad de los ARNm, y
eucariotas sufren un proceso de maduración que tiene por formación de un nuevo enlace entre los extremos de los exones.
está relacionada con el proceso de traducción.

Figura 9. Corte y agregado de la cola Poly A en el extremo 3’ de un pre-ARNm (Pierce, B).

Figura 9. Corte y agregado de la cola Poly A en el extremo 3’ de un pre-ARNm
(Pierce, B). 17
 del intrón, la conjunción derecha (algunas veces llamada aceptora) se localiza en el otro
extremo.
Una única propiedad común a todas las conjunciones de splicing de una gran variedad
de especies es la existencia de una corta secuencia de consenso.
Estas secuencias de consenso son los sitios de reconocimiento para la maduración,
cuando dichas secuencias sufren determinadas mutaciones puntuales el splicing no se
completa totalmente.
Hay que destacar que otros precursores de ARN también La secuencia de consenso enson
Otras secuencias el extremo 5’ del para
importantes intrónel(dadora)
splicinges yel se
segmento
lo- de
secuencia AG/GURAGU, donde el dinucleótido GU es el que se conserva e inicia la
sufren splicing, por ejemplo los precursores de ARNt de secuencia calizan dentro
intrónica del intrón,
y R designa unapurina.
cualquier de ellas es una secuencia de
levaduras, los pre-ARNr en Tetrahymena, etc. Además no En el pirimidinas, zona rica en C y U,
punto de corte 3’ (aceptora) está la secuenciaubicada conservada
próxima alCAG/G,
extremo donde el
existe un único mecanismo de splicing en la naturaleza que dinucleótido
3’ delAG intrón; en el extremo
es el constante 5’ secuencia
y cierra la del tramo de pirimidinas antes
intrónica.
permite eliminar secuencias intrónicas de distintos precur- Otras secuencias
mencionado son importantes
se ubicapara el splicing
la zona de yramificación
se localizan dentro del intrón, una de
o secuencia
sores de ARN. Estas reacciones de splicing se diferencian ellas esde unalasecuencia
rama. de pirimidinas, zona rica en C y U, ubicada próxima al extremo
3’ del intrón; en el extremo 5’ del tramo de pirimidinas antes mencionado se ubica la
entre sí por requerimiento de energía, enzimas que participan zona deLaramificación
zona de ramificación se presenta en mamíferos con la si-
o secuencia de la rama.
o capacidad del ARN para producir su propio procesamiento La zona guiente secuencia:seYNYURAY,
de ramificación presenta endonde Y designa
mamíferos con launasiguiente
pirimidina,secuencia:
(capacidad autocatalítica). N cualquier
YNYURAY, donde Y nucleótido,
designa unaRpirimidina,
una purina y A es lanucleótido,
N cualquier adenina delR unapunto
purina y A
Se describirá el procesamiento de los pre-mARN en eucario- es la adenina
de ramificación.
del punto deContrariamente a lo observado
ramificación. Contrariamente en mamíferos
a lo observado en mamíferos
tas, los que también se denominan ARN heterogéneo nuclear donde donde esta secuencia tolera cierta tolera
esta secuencia variabilidad y donde
cierta sólo es importante
variabilidad y donde sólo la Adenina,
en levaduras (S. cerevisiae) se presenta la secuencia UAGUAAC, la cual es
(ARNhn) por la variedad en longitud que tienen. es importante la Adenina, en levaduras (S. cerevisiae) se
imprescindible y cualquier mutación en ella ocasiona graves consecuencias para la
La reacción de splicing es marcadamente precisa, esta preci- reacciónpresenta
de [Link] secuencia UAGUAAC, la cual es imprescindible
sión se basa en el reconocimiento de secuencias particulares Resumiendo,
y cualquier mutación
las secuencias delenintrón
ella ocasiona
importantesgraves
para el consecuencias
mecanismo de corte y
ubicadas en las zonas de unión intrón - exón. Estas secuen- empalme para la reacción
en mamíferos sonde
lassplicing.
siguientes:
cias situadas en los sitios de corte y empalme se denominan Resumiendo, las secuencias del intrón importantes para el me-
conjunciones de splicing. Estas secuencias se denominan de canismo de corte y empalme en mamíferos son las siguientes:
acuerdo con su posición en el intrón.
La conjunción izquierda (a menudo llamada donante) se ubica
en el extremo izquierdo del intrón, la conjunción derecha (al-
gunas veces llamada aceptora) se localiza en el otro extremo.
Una única propiedad común a todas las conjunciones de
splicing de una gran variedad de especies es la existencia
de una corta secuencia de consenso.
Estas secuencias de consenso son los sitios de recono-
cimiento para la maduración, cuando dichas secuencias La reacción de splicing se puede dividir en dos etapas. En
sufren determinadas mutaciones puntuales el splicing no se la primera se produce el corte del extremo 5’ del intrón y la
La reacción de splicing se puede dividir en dos etapas. En la primera se produce el corte
completa totalmente. guanina del dinucleótido GU forma un enlace fosfodiéster
del extremo 5’ del intrón y la guanina del dinucleótido GU forma un enlace fosfodiéster
con la deadenina
La secuencia de consenso en el extremo 5’ del intrón (da- con la adenina la zona dede la zona Se
ramificación. deobtienen
ramificación. Se obtienen
dos moléculas intermediarias las
dora) es el segmento de secuencia AG/GURAGU, donde el cuales dos son: elmoléculas intermediarias
exón 5’ (izquierdo) las- lazo
libre y el intrón cuales
- exónson: el exón 5’
3’ (derecho).
dinucleótido GU es el que se conserva e inicia la secuencia (izquierdo) libre y el intrón - lazo - exón 3’ (derecho).
intrónica y R designa cualquier purina. En la segunda etapa se corta el exón que permanecía
En el punto de corte 3’ (aceptora) está la secuencia conserva- unido al intrón - lazo y se une al exón 5’. La secuencia 11
da CAG/G, donde el dinucleótido AG es el constante y cierra originada por unión de exones solamente, es el ARNm
la secuencia intrónica. maduro (Fig. 10).

18
 En la segunda etapa se corta el exón que permanecía unido al intrón - lazo y se une al
exón 5’. La secuencia originada por unión de exones solamente, es el ARNm maduro
(Fig. 10).

Figura 10. El splicing genera un ARNm maduro (Reece, RJ).

Figure 10. El splicing genera un ARNm maduro (Reece, RJ).

En la reacción de splicing participan pequeñas partículas proteínas, y se denominan U1, U2, U4, U5 y U6.
ribonucleoproteicas (snRNPs o small nuclear ribonuclear- La U1 se une a la conjunción izquierda del intrón, y esta
protein particles). Estas snRNPs están formadas por se- unión se produce mediante apareamiento de bases entre el
En la reacción de splicing participan pequeñasextremo
cuencias de 107-210 nucleótidos de largo (pequeños ARN partículas
5’ del ribonucleoproteicas (snRNPs
intrón y la zona 5’(11 nucleótidos) deloARN
nucleares o snRNA), ricos en uracilos, asociados a 6-10 de la snRNP tipo U1. La U2 interactúa mediante aparea-
small nuclear ribonuclearprotein particles). Estas snRNPs están formadas por
secuencias de 107-210 nucleótidos de largo (pequeños ARN nucleares o snRNA), ricos
en uracilos, asociados a 6-10 proteínas, y se denominan U1, U2, U4, U5 y U6. 19
La U1 se une a la conjunción izquierda del intrón, y esta unión se produce mediante
apareamiento de bases entre el extremo 5’ del intrón y la zona 5’(11 nucleótidos) del
miento de bases de una zona del ARN de la partícula con la 2.1.4. Splicing alternativo
secuencia de bases de la zona de ramificación o secuencia
de la rama del intrón. La asociación de estas snRNP U1 y Se denomina splicing alternativo (AS, alternative splicing)
U2 con sus respectivas secuencias de consenso del intrón al mecanismo a través del cual un transcripto primario o
determina la formación del complejo de pre-splicing. No se pre-ARNm puede generar diferentes ARNm maduros y por
conoce si el complejo snRNP U4/U6/U5 interacciona con lo tanto distintas proteínas. Este mecanismo, por lo tanto,
el pre-ARNm mediante apareamiento de bases; si se sabe permite que se generen múltiples ARNm maduros a partir de
que contacta con la secuencia terminal 3’ del intrón. Todas un único gen, lo cual contribuye notablemente a aumentar la
estas snRNP ensambladas sobre el pre-ARNm forman un complejidad del proteoma (conjunto completo de proteínas
complejo denominado spliceosome que es el responsable expresadas por un genoma). La actividad fisiológica de las
de la maduración del pre-ARNm por corte y empalme de proteínas generadas por dicho mecanismo, puede ser la
exones, transformándolo en ARNm maduro (Fig. 11). misma o completamente diferente.

Figura 11. Formación del spliceosome.

Figura 11. Formación del spliceosome.
20

2.1.4. Splicing alternativo

Se denomina splicing alternativo (AS, alternative splicing) al mecanismo a través del
Este mecanismo es muy común en los genomas de eucariotas nucleares (hnRNPs). Algunos silenciadores también actúan
superiores, se considera más una regla que una excepción, generando estructuras secundarias en el pre-ARNm que im-
y es el principal responsable de generar diversidad en las piden que una proteína SR pueda reconocer un potenciador
proteínas sintetizadas por un organismo. Se estima que el de un sitio de splicing vecino.
95 % de los genes humanos presentan splicing alternativo. En cuanto a la regulación del splicing alternativo determi-
Este mecanismo no solamente depende de los factores de nada por la velocidad de elongación de la ARN polimerasa
splicing sino también de secuencias reguladoras del splicing, II, supongamos el ejemplo hipotético de un gen que posee
de la velocidad de elongación de la ARN polimerasa II y de tres exones, por lo tanto generará un pre-ARNm con tres
la estructura de la cromatina (tema que será tratado en el exones y dos intrones. El intrón 2 posee un sitio de consenso
capítulo 3 - Regulación de la expresión génica). (secuencia aceptora) para el splicing denominado débil y en
El splicing alternativo es regulado por secuencias cortas (6-10 el intrón 3 otro fuerte. Cuando la velocidad elongación es
nt) que se3encuentran
se exponen casi simultáneamente alaislada
spliceosome, altaentonces el 2sitio
los intrones y 3 sequeexponen
se utiliza
casipara
simultáneamente al
en exones o intrones, en forma
el(clusters)
splicing yserá spliceosome,del entonces
exón [Link] Porsitio otro
que se utiliza
si para el splicing
o en grupo que el fuerte,
actúan lo que dará
estimulando lugar a la eliminación
(enhancers) lado,
será el fuerte, lo que dará lugar a la eliminación del exón 2.
la polimerasa
o inhibiendo (silencers) elII uso
hacedeuna pausa o es
secuencias de más lenta al Por
splicing transcribir, el primer sitio de consenso
otro lado, si la polimerasa II hace una pausa o es más
en forma que se expone
selectiva. A dichasessecuencias
el débil yseserá
unenreconocido
proteínas por el alspliceosome,
lenta entonces
transcribir, el primer el consenso
sitio de exon 2 que se expone
reguladoras del splicing, denominadas proteínas SR (ricas
queda incluido en el ARNm maduro (Fig. 12). es el débil y será reconocido por el spliceosome, entonces el
en serina y arginina) o ribonucleopreoteínas heterogéneas exon 2 queda incluido en el ARNm maduro (Fig. 12).

Figura 12. Splicing alternativo y velocidad de ARN polimerasa II (adaptado de Kornblihtt, A).
Figura 12. Splicing alternativo y velocidad de ARN polimerasa II (adaptado de
Kornblihtt, A). 21
 2.1.5. Edición de ARNm (RNA editing) de calcio en el cerebro. Se produce la sustitución de A por I
lo que genera el cambio de Glutamina por Arginina en la pro-
Algunos ARNm sufren un procesamiento post-transcripcio- teína, lo que es necesario para que funcione correctamente.
nal que modifica su secuencia antes de ser traducido. La Si ese proceso no ocurre el individuo muere por epilepsia.
edición puede consistir en sustitución, inserción o deleción Otra edición que lleva a cabo ADAR1 es necesaria para el
de nucleótidos. normal desarrollo de la línea hematopoyética.
En los mamíferos hasta ahora se han descripto dos formas Un ejemplo de edición de ARNm bien estudiado en humanos
especiales de edición. Una de ellas es la deaminación enzi- es la apolipoproteína B (apo B) la cual tiene dos isoformas,
mática de la Adenina (A) para producir Inosina (I) en ciertas una corta (2152 aa) y otra larga (4563 aa), ambas codificada
posiciones de los pre-ARNm produciendo modificaciones por el mismo gen. En células intestinales el ARNm es editado
en los patrones de splicing, cambio en el significado de los por una sustitución de C por U, lo cual convierte al codón
codones y además, debido a que la I se une también a la CAA que codifica glutamina por UAA que es un codon de
Citosina, puede resultar en un cambio de aminoácidos en stop, y genera la isoforma corta de apo B responsable de la
la secuencia de la proteína. Este proceso de editing es ca- absorción de lípidos. En cambio el ARNm no es editado en
talizado por la enzima ADAR (deaminasa de adenosina del hígado, donde se traduce la isoforma larga responsable del
ARN). Esta enzima reconoce la estructura de doble hélice transporte de colesterol en sangre.
que se forma en el ARNm entre el sitio que se edita y una
secuencia complementaria localizada en el mismo ARNm
2.1.6. Unidades de Transcripción Simple y Compleja
(generalmente en el extremo 3’ de algún intrón) (Fig. 13). En eucariotas sólo una proteína puede ser traducida de cada
Un ejemplo de edición en los mamíferos se lleva a cabo por molécula de ARNm maduro. Sin embargo, algunos transcrip-
ADAR2 sobre un ARNm que codifica un canal de transporte tos o precursores de ARNm contienen información para más
de una proteína o una secuencia determinada del ADN puede
dar origen a transcriptos primarios diferentes, si se compara
la misma secuencia en distintos tipos celulares.
La secuencia de ADN que sirve de molde a este tipo de pre-
cursor de ARNm es una Unidad de Transcripción Compleja
(UTC), comparada con la Unidad de Transcripción Simple
(UTS) que es la que codifica la misma proteína en todos los
tipos celulares.
Una UTC origina diferentes proteínas en distintos tipos celu-
lares, pero el mismo tipo proteico en un tipo celular particular.
Existen tres alternativas a partir de las cuales una secuencia
de ADN determinada, puede codificar diferentes proteínas en
distintos tejidos:
Figura 13. Mecanismo de edición de A por I en mamíferos.
Figura 13. Mecanismo de edición de A por I en mamíferos.
22

Un ejemplo de edición de ARNm bien estudiado en humanos es la apolipoproteína B

(apo B) la cual tiene dos isoformas, una corta (2152 aa) y otra larga (4563 aa), ambas
 1. Un gen puede poseer más de una secuencia promotora 2. Un gen puede presentar más de una secuencia de
(Uso alternativo de promotores): Cada promotor tendrá sus poliadenilación (Sitios de Poly A alternativos). En estos
propios reguladores tisulares específicos, entonces se produci- varía el sitio de poliadenilación según el tejido considerado,
rán dos transcriptos primarios (pre-ARNm) diferentes en cuanto generando polipéptidos que diferirán en su extremo COOH.
a su longitud en el extremo 5’. Se generan dos polipéptidos que Nótese además en la Figura 15 que el splicing del pre-mARN
FiguraNH2.
diferirán en las secuencias de aminoácidos del extremo 14. Producción
de CGRPde dos polipéptidos
(calcitonin gene relateddistintos a partirrelacio-
peptide ó proteína de dos promotores y
En la Figura 14 se muestra la estrategia para splicing
generar dosdiferentenada
según con
ellatejido.
calcitonina) es alternativo y se elimina el exón 4.
cadenas livianas de miosina: MLC (myosin light chain) a partir
de un mismo gen en tejidos diferentes. Hay dos promotores, 3. Un gen puede presentar splicing alternativo. Hay
por lo tanto se sintetizan dos pre-ARNm diferentes de acuerdo situaciones en que tanto la región promotora como el sitio
al tipo celular. En un tipo celular la ARN polimerasa
2. Un gen puededepresentar
II sintetiza terminaciónmás de la
detranscripción son únicos
una secuencia y por lo tanto, (Sitios de Poly
de poliadenilación
un pre-ARNm a partir del primer promotor (MLC TATA) y en siempre se sintetiza el mismo pre-ARNm
A1 alternativos). En estos varía el sitio de poliadenilación según en todos loseltipos
tejido considerado,
cambio, en el otro tejido la enzima transcribe desde el segun- celulares. Sin embargo, el splicing varía en distintos tipos
generando polipéptidos que diferirán en su extremo COOH. Nótese además en la Figura
do promotor (MLC3TATA) dando origen al pre-ARNm MLC3. celulares, el splicing es alternativo y esto originará ARNm
Además el splicing es diferente en cada tipo de 15 queyaelque
tejido splicingdiferentes
del pre-mARN
(Fig. 16).deLosCGRP (calcitonin
ejemplos gene related
de las Figuras 14 y 15 peptide ó proteína
relacionada
el exón 4 es eliminado del pre-ARNm MLC3 y los exones 2 y con la calcitonina) es alternativo y se elimina el
también corresponden a UTC con splicing alternativo. exón 4.
3 del pre-ARNm MLC1.

Figura 15. Con dos sitios de poliadenilación diferentes (AAUAAA) y

Figura 14. Producción de dos polipéptidos distintos a partir de dos con un
Figura 14. Producción promotores
de dos polipéptidos distintos
según ael partir de dos promotores y patrón de splicing alternativo se obtienen ARNm diferentes en
splicing diferente según el tejido.
y splicing diferente Figura
tejido. 15. Con dos sitios de poliadenilación diferentes (AAUAAA) y con un patrón de
cada tejido.
splicing alternativo se obtienen ARNm diferentes en cada tejido.
23

3. Un gen
2. Un gen puede presentar más de una secuencia de poliadenilación puede
(Sitios presentar splicing alternativo. Hay situaciones en que tanto la
de Poly
A alternativos). En estos varía el sitio de poliadenilación según el tejido considerado,
región promotora como el sitio de terminación de la transcripción son únicos y por lo
 3. Una región o extremo 3´ no traducible o trailer (o 3´ UTR)
que es la secuencia que está más allá del codón de stop.
La comparación de secuencias de UTRs de varias especies
revela que existe cierta conservación en algunos aspectos de
la estructura de dichos extremos. Generalmente el 5’ UTR es
más corto, con un rango promedio de 100 a 200 nucleótidos,
en tanto que el otro extremo es más largo y variable en lon-
gitud, con un promedio de 800 nucleótidos en vertebrados.
También existe diferencia en la composición de bases que
presentan dichas regiones, es común la existencia de se-
cuencias ricas en C+G, pero las mismas son más abundantes
en el extremo 5’UTR, por ejemplo en vertebrados de sangre
Figura 16. Dos modelos de splicing determinan dos ARNm diferentes en caliente, esta relación puede ser 65% a 45% para el 5’UTR
distintos tejidos.
Figura 16. Dos modelos de splicing determinan dos ARNm diferentes en distintos y 3’UTR respectivamente.
tejidos. Los UTRs tienen un rol importante en la regulación post-
El pre-ARNm de la a-tropomiosina puede generar por este transcripcional de la expresión génica, regulando la modula-
mecanismo varios ARNm. ción del transporte del ARNm al citoplasma, su estabilidad,
su localización citoplasmática y la eficiencia en la traducción.
2.1.7. El ARN mensajero maduro La regulación por UTRs está mediada por secuencias o
Características
2.1.7. estructurales
El ARN mensajero maduro motivos localizados en dichos extremos, los cuales pueden
El ARNm maduro sirve de molde para la síntesis de una proteína. Cada aminoácido de
Características estructurales interactuar con proteínas especificas, muchas veces por unión
la proteína esta codificado en un triplete de nucleótidos, denominado codón.
El ARNm maduro sirve de molde para la síntesis de una a estructuras secundarias del ARNm. A dichas secuencias,
Todos los ARNm, inclusive los de organismos procariotas, tienen tres regiones
primarias: proteína. Cada aminoácido de la proteína esta codificado en además de proteínas, también se pueden unir ARNs no co-
un triplete de nucleótidos, denominado codón.
1. Una región 5´ no traducible o líder (o 5´ UTR- untranslated region-) la cual dificantes
no (Fig. 17). Muchas de las proteínas que cumplen
Todospara
codifica losningún
ARNm, inclusive ylos
aminoácido, se de organismos
extiende desde elprocariotas, esta
primer nucleótido hasta función en el citoplasma, participan en el procesamiento
tienendetres
el codón regiones
inicio (AUG).primarias: de los pre-ARNm en el núcleo y son parte del complejo de
2. La 1. Unacodificante
región región 5´ comprende
no traducible unaoserie
líderde
(ocodones
5´ UTR-(tripletes de bases)proteínas
untransla- que heterogéneas nucleares (hnRNPs o heterogeneous
ted region-)
determinan la cual
la secuencia no codifica de
de aminoácidos para
la ningún
proteí[Link]ácido, nuclear ribonucleproteins).
Esta región se extiende
desde un y se extiende
codón desde
de inicio el primer nucleótido
(usualmente AUG) hastahasta el codón
un codón de stop (UAA,
UAG óde UGA) y se
inicio denomina marco de lectura.
(AUG). El transporte del ARNm al citoplasma
3. [Link]ón o extremo 3´ no traducible o trailer
La región codificante comprende una serie de codones(o 3´ UTR) que es la Los ARNm no se encuentran en el núcleo en forma de simples
secuencia
que está(tripletes
más allá dedel bases)
codón de stop.
que determinan la secuencia de ami- cadenas sino que están asociados a complejos proteicos.
noácidos de la proteína. Esta región se extiende desde Desde el inicio de la transcripción se encuentra asociado
La comparación un de secuencias
codón de inicio de(usualmente
UTRs de varias AUG) especies revela
hasta un codónquedeexiste cierta
a las hnRNPs, proteínas de 34 a 120 kDa. Estas contienen
conservación en algunos
stop (UAA,aspectos
UAG ó de UGA)la estructura de dichos
y se denomina extremos.
marco Generalmente
de lectura. el
dominios de unión al mensajero y pueden interactuar con
5’ UTR es más corto, con un rango promedio de 100 a 200 nucleótidos, en tanto que el
otro extremo 24es más largo y variable en longitud, con un promedio de 800 nucleótidos
en vertebrados. También existe diferencia en la composición de bases que presentan
dichas regiones, es común la existencia de secuencias ricas en C+G, pero las mismas
son más abundantes en el extremo 5’UTR, por ejemplo en vertebrados de sangre
caliente, esta relación puede ser 65% a 45% para el 5’UTR y 3’UTR respectivamente.
 cumplen esta función en el citoplasma, participan en el procesamiento de los pre-ARNm
en el núcleo y son parte del complejo de proteínas heterogéneas nucleares (hnRNPs o
heterogeneous nuclear ribonucleproteins).

Figura 17. Estructura general de un ARNm maduro con las regiones que participan en la regulación post-transcripcional de la expresión génica
Figura 17. Estructura general de(adaptado
un ARNm maduro
de Mignone con las regiones que participan en
et al).
la regulación post-transcripcional de la expresión génica (adaptado de Mignone et al).
Referencias: IRES: Internal ribosome entry site, AAUAAA: sitio de poliadenilación, CPE: Cytoplasmic polyadenylation element (secuencia de consenso a
la que se une la proteína CPEB y que participa en la poliadenilación).
Referencias: IRES: Internal ribosome entry site, AAUAAA: sitio de poliadenilación,
otras proteínas. La asociación de las hnRNPs al pre-ARNm damente 0.9 nm, pero complejos mayores no pueden pasar
CPE: Cytoplasmic polyadenylation element (secuencia
evita la formación de estructuras secundarias, además se
de consenso a la que se une la
libremente, sino que deben hacerlo a través del complejo
proteína CPEB
unen en sitios específicos como lasy que participa en
conjunciones dela poliadenilación).
splicing nuclear del poro, y es necesario que contengan una señal
o el sitio de adición de Poly A, permitiendo el reconocimiento de exportación. El mecanismo de transporte del ARNm ma-
de dichas secuencias por los factores de procesamiento del duro ocurre porque a las hnRNPs unidas a él, se asocian a
ARN. También participan en el transporte del ARNm
El transporte del ARNm al citoplasma maduro proteínas exportadoras. Estas transportadoras interactúan
al citoplasma. Los ARNm no se encuentran en el núcleo en forma con el de
complejo delcadenas
simples poro para impulsar
sino al mensajero hacia
que están
El transporte de moléculas desde el núcleo hacia el citoplas- el citoplasma.
asociados a complejos proteicos. Desde el inicio
ma y viceversa requiere el pasaje de estas a través de la
de la transcripción se encuentra
Los mensajeros solo pasan al citoplasma si han completado
asociado a las hnRNPs, proteínas
membrana nuclear. Iones, metabolitos y proteínas menores de 34 a 120 el proceso decontienen
kDa. Estas maduracióndominios
en formade unión Si el mensajero
correcta.
a 60kDa difunden al amensajero y pueden
través de canales de interactuar con otras proteínas.
agua de aproxima- La asociación
no ha madurado de las no
correctamente hnRNPs al
será transportado al cito-
pre-ARNm evita la formación de estructuras secundarias, además se unen en sitios 25
específicos como las conjunciones de splicing o el sitio de adición de Poly A,
permitiendo el reconocimiento de dichas secuencias por los factores de procesamiento
del ARN. También participan en el transporte del ARNm maduro al citoplasma.
plasma, porque las snRNPs quedan unidas a las conjuncio- Los 5’ y 3’ UTRs tienen un rol muy importante en el control
nes de splicing e impiden la unión al complejo transportador. de la traducción. La fase de iniciación de la traducción es la
Cuando el mensajero pasa al citoplasma con intrones, como etapa más importante en el control de dicho proceso. La ma-
se encuentra unido a snRNPs, una deanilasa remueve rápido yoría de los ARNm son traducidos a través de un mecanismo
la cola Poly A, luego es eliminado el CAP y finalmente es denominado “CAP dependiente” que involucra a la subunidad
degradado por exonucleasas. menor del ribosoma y muchos factores de iniciación, los
cuales se unen en el extremo 5’ CAP y realiza el scanning
Regiones UTR de con intrones, como se encuentra unido a snRNPs,hasta
los ARNm y regulación de la expresión el AUG iniciador.
una deanilasa remueveLarápido
longitud del 5’ UTR, la posibilidad
la cola
génica de presentar estructuras
Poly A, luego es eliminado el CAP y finalmente es degradado por exonucleasas. secun darias específicas y la secuen-
Las modificaciones en los extremos 5’ y 3’ UTR tienen un rol cia presente corriente arriba del codón de inicio afectan en
importante en la estabilidad del ARNm, y por lo tanto en la gran medida la eficiencia de la traducción. En general dicha
Regiones UTR de los ARNm y regulación de la expresión génica
vida media del mismo. Se sugiere que la degradación de un eficiencia está negativamente afectada por la presencia de
Las modificaciones en los extremos 5’ y 3’ UTR tienen un rol importante en la
ARNm es precedida por el acortamiento de la cola Poly A y estructuras secundarias estables. Cuando el ARNm pasa al
estabilidad del ARNm, y por lo tanto en la vida media del mismo. Se sugiere que la
la eliminación del CAP. El 3’ UTR de un ARNm de vida media citoplasma toma contacto con el factor de traducción eIF4F
degradación de un ARNm es precedida por el formado
corta presenta secuencias repetidas AU (llamadas ARES-AU
acortamiento de la cola Poly A y la
por tres subunidades. Cada una de las cuales tiene
eliminación del
rich elements), generalmente CAP. las
AUUUA, El 3’ UTR regulan
cuales de un ARNm
el deuna
vida mediadiferente:
función corta presenta
una essecuencias
de unión al CAP (eIF4E o CBC
repetidas AU (llamadas ARES-AU
acortamiento temprano de la cola Poly A en respuesta a seña-rich elements), generalmente AUUUA,
–CAP binding protein-), otra tienelas cuales
acción helicasa (eIF4A) y la
regulan Otro
les intra y extracelulares. el acortamiento
mecanismo que temprano
regula de la cola Poly
la vida últimaA (eIF4G)
en respuesta
puede ainteractuar
señales intra y
con otras proteínas incluso
media y que se haextracelulares. Otro mecanismo
hallado en algunos genes, estáque regula la vidacon
controlado media y que sedehaunión
la proteína hallado
al en algunos
poly A. Además el factor eIF4A
por endonucleasas genes, está controlado
que actúan también enporelendonucleasas que actúan
3’ UTR (Fig. 18). también en con
conjuntamente el 3’elUTR
eIF4B (Fig. 18).que se formen estructuras
impide

Figura 18. Modelos de degradación del ARNm eucariota (adaptado de Lodish et al)

26 Figura 18. Modelos de degradación del ARNm eucariota (adaptado de Lodish et al)

Los 5’ y 3’ UTRs tienen un rol muy importante en el control de la traducción. La fase

 incluye también a los ARNm. Esta asimetría en la distribución de los ARNm en el
citoplasma es sin duda un mecanismo mucho más eficaz que la distribución localizada
de las proteínas, porque un mismo ARNm sirve de molde para la traducción de más de
una molécula proteica. El extremo 3’ UTR también puede tener secuencias que son
reconocidas por otros ARNs (ARNs antisentido y micro ARNs) que tienen la función de
regular o controlar La
secundarias en le extremo 5´, creando una “plataforma” para
la gran
traducción de proteínas.
mayoría de los mensajeros eucariotas poseen Poly
La gran mayoría deA,los
la unión de la subunidad pequeña del ribosoma. mensajeros
la función eucariotas
de la misma no soloposeen Poly
es la de A, la lafunción
aumentar vida de la misma no
solo esde
En esta región también se encuentra una secuencia lacon-
de aumentar
media ladelvida mediasino
mensajero delquemensajero sino que
también interviene también
en el trans- interviene en el
senso que flanquea el primer AUG, (gccrccAUGg, donde R porte al citoplasma y en el proceso de traducción.
transporte al citoplasma y en el proceso de traducción. Múltiples copias del ARNmMúltiples
es usualmente A) la cual modula la eficiencia con la cual es copias del ARNm pueden ser traducidas por polisomas gra-
pueden ser traducidas por polisomas gracias a la Poly A binding protein (PBAPI) que
reconocido el codón de inicio. cias a la Poly A binding protein (PBAPI) que interactúa con
interactúa
Se ha encontrado otro mecanismo de iniciación con la cola
de la traduc- Poly
la cola PolyAA yy conconelelfactor
factor eIF4.
eIF4. Asídos
Así los losextremos
dos extremos
5y 5 y 3’ quedan
cercanos
ción que se denomina “CAP independiente”, en este caso formando un círculo (Fig. 19). De esta manera se
3’ quedan cercanos formando un círculo (Fig. 19). De esta facilita la reiniciación de la
en el extremo 5´ UTR se observan secuencias traducción,
de unión a aumentando
la maneralaseeficiencia de la misma
facilita la reiniciación de la traducción, aumentando
subunidad pequeña del ribosoma (IRES-Internal Ribosome la eficiencia de la misma
Entry Site-) en este caso el ribosoma es transportado direc-
tamente a dicha región del ARNm directamente por factores
ITAFs (IRES trans actin factors), sorteando el barrido o scan-
ning. Secuencias IRES se han hallado en muchos ARNm que
codifican proteínas reguladoras, como por ejemplo factores
de crecimiento y sus receptores, o factores que responden a
la apoptosis o respuestas inducidas frente a estrés.
Secuencias presentes en el extremo 3’ UTR están involucra-
das en el proceso de localización citoplasmática del ARNm,
las cuales pueden formar estructuras secundarias que son
reconocidas por complejos proteicos involucrados en el
transporte del ARNm a través de microtúbulos y filamentos
de actina. La localización citoplasmática del ARNm tiene un
rol principal en el desarrollo y la diferenciación celular. El ci-
toplasma se caracteriza por tener una distribución asimétrica Figura 19. El ARNm es traducido simultáneamente por varios ribosomas
de sus moléculas y esta particularidad incluye también a los (Polisomas) (Lodish y col).
ARNm. Esta asimetría en la distribución de Figura
los ARNm19. en El
el ARNm es traducido simultáneamente por varios ribosomas (Polisomas)
citoplasma es sin duda un mecanismo mucho (Lodish
más y col).
eficaz 2.2. ARNs no codificantes
que la distribución localizada de las proteínas, porque un Los ARN no codificantes (ARNnc) participan en críticos
mismo ARNm sirve de molde para la traducción de más de procesos moleculares de las células eucariotas, como es la
una molécula proteica. El extremo 3’ UTR 2.2. también
ARNs puedeno codificantes
replicación del ADN (la ADN polimerasa requiere cebadores
tener secuencias que son reconocidas por otros ARNs (ARNs de ARN para iniciar el proceso), la replicación de los telóme-
antisentido y micro ARNs) que tienen la función LosdeARN
regularnoo codificantes (ARNnc)
ros (producida por una participan en críticos
transcriptasa procesos moleculares de las
reversa -telomerasa-
controlar la traducción de proteínas. células eucariotas,asociada
como aesunlamoldereplicación
de ARN), del ADN el(laARN
el splicing, ADN polimerasa requiere
editing,
cebadores de ARN para iniciar el proceso), la replicación de los telómeros (producida
por una transcriptasa reversa -telomerasa- asociada a un molde de ARN),
27 el splicing, el
 Soria, Liliana A; Motter, Mariana M. y Huguet, Miguel J.

la traducción y la regulación de la expresión génica a nivel ARNnc pequeños (sncRNAs)

transcripcional y post-transcripcional. -ARNt y ARNr
Estos dos tipos de ARNnc están involucrados directamente
Tipos de ARNnc y su función en el proceso de traducción: los ARNt transportan los ami-
El reciente avance en las tecnologías de secuenciación de noácidos al ribosoma durante la síntesis proteica y los ARNr
ácidos nucleicos ha permitido obtener nuevos conocimien- forman parte de los ribosomas. Estos últimos son los ARNs
tos sobre el genoma y el transcriptoma de los mamíferos. El más abundantes de las células. En eucariotas cada ribosoma
análisis global de los transcriptos generados por una célula, está formado por 4 ARNr diferentes, tres (18S, 5.8S y 28S)
a partir de experimentos de secuenciación masiva de ARN generados por clivaje y modificación química de un único y
(RNA-Seq), ha revelado que la mayoría del genoma eucariota largo ARNr precursor y el cuarto (5S) a partir de una molécula
es transcripto (~ 90%) y que sólo una pequeña fracción (~ 2 simple que no sufre modificación química post-transcripcional
%) de los transcriptos sintetizados por una célula es codifi- y es sintetizado por la ARN polimerasa III, en tanto que los
cante (ARNm), es decir que la mayoría corresponde a ARNs restantes los sintetiza la polimerasa I. Las modificaciones
no codificantes de proteínas o ARN no codificantes (ARNnc). post-transcripcionales que sufre el precursor de ARNr están
Estos ARNnc tienen un rol importante en la regulación de la catalizadas por un grupo de ARNnc denominados pequeños
transcripción, el procesamiento y estabilidad de los ARNm y ARN nucleolares (snoRNA-small nulceolar RNA), los cuales
la traducción. están codificados en intrones de otros genes, son transcrip-
De acuerdo a su longitud, los ARNnc se pueden clasificar en tos por la ARN polimerasa II y generados a partir de intrones
ARN pequeños o cortos (sncRNA o small non-coding RNA escindidos post-splicing.
con menos de 300 nt) y largos (lncARN o long non-coding En las células eucariotas usualmente existen múltiples copias
RNA, 300 nt ó más). de genes para ARNt, los que son transcriptos por la ARN
La mayoría de los ARNnc pequeños se clasifican de acuerdo polimerasa III como un precursor, el que es procesado para
a su función molecular, por ejemplo: ARN de transferencia generar un ARNt maduro. Este procesamiento incluye clivaje,
(ARNt) que actúa como el adaptador que sirve de puente splicing (porque algunos genes para ARNt poseen intrones)
entre el codon del ARNm y el aminoácido, pequeños ARN nu- y editing (adición y modificaciones de bases).
cleares (snRNAs) y pequeños ARNs nucleolares (snoRNAs)
que actúan como guía para el procesamiento y modificación -Micro ARNs (miRNAs): Son ARNnc de aproximadamente 23
de otros ARNs y microARN que regulan la traducción de los nucleotidos (nt) de longitud que regulan cientos de miles de
ARNm. genes (codificantes y no codificantes) a nivel post-transcrip-
La mayoría de estas moléculas presenta un complejo y pre- cional, mediante un mecanismo de silenciamiento, tanto en
ciso patrón de expresión durante el desarrollo y la diferen- animales como en plantas. Están altamente conservados y
ciación celular, son tejido–específico y muchas veces están aproximadamente un 40% de los mismos está codificado en
asociados a estados fisiopatológicos diversos. intrones de otros genes, en tanto que la mayoría se localiza
A continuación se describe brevemente las particularidades en regiones intergénicas y tienen su propio promotor. Son
de cada estos ARNnc y su función: ARN de cadena simple, sintetizados mayoritariamente por

28
 nucleasa, llamada DICER, formándose un mi-RNA doble cadena de 19 a 25 pb. Estos
ARN doble cadena se unen a RISC, un complejo enzimático que separa las hebras y
permite la unión del mi-RNA al extremo 3´ de los ARNm con los que presenta
complementariedad. De esta manera, el sistema miRNA-RISC bloquea la expresión de
los genes por medio de una inhibición de la traducción de sus mensajeros (Fig. 20).
la ARN polimerasa II como un precursor largo (pri-miRNA)
que presenta complementariedad interna en su secuencia.
Esta complementariedad forma bucles los cuales son reco-
nocidos y cortados por una RNAsa III, denominada Drosha,
generando un pre-miRNA de aproximadamente 70 pares de
bases (pb), los cuales con exportados al citoplasma. En el
citoplasma los pre-miRNA son procesados por otra nuclea-
sa, llamada DICER, formándose un mi-RNA doble cadena
de 19 a 25 pb. Estos ARN doble cadena se unen a RISC,
un complejo enzimático que separa las hebras y permite la
unión del mi-RNA al extremo 3´ de los ARNm con los que
presenta complementariedad. De esta manera, el sistema
miRNA-RISC bloquea la expresión de los genes por medio de
una inhibición de la traducción de sus mensajeros (Fig. 20).
Estos ARNs están involucrados en múltiples procesos (me-
tabolismo, desarrollo, respuesta inmune, etc.) e incluso en
humanos se los ha encontrado involucrados en el desarrollo
de patologías como el cáncer. Recientemente se ha descu-
bierto que el fenotipo “doble músculo” en ovinos de la raza
Texel está determinado por una mutación que crea un sitio de
unión a un miARN en el 3’ UTR del ARNm de la miostatina,
concepto que será tratado con más detalle en el punto 2.3.2.

-Pequeños ARN de interferencia (siRNA): tienen 20-30 nt

de largo y surgen de la degradación de ARN doble cadena
(ARNdc) de origen exógeno, por ejemplo proveniente de al-
Figura 20. Origen y función de los miARNs y siARNs (He y col).
gunos virus. Cuando un ARNdc ingresa en la célula, éste es
clivado por DICER y unido a RISC como ARN de interferencia
Figura 20. OrigenLos
y función
snRNAsde los miARNs
forman parte de ylas siARNs
snRNPs(He y col).
(small nuclear
de simple cadena. Dicho siRNA, al ser complementario a ribonuclearprotein particles) que participan en el splicing de
mensajeros extraños, va a unirse a ellos, degradándolos por los pre-ARNm.
medio del clivaje que realiza RISC (Fig. 20). Los ARNr ribosomales (5,8S, 18S y 28S) se generan a partir
Estos ARNs están de uninvolucrados
precursor común, en elmúltiples procesos
cual es procesado para(metabolismo,
originar desarrollo,
-Pequeños ARNs nucleares (snRNAs) y pequeños respuesta inmune,los
ARNs nu- etc.)
ARNr e individuales,
incluso en los humanos
que su vezse son
los sometidos
ha encontrado
a modi-involucrados en el
cleolares (snoRNAs): son ARNnc que “guían” modificaciones
desarrollo de patologías como el cáncer. Recientemente seExisten
ficaciones covalentes (ej.: 2'-O-metilación de ribosas). ha descubierto que el
de otros ARNs. Se originan a partir de intrones. dos clases
fenotipo “doble músculo” endeovinos
snoRNAsde laque dirigen
raza Texelesas
estámodificaciones
determinado por una mutación
que crea un sitio de unión a un miARN en el 3’ UTR del ARNm 29 de la miostatina,
concepto que será tratado con más detalle en el punto 2.3.2.
“sitio-específicas” de los ARNr, un grupo es responsable de decir que estos ARNnc tendrían un papel importante en la
la maduración y otro de las modificaciones covalentes. regulación de la expresión génica a nivel epigenético. Tam-
bién tendrían como función silenciar o suprimir a elementos
-Piwi ARNs (piRNAs): tienen una longitud de 26-31 nt y el transponibles del genoma.
nombre se debe a su interacción con la proteína Piwi, la
cual está involucrada en la gametogénesis. A diferencia de ARNnc largos (lncRNAs)
los miRNA y siRNA, los cuales se expresan en una gran Es un grupo de ARNnc muy heterogéneo, transcriptos por
diversidad de tejidos y células, los piRNA se han detectado la ARN polimerasa II o III. Están codificados en regiones
sólo en las células germinales de los mamíferos. Otra par- intergénicas, en intrones de genes que codifican proteínas o
ticularidad es que no involucran precursores doble cadena su secuencia puede estar superpuesta (en el mismo sentido
(ARNdc) y son sintetizados por la ARN polimerasa III. Diver- o en sentido contrario, sense y antisense respectivamente)
sas investigaciones en ratones sugieren que participan en con la secuencia correspondiente a un ARNm (Fig. 21). Algu-
la regulación de la metilación del ADN a nivel germinal, es nos tienen estructura semejante a un ARNm, con intrones y

Figura 21. Localización genómica de los lncRNAs (adaptado de Ma et al, 2013).

30 Figura 21. Localización genómica de los lncRNAs (adaptado de Ma et al, 2013).

Los lncRNA, y debido a su capacidad de reconocer secuencias complementarias, actúan

 Genoma y genes eucariotas: Aspectos estructurales y funcionales

modificaciones químicas en los extremos 5’ y 3’ (CAP y Poly transcripción o enhancers (paRNA, TSSaRNA y eRNA respec-
A respectivamente). tivamente), reconocen y se unen a las secuencias de consenso
Los lncRNA, y debido a su capacidad de reconocer secuencias de dichas regiones formando estructuras triplex ADN:ARN a
complementarias, actúan como reguladores de la expresión partir de las cuales ejercen su función regulatoria (Fig. 22).
génica a diferentes niveles. A nivel epigenético, mediando Una explicación más detallada del control de la expresión
los cambios a nivel de la cromatina, a nivel transcripcional, génica mediada por lncRNAs será tratada en el capítulo 3
modulando la actividad de factores de transcripción o a nivel (Regulación de la expresión génica).
post-transcripcional, regulando el procesamiento de los ARNm
en diferentes etapas (splicing, degradación, transporte o tra-
ducción), tema que será tratado en capítulos siguientes.
2.3 Mutaciones de Punto
De acuerdo al lugar donde cumplen su función regulatoria 2.3.1 Tipos de mutaciones de punto y sus
pueden ser clasificados como cis o trans lncRNAs. El primer consecuencias
tipo actúa regulando genes vecinos (localizados sobre el mis-
mo cromosoma), el segundo tipo actúa a distancia. Se han Las mutaciones son cambios en la secuencia de nucleótidos
descrito varios lncRNAs que actúan en cis, uno de los más del ADN, los cuales pueden alterar la funcionalidad de una
estudiados en el Xist (X inactive-specific transcript) un lncRNA proteína, cuando se localizan en una región codificante del
(19 kb de longitud en humanos) que tiene su secuencia en el gen. Estas alteraciones pueden involucran solo un par de
cromosoma X. El mismo que promueve las modificaciones bases, en cuyo caso se denominan mutaciones de punto.
químicas y estructurales de la cromatina responsables del Las causas que las provocan pueden ser las radiaciones
silenciamiento parcial de los genes de uno de los cromosomas ultravioletas, altas temperaturas, radiaciones ionizantes,
X de las hembras por heterocromatinización. compuestos químicos, y a veces por errores en la replicación
Algunos lncRNAs se asocian a promotores, sitio de inicio de la y/o reparación del ADN.

Figura 22. Los lncRNAs que regulan la transcripción en cis son producidos desde diferentes orígenes (Guil & Esteller, 2012).
Figura 22. Los lncRNAs que regulan la transcripción en cis son producidos desde
diferentes orígenes (Guil & Esteller, 2012). 31

2.3 Mutaciones de Punto

  Mutación sin sentido: El reemplazo de una base por otra determina el cambio de
un codón codificante por un codón de stop, por ejemplo: CAG (Gln) UAG
(stop). Este tipo de sustitución generalmente altera gravemente la estructura y
función de una proteína porque crea codones “prematuros o anticipados”, y
cuanto más cerca del extremo 5 se encuentre el nuevo codón de stop, mayor
Los dos tipos de mutaciones de punto que existen son:
serásusti-
el cambio secuencia reguladora
que presente del splicing
la cadena lo que provoca
polipeptídica graves
en estructura y función.
tuciones y adiciones o deleciones. La primera se trata de un consecuencias.
 Mutación que
reemplazo de una base por otra y en el caso de las adiciones
corre el marco de lectura: Una inserción o una deleción (InDel)
• Mutación de sentido erróneo: El reemplazo determina el
o deleciones, lo que sucede es que se pierde o sedeterminan
gana un el corrimiento del marco
cambio de un codón de lectura,
que codificaba como
para un se explico anteriormente.
aminoácido
Es uno de los tipos más graves de mutación porque modifica todos los codones
nucleótido. Este último tipo de mutaciones se las denomina por otro codón que codifica un aminoácido diferente.
en conjunto InDels (por inserción y deleción). De acuerdo a la naturaleza química de los aminoácidos
desde el punto de la mutación has el codón de stop, generando muy
que se sustituyen, este tipo de mutaciones se puede
Las sustituciones, de acuerdo al tipo de reemplazo que se
probablemente
produce, se pueden clasificar en dos subtipos: transición o una proteína afuncional.
transversión. Una transición es un reemplazo de una purina
por otra purina (ej; A→G) o de una pirimidina por otra pirimi-
dina (ej: C→T). En cambio, una transversión es el cambio
opuesto, es decir es el reemplazo de una purina por una
pirimidina o viceversa (ej: A→C).
A una sustitución también se la puede denominar SNP (Single
Nucleotide Polymorphism).
Resumiendo las mutaciones a nivel del ADN pueden ser
clasificadas como Transiciones, Transversiones e InDels.
Las sustituciones y los InDels tienen diferentes consecuencias
cuando se localizan en la región codificante de un gen. Una
sustitución no corre el marco de lectura del ARNm, porque
al tratarse del reemplazo de una base por otra, no modifica
los codones comprendidos entre el AUG y el codón de stop,
solo determina un cambio puntual en un codón. En cambio
un InDel causa un corrimiento del marco de lectura, desde el
punto donde se localiza hasta el extremo 3’, causando como
grave consecuencia la modificación de todos los codones
desde ese punto, lo que generalmente provoca que la proteína
sintetizada resulte afuncional.
Por lo tanto, también se pueden clasificar a las mutaciones
de acuerdo al cambio que producen a nivel de la proteína
(Fig. 23). De acuerdo a esto, los tipos de mutaciones son:
• Mutación silenciosa: Cambia un codón por otro, pero
ambos codifican el mismo aminoácido, por ejemplo: AGG
Figura 23. Consecuencias
(Arg) → AGA (Arg), por lo tanto no hay cambio alguno
de algunos tipos de mutaciones de punto
Figura 23. Consecuencias de algunos tipos de mutaciones de punto
localizadas dentro
a nivel de la proteína. No obstante, a del
vecesmarco
alterande lectura (Griffiths
una y col).
localizadas dentro del marco de lectura (Griffiths y col).

32

2.3.2 Implicancias de las mutaciones de punto

Una mutación de punto, es un cambio a nivel del ADN, sin embargo no necesariamente
 subdividir en dos tipos: conservativa y no conservativa. nomas humanos, se hallaría en promedio una sustitución por
Una sustitución conservativa es aquella en la que ambos cada 300 ó 1000 pb, según se trate de regiones no codificantes
aminoácidos son del mismo tipo, por ejemplo: AAA (Lys, o codificantes respectivamente, debido a que estas últimas son
básico) → AGA (Arg, básico). En cambio, en las no con- mas conservadas.
servativas, la naturaleza química de los aminoácidos no Si bien se explico anteriormente que los InDels son un tipo de
es la misma, por ejemplo: UUU (Phe, hidrofóbico) → UCU mutación muy grave, porque altera grandemente la secuencia de
(Ser, polar). Es fácil deducir que este último tipo de muta- la proteína sintetizada, algunas mutaciones de sentido erróneo
ción de sentido erróneo es la que generalmente provoca pueden provocar la falta de funcionalidad de la proteína, tal es
severos cambios en la funcionalidad de una proteína. el caso de una mutación de este tipo en el gen de la b-globina
• Mutación sin sentido: El reemplazo de una base por humana. Como se muestra en la Figura 24, una transversión de
otra determina el cambio de un codón codificante por un T → A, determina una mutación de sentido erróneo, la cual altera
codón de stop, por ejemplo: CAG (Gln) → UAG (stop). la estructura de la hemoglobina y la morfología de los eritrocitos,
Este tipo de sustitución generalmente altera gravemente lo que provoca una patología denominada anemia falciforme.
la estructura y función de una proteína porque crea codo- Las mutaciones son importantes porque pueden causar
nes “prematuros o anticipados”, y cuanto más cerca del enfermedades, como así también pueden generar variantes
extremo 5’ se encuentre el nuevo codón de stop, mayor fenotípicas poco deseables en atributos de importancia
será el cambio que presente la cadena polipeptídica en económica. En animales un ejemplo de esto último podrían
estructura y función. ser las mutaciones halladas en el gen que codifica un factor
• Mutación que corre el marco de lectura: Una inserción o de crecimiento involucrado en el desarrollo muscular, la
una deleción (InDel) determinan el corrimiento del marco miostatina (o GDF8 o growth differentiation factor 8), un
de lectura, como se explico anteriormente. Es uno de regulador negativo del desarrollo muscular. En dicho gen se
los tipos más graves de mutación porque modifica todos han hallado hasta el momento, cinco mutaciones diferentes
los codones desde el punto de la mutación has el codón en tipo y localización (Fig. 25), las cuales son frecuentes
de stop, generando muy probablemente una proteína en algunas razas bovinas de origen europeo continental.
afuncional. Todas ellas provocan una alteración grave en la estructura
y la función de la miostatina, lo que determina un fenotipo
2.3.2 Implicancias de las mutaciones de punto denominado “doble músculo” o hipertrofia muscular bovi-
Una mutación de punto, es un cambio a nivel del ADN, sin na. La carne de animales con mutaciones en dicho gen
embargo no necesariamente va alterar al fenotipo, debido se caracteriza por tener menor calidad, fundamentalmente
a que las mismas no siempre se localizan en regiones co- por ser menos tierna y menos jugosa.
dificantes ni regulatorias, se estima que aproximadamente Se conoce que a perros de la raza Collie y sus cruzas, no se
1/3 se localizan en exones y el resto en intrones, regiones les puede suministrar ciertas drogas o se debe disminuir la
regulatorias o intergénicas. dosis de las mismas (ej ivermectina), esto es porque usual-
Es importante destacar que las mutaciones son relativamente mente en estos animales dichas drogas atraviesan la barrera
frecuentes en el ADN, se estima que si se comparan dos ge- hemato-encefálica debido a la pérdida de la función de una

33
en la Figura 24, una transversión de T A, determina una mutación de sentido erróneo,
la cual altera la estructura de la hemoglobina y la morfología de los eritrocitos, lo que
provoca una patología denominada anemia falciforme.

Figura 24. Sustitución de sentido erróneo en el gen de la b-globina humana (Fitzgerald-Hayes and Reichsman).

Figura 24. Sustitución de sentido erróneo en el gen de la -globina humana (Fitzgerald-

Hayes
proteína and Reichsman).
de membrana (gen MDR1 o multi-drog resistance). infecciones bacterianas causadas por una disminución de la
La causa de la pérdida de función de dicha proteína es una adhesión de los neutrófilos. Una simple transición A→ G en
deleción de 4 pb en el exon 4 del gen MDR1 (también llamado el gen que codifica al CD18 (proteína de adhesión) causa el
gen de resistencia a multidrogas). Los animales que presen- cambio del aminoácido en el codón 128 (Gly→ Asp) y causa
tan esta sensibilidad son homocigotas para dicha mutación. dicha enfermedad la cual cursa con fiebre, diarreas, anorexia,
Las mutaciones son importantes porque pueden causar enfermedades, como así también
La misma no solo corre el marco de lectura sino que también infecciones, causando la muerte entre las 7 semanas y los 8
pueden generar variantes fenotípicas poco deseables en atributos de importancia
genera un codón de stop “prematuro”, por lo que la proteína meses de los animales afectados.
no es funcional (Fig. 26). A veces pueden existir consecuencias fenotípicas de las
económica. En animales un ejemplo de esto último podrían ser las mutaciones halladas
Otro ejemplo de enfermedad causada por una mutación es mutaciones, aún cuando las mismas no se localicen en las
en el gen que codifica un factor de crecimiento involucrado en el desarrollo muscular, la
BLAD (Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency) en bovinos regiones codificantes. Un ejemplo de una sustitución loca-
es una enfermedad que se presenta en el ganado bovino de lizada en una región regulatoria de la expresión génica, es
miostatina (o GDF8 o growth differentiation factor 8), un regulador negativo del
la raza Holstein y se caracteriza por severas y recurrentes el caso citado anteriormente en el punto 1.2.2, referido a la
desarrollo
34
muscular. En dicho gen se han hallado hasta el momento, cinco mutaciones
diferentes en tipo y localización (Fig. 25), las cuales son frecuentes en algunas razas
bovinas de origen europeo continental. Todas ellas provocan una alteración grave en la
estructura y la función de la miostatina, lo que determina un fenotipo denominado
 Figura 25. Representación grafica del gen de la miostatina bovina y la localización de
Figura 25. Representación grafica del gen de la miostatina bovina y la localización de los distintos tipos de mutaciones halladas en distintas razas
los distintos tipos de mutaciones halladas en distintas razas bovinas (Karim, L y col).
bovinas (Karim, L y col).

característica “doble músculo” en ganado Texel. En este caso Muchos rasgos fenotípicos (incluidas enfermedades) han sido
una transición de G → A en el 3’ UTR del ARNm de la miosta- estudiados a nivel molecular, conociéndose en la actualidad
tina. Se
Estaconoce quecrea
sustitución a perros de lala unión
un sitio para raza Collie y sus cruzas,
de un miARN el tipono se les puede
de mutación que lo suministrar
determina. Una ciertas
base de datos ac-
(altamente expresado en músculo y denominado mi-R 206) el tualizada sobre este
drogas o se debe disminuir la dosis de las mismas (ej ivermectina), esto es porque tema está disponible en la página web
cual reduce drásticamente la traducción de dicho mensajero de la OMIA (Online Mendelian Inheritance in Animals): http://
usualmente
y causa la hipertrofiaen estosenanimales
muscular dichas
ovinos de dicha drogas atraviesan
raza ovina. la barrera hemato-encefálica
[Link].
debido a la pérdida de la función de una proteína de membrana (gen MDR1 o multi-
drog resistance). La causa de la pérdida de función de dicha proteína es una deleción de 35
4 pb en el exon 4 del gen MDR1 (también llamado gen de resistencia a multidrogas).
Los animales que presentan esta sensibilidad son homocigotas para dicha mutación. La
misma no solo corre el marco de lectura sino que también genera un codón de stop
 Los animales que presentan esta sensibilidad son homocigotas para dicha mutación. La
misma no solo corre el marco de lectura sino que también genera un codón de stop
“prematuro”, por lo que la proteína no es funcional (Fig. 26).

Figura 26. Deleción de 4 pb en el gen MDR1 en Collie (Roulet, A y col).

Figura 26. Deleción de 4 pb en el gen MDR1 enKarim

Collie (Roulet,
L, Coppieters W, Grobet L,A y col).
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36
 CAPÍTULO 2

Organización del ADN

en la cromatina

37
Organización del ADN en la
cromatina
Marrube, Graciela

La cromatina eucariota es una estructura altamente organi- tridimensional del ADN consiste en dos cadenas enrolladas
zada, formada por ADN y proteínas, que contiene la mayor una sobre otra constituyendo una doble hélice. Las bases
parte de la información genética del individuo. La misma se están dispuestas una sobre otra formando lo que se llama
organiza como cromosomas dentro del núcleo celular. apilamiento. La distancia entre una base y otra de la misma
cadena es de 3, 4 Å.
Cada una de las cadenas tiene un eje que está formado por
1. Estructura de la cromatina eucariota desoxirribosas, que están unidas entre sí por una molécula
de fosfato constituyendo un enlace 3’-5’ fosfodiéster. Las
Los componentes mayoritarios de la cromtina son: ADN, bases están unidas a la desoxirribosa por medio de una
histonas, ARN y proteínas no histónicas. Como componen- unión covalente.
tes minoritarios se encuentran lípidos, iones, etc. Los com- El eje azúcar-fosfato se encuentra hacia afuera de la molé-
ponentes químicos mayoritarios del cromosoma eucariota cula y las bases nitrogenadas que son hidrofóbicas, están
se presentan en las siguientes proporciones: ADN (35 %), orientadas hacia adentro de la misma.
Proteínas histónicas (35 %), no histónicas (20 %) y ARN La estructura de doble hélice exige que cada base de una
(10%). El ADN junto a las proteínas histónicas constituyen cadena se aparee específicamente por medio de enlaces
una desoxirribonucleoproteína que forma del 60 al 90 % de no covalentes (puentes de hidrógeno) con una base com-
la masa cromatínica total. plementaria de la otra cadena. El apareamiento de bases
complementarias debe producirse entre una base púrica
(con dos anillos) y una pirimidínica (con un solo anillo). El
1.1 ADN (ácido desoxirribonucleico)
mayor número de puentes de hidrógeno se producen cuan-
do se unen citosina con guanina. Entre estas bases pueden
1.1.1 Estructura del ADN formarse tres enlaces, en cambio entre adenina y timina se
Los estudios de Watson y Crick y el uso de la técnica de forman sólo dos, lo que determina que esta unión sea más
difracción de rayos X, determinaron que la conformación débil que la anterior.

39
 El diámetro de la doble hélice es constante (20 Å), debido Bioquímicamente podemos decir que la concentración de pu-
transcripción del amismo, ya que
que se mantiene pordistancia
la misma complementariedad
entre base y base de se rinas
sintetizará
es igual a la una
de pirimidinas, {(A+G) = (C+T)}. En general
hebra hija o un ARN
cada a partir
una de lasde una hebra
cadenas. (Fig. 1). molde o patrón. los pares de bases están dispuestos en un ángulo de 36°
con respecto al par adyacente, por lo tanto hay 10 pares de
bases (pb) por cada vuelta de hélice (360°), en denominada
Left handed o ADN tipo
estructura Z: Presenta
B. Lo más lasimportante
siguientes endiferencias con respecto
la composición del al Right
handed ADN:
ADN es la complementariedad de bases que es fundamental
 El para
eje azúcar - fosfatoyse
la replicación la dispone en forma
transcripción de zig zag
del mismo, de ahí
ya que porsu nombre.
 Porcomplementariedad
cada vuelta de hélice hay 12 pb. una hebra hija o un ARN
se sintetizará
 Este tipo de
a partir de ADN presenta
una hebra estrías
molde de igual tamaño.
o patrón.
 La forma Z de ADN puede presentarse en zonas hipermetiladas o
1.1.2 Topología
deberse a la acción del deADNproteínas que cambian la conformación
topológica del ADN.
Las cadenas de ADN pueden enrollarse una sobre otra en senti-
El ADN tipo Z se opresenta
do horario in Esto
antihorario. vivodetermina
bajo ciertas condiciones,
que existan en general se
dos varian-
presenta tes
en de
regiones
ADN, el que se enrolla en sentido horario se denomina dGC y poli
donde hay determinadas secuencias: poli
dTG, especialmente
Right handedsiADN,
las Cy laestán metiladas;
otra variante es elademás
llamado seLeftpresenta
handed cuando la
estructuraADN
general
o ADNdeZ, la
quedoble héliceenadopta
se enrolla sentido una disposición
antihorario (Fig. 2).especial en el
espacio.

Figura 1. Esqueleto azúcar fosfato y apareamiento de bases por

complementariedad y su estabilización por puentes de Hidrógeno Figura [Link]
Los ácidos nucleicos
2. Los ácidos pueden
nucleicos puedenformar
formar varios tipos
varios tipos dede dobles hélices
dobles
(imagen extraída de la Web) (imagen
hélices extraída
(imagen extraídade
dela
la Web)
Web)
Figura 1. Esqueleto azúcar fosfato y apareamiento de bases por comple-
mentariedad y su40estabilización por puentes de Hidrógeno (imagen
1.1.3 extraída
Modificaciones de del ADN: Metilación
químicas
la Web) La metilación del ADN es un proceso dinámico eficientemente regulado, las
secuencias no metiladas pueden metilarse y los grupos metilo pueden
perderse, por lo que los patrones de metilación de las células somáticas son el
 parece ser crucial para mantener la conformación e integridad de los
cromosomas. También se ha sugerido que la metilación constituye un
mecanismo de defensa del genoma contra elementos genéticos móviles
Rigth handed ADN: En esta variante la doble (transprosones).
hélice presenta En el genoma de los vertebrados la modificación en la mo-
dos estrías o depresiones, una mayor y otraLa reacción
menor, que se de metilación
lécula del ADNdelseADN es por
produce catalizada
la adición por las ADN
enzimática de unmetiltransferasas
e involucra
producen por la disposición espiralada del eje azúcar - fosfato. la transferencia del grupo
grupo metilo al carbono metilo
5 de las de la
citosinas. adenosil-
La mayoría de L-metionina al
En estas estrías pueden unirse proteínas que carbono
interactúan5 con
de la las 5-metilcitosinas
citosina. En células(5mC)deenmamíferos
el ADN de mamíferos
se han están
identificado enzimas
las bases del ADN. Este modelo puede presentar dos tipos presentes en los dinucleótidos -CpG- Aproximadamente
de organización, el ADN tipo B y el ADN tipo A.
diferentes que llevan a cabo esta reacción, clasificadas en dos grupos: las ADN
el 60 a 90% de todas las secuencias CpG dispersas en el
Las características de cada uno son: metiltransferasasgenoma de están
mantenimiento (DNMT1)
metiladas, mientras y las metilasas de novo
que las correspondientes
(DNMT3A
Las bases en el tipo B están dispuestas formando un ánguloy DNMT3B).
a las islas CpG localizadas en la mayoría de los genes de
de 90° con el eje azúcar - fosfato, en cambio La
en elacción
ADN A lasde las ADN metiltransferasas
mantenimiento celular no lo están de(Fig.
mantenimiento determina que el
3). En general, las
bases forman ángulos de 20° con el eje. islas CpG se localizan entre la
ADN recién sintetizado sea metilado durante la replicación,región central del promotor
y por esta razón los
En el ADN B hay 10 pb por vuelta de hélice, mientras que en de un gen y el sitio de inicio de la transcripción del mismo,
el ADN A tiene 11 pb por vuelta. patrones son heredados observándosede una en
represión manera
la expresiónsemiconservativa
del gen cuando se y pueden ser
El ADN tipo B es la forma que se encuentra con perpetuados
más frecuen- en encuentran
la población celular. Las ADN metiltransferasas con actividad
hipermetiladas.
cia en células de organismos superiores. de novo (DNMT3A y DNMT3B)
Generalmente adicionan
la metilación un grupo
en secuencias metilodea la citosina del
reguladores
Left handed o ADN Z: Presenta las siguientes dinucleótido
diferencias con CpGlos genes tales como promotores, pontenciadores,
no metilado, creando un nuevo CpG altamente y re- hemimetilado.
respecto al Right handed ADN: presores suprime su función. La metilación en regiones no
• El eje azúcar - fosfato se dispone en forma de zig zag de codificantes, como la heterocromatina centromérica, parece
ahí su nombre.
• Por cada vuelta de hélice hay 12 pb.
• Este tipo de ADN presenta estrías de igual tamaño.
• La forma Z de ADN puede presentarse en zonas hiperme-
tiladas o deberse a la acción de proteínas que cambian
la conformación topológica del ADN.
El ADN tipo Z se presenta in vivo bajo ciertas condiciones,
en general se presenta en regiones donde hay determinadas
secuencias: poli dGC y poli dTG, especialmente si las C están
metiladas; además se presenta cuando la estructura general de
la doble hélice adopta una disposición especial en el espacio.

1.1.3 Modificaciones químicas del ADN: Metilación

La metilación del ADN es un proceso dinámico eficientemente
regulado, las secuencias no metiladas pueden metilarse y
los grupos metilo pueden perderse, por lo que los patrones
de metilación de las células somáticas son el resultado de
procesos de metilación y desmetilación. Figura 3. Metilación del ADN (imagen extraída de la Web)
Figura 3. Metilación del ADN (imagen extraída de la Web)
41

1.2 Histonas
Las histonas son proteínas básicas de bajo peso molecular, ricas en lisina y
ser crucial para mantener la conformación e integridad de nan un grupo metilo a la citosina del dinucleótido CpG no
los cromosomas. También se ha sugerido que la metilación metilado, creando un nuevo CpG altamente hemimetilado.
constituye un mecanismo de defensa del genoma contra
elementos genéticos móviles (transprosones). 1.2 Histonas
La reacción de metilación del ADN es catalizada por las Las histonas son proteínas básicas de bajo peso molecular,
ADN metiltransferasas e involucra la transferencia del grupo ricas en lisina y arginina, carecen de triptófano y, salvo H3,
metilo de la adenosil- L-metionina al carbono 5 de la cito- tampoco tienen cisteína. Mediante fraccionamiento químico
sina. En células de mamíferos se han identificado enzimas fue posible identificar distintos grupos: ricas en lisina (H1),
diferentes que llevan a cabo esta reacción, clasificadas en levemente ricas en lisina (H2A y H2B) y ricas en arginina
dos grupos: las ADN metiltransferasas de mantenimiento (H3 y H4). La distribución de los aminoácidos básicos que
(DNMT1) y las metilasas de novo (DNMT3A y DNMT3B). la componen no es aleatoria. La estructura de las histonas
La acción de las ADN metiltransferasas de mantenimien- presenta un núcleo con un extremo amino terminal, que
to determina que el ADN recién sintetizado sea metilado se extiende hacia fuera del nucleosoma (Fig. 4 y 5). Estos
durante la replicación, y por esta razón los patrones son
de correlación entre la asociación de unextremos amino tipo
determinado de las
dehistonas
histonapueden
con unsufrir varias modifi-
heredados de una manera semiconservativa y pueden ser caciones covalentes por procesos de meti
determinado tipo de ADN. Por otra parte, se sabe que las histonas actúanlación, acetilación
perpetuados en la paumentando
oblación celular
el. Las ADN metiltransfe-
plegamiento y fosforilación.
y condensación Estos del
de la molécula cambios
ADN químicos
y que el controlan varios
rasas con actividad de novo (DNMT3A y DNMT3B) adicio- aspectos degénica.
la estructura de la cromatina y pueden inducir
ADN condensado no posee o posee escasa función

Figura 4. Estructura de las diferentes histonas (Alberts y col. 2002)

42
Figura 4. Estructura de las diferentes histonas (Alberts y col. 2002)
variación de la expresión génica (ver “Código de histonas” proteínas que forman el esqueleto del cromosoma tendrían
en el capítulo 3). una relación permanente con la cromatina.
La asociación del ADN con las histonas se produce median-
te uniones iónicas que vinculan los grupos básicos de las
histonas con los grupos ácidos del ADN. Este tipo de enlace 2. Estructura de la cromatina: Niveles de
es inespecífico y por lo tanto no parece sugerir algún tipo de
correlación entre la asociación de un determinado tipo de
plegado
histona con un determinado tipo de ADN. Por otra parte, se El plegado del ADN es importante en las células eucariotas
sabe que las histonas actúan aumentando el plegamiento por dos razones:
y condensación de la molécula del ADN y que el ADN con- Es esencial para disponer las grandes moléculas de ADN
densado no posee o posee escasa función génica. en forma ordenada dentro del núcleo celular.
La manera exacta como se pliega una región del genoma
1.3 Proteínas no histónicas de una célula en particular determina la actividad de los
Esta fracción proteica es soluble en álcalis, rica en triptofano genes de esta región.
y abarca un 20 % de la masa cromosómica. Las proteínas
no histónicas se pueden dividir en: 2.1 Ultraestructura de la fibrilla de cromatina
• Proteínas ácidas Mediante la observación por microscopía electrónica se
• Proteínas residuales (proteínas que permanecen en el descubrió a la hebra de cromatina como la repetición de
precipitado después de la extracción de las histonas y estructuras globulares, los nucleosomas, de 126 Å de
de las proteínas ácidas) diámetro regularmente dispuestos como las cuentas de
• Enzimas. un collar sobre una fibra de 25 que desaparece con el
Algunas de estas proteínas se asocian con la cromatina tratamiento con nucleasas, permitiendo aislar las partículas
en diferentes momentos de la vida celular, como las ADN y globulares formadas por las histonas H2A, H2B, H3, H4 y
ARN polimerasas, proteínas involucradas en la replicación el ADN en proporciones equivalentes en peso (Proteína/
y transcripción del ADN y las proteínas reguladoras géni- ADN: 0,97). Al degradar la cromatina con proteinasa K se
cas. Todas ellas son proteínas no histónicas que poseen confirmó el modelo donde la cromatina está formada por
alta selectividad de especie y de órgano, encontrándose en unidades que se repiten en forma regular (los nucleoso-
mayor concentración en las zonas del ADN con actividad mas) constituidos por 200 pares de bases (pb) de ADN y
génica. Por consiguiente se supone que una de las fun- un octámero formado por dos moléculas de cada de las
ciones de éstas es la activación de los genes, ya sea por histonas mencionadas, constituyendo la fibra nucleosómica
desplazamiento de la combinación del ADN con las histo- o fibra de 11 nm
nas o por desplazamiento de otras moléculas represoras. El nucleosoma está formado por dos componentes: la mé-
Otras proteínas no histónicas como las HMG (Proteínas de dula y el ligador (ADN linker). Por digestión con nucleasas
alta movilidad) parecen tener una asociación permanente pudo observarse la longitud variable del ADN ligador, así
a la cromatina y se cree que poseen un rol estructural. Las como que la histona H1 reacciona con él. La médula está

43
la cromatina está formada por unidades que secuencias
se repiten en específicas
forma regular (losdel ADN, las cuales formarán el cuello del bucle
nucleosomas) constituidos por 200 pares de cromatina
bases (pb) detranscripcionalmente
ADN y un octámero activa en el estadio de G1 de la interfase
formado por dos moléculas de cada de las histonas mencionadas,
encuentra organizada como fibra de 30 nm. Sin embargo, la cromatina d
constituyendo la fibra nucleosómica o fibra de 11 nm
enrollarse
El nucleosoma está formado por dos componentes: más
la médula para(ADN
y el ligador que pueda entrar en el núcleo celular. Se denom
linker). Por digestión con nucleasas pudo observarse la longitud variable del
ADN ligador,formada
así como
eucromatina aLa médula
todas estálas zonas de menor condensación de la croma
por que la histona
146 pares H1 (pb)
de bases reacciona con él.(H2A,
y el octámero ordenada (Fig.6). Otro mecanismo involucrado en la forma-
formada por H2B,
146 pares dex 2bases
H3, H4) (pb) y elcarentes
(Fig. 5). octámero (H2A,de H2B,
heteropicnosis
H3, H4)
ciónxdel en ointerfase,
2 solenoide que
fibra de 30 nm son se encuentra
los extremos amino organizada c
(Fig. 5).
una fibra de 30 nm yproduciendo
en bucles (Fig.8 y 9).
de las histonas que se extienden de un nucleosoma a otro
un mayor nivel de plegado (Fig.7 A y B).

Figura [Link] 5. Esquema de un nucleosoma (imagen extraída de la Web)

Esquema de un nucleosoma (imagen extraída de la Web)
2.2 Niveles superiores de plegamiento
2.2 Niveles superiores
En una célula deviva
plegamiento
los nucleosomas se empaquetan uno
sobre otro adoptando
En una célula viva los nucleosomas disposiciones regulares
se empaquetan en sobre
uno las queotro
el adoptando
ADN se encuentra más condensado, formando una
disposiciones regulares en las que el ADN se encuentra más condensado, fibra de
formando unacromatina
fibra de de 30 nm o solenoide
cromatina de 30 nm(Fig.8). Las histonas
o solenoide (Fig.8).H1Las
son histonas H1
responsables
son responsables del empaquetamiento
del empaquetamiento de losde los nucleosomas
nucleosomas en laenestructura de
la estructura de fibra de 30 nm. En la molécula de la histona
fibra de 30 nm. En la molécula de la histona H1 se puede diferenciar una región
H1 semuy
globular central, puede diferenciar una
conservada región globular
evolutivamente y central, muy
los extremos amino y
conservada evolutivamente y los extremos amino y carboxilo
carboxilo terminales con mayores variaciones de secuencia. La unión de la
terminales con mayores variaciones de secuencia. La unión
histona H1 al nucleosoma se realiza mediante la región globular, mientras que
de la histona H1 al nucleosoma se realiza mediante la región
globular, mientras que los extremos entran en contacto con
Figura 6. Rol de la histona
otros lugares del centro de las histonas o de los nucleoso- H1
Figur6a 6. Rol de en el
la histona H1 enempaquetado del nucleosoma (Albert
el empaquetado del nucleosoma
mas adyacentes, permitiendo que se empaqueten en forma col. 2002)
(Alberts y col. 2002)

44
 histonas. B: Formación de la fibra de 30 nm por interacción de los extremos
amino de 7.
Figura histonas de nucleosomas
A: Nucleosoma adyacentes
mostrando (Alberts
los extremos amino ysobresalientes
col. 2002) de las
histonas. B: Formación de la fibra de 30 nm por interacción de los extremos
amino de histonas de nucleosomas adyacentes (Alberts y col. 2002)

Figura 7. A: Nucleosoma mostrando los extremos amino sobresalientes

Figura 7. A: de
Nucleosoma
las histonas. B:mostrando los
Formación de la extremos
fibra amino
de 30 nm por sobresalientes
interacción de los de las
histonas. B: Formación de la fibra de 30 nm por interacción de los extremos
extremos amino de histonas de nucleosomas adyacentes (Alberts y col.
2002)
amino de histonas de nucleosomas adyacentes (Alberts y col. 2002)
El siguiente nivel de organización es unaFigura 8. Asociación de la H1 y formación del solenoide (imagen extraída de
serie de dominios la
estructurales en forma de bucles. Se ha sugerido la hipótesis
Figura 8. Asociación de la H1 y formación Web) del solenoide (imagen extraída de la
que las zonas con bucles de la cromatina se establecen y Figura 8. Asociación de la H1 y formación del solenoide (imagen
mantienen por proteínas que se unen al ADN, que unen dos
Web)
extraída de la Web)

regiones de la fibra de 30 nm posiblemente reconociendo

unas secuencias específicas del ADN, las cuales formarán el
cuello del bucle. La cromatina transcripcionalmente activa en
el estadio de G1 de la interfase se encuentra organizada como
fibra de 30 nm. Sin embargo, la cromatina debe enrollarse
más para que pueda entrar en el núcleo celular. Se denominó
eucromatina a todas las zonas de menor condensación de la
cromatina, carentes de heteropicnosis en interfase, que se
Figura 8. Asociación
encuentra de la H1 y formación
organizada del solenoide
como una fibra de 30 nm y(imagen extraída de la
en bucles
(Fig.8 y 9). Web)

2.3. El cromosoma durante la división celular

Figura 9. Dominios en forma de bucles (Alberts y col. 2002)
Figura
Durante la división celular, luego de la fase S, y a [Link]
Dominiosen en forma
forma de de bucles
bucles(Alberts
(Albertsy ycol.
col. 2002)
2002)
que avanza la misma, no hay síntesis de ARN y existe una
estricta correlación entre la condensación cromatínica y la de serina diferentes. Se requiere la presencia de unas proteí-
inactividad transcripcional ya que los cromosomas presentan nas denominadas condensinas que utilizan la energía de la
el mayor grado de enrollamiento. El empaquetamiento de los hidrólisis del ATP para producir el enrollamiento (formación
[Link].
cromosomas va acompañado de una fosforilación El El
de cromosoma
cromosoma
todas durante
durante
de loops)
la división
de los la
divisióndurante
cromosomas
celular
celularla progresión del ciclo
las moléculas de histonas H1 de las células enDurante
Durante la división celular, luego de la fase S,
la
cinco residuos división
celularcelular,
(Fig.10 y luego
11). de la fase S, yya amedida medidaque avanza
que la
avanza la
misma,lnolnohay
misma, haysíntesis
síntesis de
de ARN
ARN yy existe
existe una
una estricta
estrictacorrelación entre la
Figura 9. Dominios en forma de bucles (Alberts y col. 2002) 45correlación entre la
condensación cromatínica
condensación cromatínica yy lala inactividad
inactividad transcripcional
transcripcionalyayaquequelos los
cromosomas presentan el mayor grado de enrollamiento. El empaquetamiento
cromosomas presentan el mayor grado de enrollamiento. El empaquetamiento
de los cromosomas va acompañado de una fosforilación de todas las
2.3. El cromosoma durante la división celular de los cromosomas va acompañado de una fosforilación de todas las
armazón es de origen proteico no histónico, consistente en dos unidades
fibrosas, una por cromátide, unidas en el centrómero de forma que mantienen
la relación de brazos (morfología del cromosoma).

A) Nucleosomas

B) Fibra cromatínica
de nucleosomas
(solenoide)

C) Sección extendida
de un cromosoma

Figura 10. Ciclo de condensación y descondensación de los

Figura 10. Ciclo de condensación y descondensación
cromosomas (De Robertis 1º ed) de los cromosomas (De D) Sección condensada
Robertis 1º ed) de un cromosoma

Durante la metafase las dos moléculas hijas del ADN están

plegadas por separado dando lugar a dos cromátides herma-
nas unidas por el centrómero. Estos cromosomas están cu-
biertos por diversas moléculas, incluidas grandes cantidades
de ribonucleoproteínas. Una vez eliminada esta estructura,
E) Cromosoma
puede verse que cada cromátide está organizada en bucles metafásico
de cromatina, que proceden de un eje central que se extiende
a lo largo del cromosoma. Este armazón es de origen proteico Figura 11. Distintos niveles de plegamiento de la cromatina (Alberts y col.
Figura 11. Distintos niveles de plegamiento de la cromatina (Alberts y
no histónico, consistente en dos unidades fibrosas, una por 2002)
col. 2002)
cromátide, unidas en el centrómero de forma que mantienen
la relación de brazos (morfología del cromosoma).
3. Estados de lademostrado
ción han cromatina durante
que la G1
doble hélice de ADN adopta en
Los genes se organizan
la superficie en dominios
del nucleosoma unacromosómicos
posición muytranscripcionalmente
precisa, de
3. Estados de la cromatina durante G1 activosmodo
e inactivos. Estudios
que ciertos de alta
pares resolución
de bases han demostrado
se disponen con el que la doble
surco
Los genes se organizan en dominios cromosómicos trans- hélice mayor del ADN con topología B expuesto hacia el exterior muy
de ADN adopta en la superficie del nucleosoma una posición
precisa, de modo que ciertos pares de bases se disponen con el surco mayor
cripcionalmente activos e inactivos. Estudios de alta resolu- del ADNdel con
nucleosoma,
topología Ben tanto que
expuesto otros
hacia se hallan
el exterior del en orientación
nucleosoma, en tanto
que otros se hallan en orientación contraria, es decir con el surco mayor
46 dirigido hacia el interior del nucleosoma y por lo tanto inaccesible u ocultas.
Esto permite suponer que la posición precisa de la doble hélice determinaría el
acceso de proteínas y factores de transcripción a las secuencias reguladoras.
Aunque todo el ADN de los nucleosomas puede interactuar libremente con
moléculas pequeñas, su accesibilidad frente a moléculas de mayor tamaño
 contraria, es decir con el surco mayor dirigido hacia el interior determinada por su secuencia de nucleótidos, perpetuando
del nucleosoma y por lo tanto inaccesible u ocultas. Esto así su comportamiento genético (expresión o silenciamiento)
permite suponer que la posición precisa de la doble hélice en las células hijas.
determinaría el acceso de proteínas y factores de transcrip-
proteínas, algunas regiones de la cromatina presentarán una distribución de los Las secuencias que permiten el mantenimiento de la croma-
ción a las secuencias reguladoras.
nucleosomas no aleatoria dejando al descubierto aquellas secuencias de ADN tina en estado activo son: los delimitadores y los elementos
Aunque todo el ADN de los nucleosomas puede
que deben ser reconocidas por otras proteínas de la célula (Fig.12). De estainteractuar de control del locus.
libremente
forma la cromatina activacon moléculas
estaría formadapequeñas,
por unasu accesibilidad
fibra de 30 nm frenteque presenta
3.1 Delimitadores
irregularidadesa debido
moléculasa lade mayor tamaño
presencia de zonasestalibres
necesariamente
de octámeros restrin-
(ADN libre),
sitios a los gida por la
cuales presencia
pueden de octámeros
unirse proteínasde reguladoras,
histonas. Puesto que
formando Los límites entre cromatina activa e inactiva están constituidos
los
elementos de la localización
control de (ver
del locus las cuentas
3.2). nucleosómicas podría afectar por los elementos frontera o delimitadores (insulators). Están
a la expresión
Una particularidad de este tipo génica
de yorganización
a otros procesos
de laalestructura
interferir en dellaADN en formados por secuencias de nucleótidos de 0,5 a 3 kb de
cromatina es unión
que del
se ADN y otrascon
heredaría proteínas, algunas
facilidad regiones
durante de la cro-
la división celular longitud,
al a las que se le unen proteínas nucleares (Fig.13).
formarse los matina presentarán
nucleosomas una distribución
en las dos nuevasdemoléculas
los nucleosomas
de ADN. no Estas Estos “insulators” serían responsables de la formación y el
adoptarían laaleatoria
posición determinada
dejando por aquellas
al descubierto su secuencia
secuenciasde nucleótidos,
de ADN mantenimiento de un dominio o región en la que se encuen-
perpetuando asíquesu comportamiento
deben ser reconocidas genético (expresión
por otras proteínaso desilenciamiento)
la célula en
tran genes transcripcionalmente activos. Por lo tanto estos
las células hijas.
(Fig.12). De esta forma la cromatina activa estaría formada delimitadores pueden ser definidos como elementos que
Las secuencias por que permiten
una fibra de 30 nmel mantenimiento de la cromatina
que presenta irregularidades debidoena estado tienen la capacidad de proteger a los genes de influencias
activo son: losladelimitadores
presencia de yzonas
los elementos de control(ADN
libres de octámeros del locus.
libre), sitios regulatorias no deseadas presentes en el ambiente cromo-
a los cuales pueden unirse proteínas reguladoras, formando sómico. Para ello pueden actuar como bloqueadores de la
los elementos de control del locus (ver 3.2). acción de enhancers o como barrera para el silenciamiento
génico producido por la heterocromatina.
Proteínas de unión a secuencias de ADN
específicas

Fibra de
30 nm

nucleosoma

Figura 12. onas libres de nucleosomas en la fibra de 30 nm por la

presencia de proteínas reguladoras (Alberts y col. 2002)
Figura 12. Zonas libres de nucleosomas en la fibra de 30 nm por la presencia
de proteínas reguladoras (Alberts y col. 2002)
Una particularidad de este tipo de organización de la estruc-
tura del ADN en cromatina es que se heredaría con facilidad
durante la división celular al formarse los nucleosomas en las Figura 13. Esquema del mecanismo de acción de un delimitador
dos nuevas moléculas de ADN. Estas adoptarían Figura 13. Esquema del mecanismo
la posición de yacción
(Recillas Targa col. 2004) de un delimitador (Recillas
Targa y col. 2004)
3.1 Delimitadores
47
Los límites entre cromatina activa e inactiva están constituidos por los
elementos frontera o delimitadores (insulators). Están formados por secuencias
3.2 Elementos de control del locus
de nucleótidos de 0,5 a 3 kb de longitud, a las que se le unen proteínas
nucleares (Fig.13). Estos “insulators” serían responsablesLas
de laregiones
formación de
y el control del locus (LCR o Locus Control Region) son
Figura 13. Esquema del mecanismo de acción de un delimitador (Recillas
Targa y col. 2004)

3.2 Elementos de control del locus

3.2 Elementos de control del locus 4. Remodelado de la cromatina
Las regiones de Las control del locus (LCR o Locus
regiones de control del locus (LCR o Locus Control Re- Control Region) son
Durante los últimos años se ha comenzado a demostrar
secuencias de ADNgion) quesoncontienen
secuencias de múltiples sitios de
ADN que contienen unión
múltiples para las
sitios que proteínas
la organización de la cromatina juega un rol crítico en
activadoras de la transcripción, formando un sitio abierto en la cromatina
de unión para las proteínas activadoras de la transcripción, la regulaciónquede la transcripción, fundamentalmente porque
formando un sitio abierto en la cromatina que es fácilmente
es fácilmente identificado por el corte por ADNsa I (sitios de hipersensibilidad
identificado por el corte por ADNsa I (sitios de hipersensibili-
los nucleosomas a son normalmente represores de la síntesis
de ARN. Sin embargo, la estructura de la cromatina es muy
a DNasa). Los LCR dad están formados
a la DNasa). generalmente
Los LCR están por grupos
formados generalmente por de sitios de
dinámica y pasa por una constante y muy dinámica remode-
hipersensibilidad engrupos
zonas de del
sitiosgenoma que abarcan
de hipersensibilidad en zonasde del200
genomaa 600 pb donde
lación se tanto a la activación como a la represión
que conduce
que abarcan de 200 a 600 pb donde se ve favorecida la unión
ve favorecida la unión de los factores de transcripción debido a que el ADN Hasta el momento, por lo menos dos
de los factores de transcripción debido a que el ADN está libre
de la transcripción.
mecanismos altamente conservados han sido descriptos
está libre de octámeros de histonas.
de octámeros Estos
de histonas. Estos LCRLCRposeenposeen una actividad
una actividad que
como responsables de dicho remodelado del genoma eu-
favorece la aperturaquedefavorece
la cromatina
la aperturaade nivel del dominio.
la cromatina a nivel del Ambas
dominio. actividades
cariota, son:son1) complejos de remodelaje de la cromatina
Ambas actividades son tejido específicas. Se han propuesto
tejido específicas. Se han propuesto varios modelos que
varios modelos que tratan de explicar la función de un LCR.
tratan deATP explicar la y 2) código de histonas o modificaciones
dependientes
post-traduccionales de las histonas. Existen evidencias que
función de un [Link] Enel modelo
el modelo de formación
de formación de un asa
de un asa o “looping” o “looping”
(Fig. 14) el (Fig. 14)
indican que ambos mecanismos actúan en forma conjunta
el LCR actuaría como un holocomplejo
LCR actuaría (proteínas
como un holocomplejo (proteínasactivadores
activadores unidas
para lograra elsus
control de la transcripción.
unidas a sus secuencias consenso) para estimular la trans-
secuencias consenso) para estimular la transcripción de genes acercando
cripción de genes acercando al promotor del gen que se va
al
4.1 Complejos de remodelaje ATP
promotor del gen que se va
a activar poramedioactivar por medio
de la formación de unde
asalaqueformación
contribuye dedependientes
un asa que
contribuye a aumentar la concentración
a aumentar la concentración de la demaquinaria
la maquinaria
transcripcionaltranscripcional de
La disposición de los nucleosomas en el ADN es dinámica,
manera específica. de manera específica.
cambiando rápidamente de acuerdo a las necesidades de
las células. Se han descripto una serie de complejos multi-
proteícos ATP dependientes cuya función es la de liberar a
dichas secuencias de su unión con histonas, desplazando o
re-posicionando los nucleosomas. Estos desplazamientos
ocurren a distancias cortas y sin que los nucleosomas se
disocien por completo de sus interacciones con el ADN.
Existen en las células diferentes complejos de remodelaje
que actúan en los procesos de transcripción, replicación o
reparación del ADN. A nivel de la transcripción estos com-
plejos actúan mediante interacciones con cofactores y son
Figura 14. Elemento de control de locus permitiendo la
Figura 14. Elemento de control de locus permitiendo la interacción entreinteracción
capaces de entre
regular la expresión génica tanto positiva como
factores de transcripción y las secuencias promotoras (Recillas Targa y col.
factores de transcripción y las secuencias
col. 2004)
promotoras (Recillas Targa y negativamente.
2004)
48
 El estado de remodelado puede ocurrir por diferentes meca- de algún factor transcripcional se oculten con la consiguiente
nismos como reposicionamiento, eliminación, adición, desen- represión de ese gen.
rrollamiento del nucleosoma y por desplazamiento del dímero Como un ejemplo de estos complejos se pueden mencionar
H2A y H2B. El tetrámero H3-H4 es particularmente estable a CHD1 (helicasa con cromodominio de unión a ADN 1) de
y difícil de disociar (Fig. 15). También ocurre lo opuesto, es los mamíferos. Esta proteína está conformada por diferentes
decir estos complejos pueden actuar reposicionando a los dominios: región con función ATPasa (cuando está activa),
nucleosomas de tal forma que las secuencias para la unión región con función de unión al ADN (a través del reconoci-

Figura 15. Acción de los complejos de remodelaje ATP dependientes en la

Figura 15. Acción de los complejos de remodelaje ATP dependientes en la estructura de la cromatina (Clapier y col. 2009)
estructura de la cromatina (Clapier y col. 2009)

49
miento de H3K4m3 o lisina 4 trimetilada de H3), región con cambios químicos pueden regular la organización y el funcio-
función helicasa y otra responsable de la translocación nu- namiento de la cromatina. Las modificaciones de las histonas
cleosómica (Fig. 16). tienen lugar una vez que se han ensamblado en el nucleo-
soma y son producidas por enzimas que se localizan en el
4.2. Modificaciones post-traduccionales de las núcleo celular. Las modificaciones no afectan la estabilidad
histonas o Código de histonas del nucleosoma pero si afectan la estabilidad de la fibra de
Los nucleosomas constituyen la principal estructura de la 30 nm y a niveles de plegamiento de mayor orden. Por ejem-
cromatina y se modifican durante los diferentes estadios plo la acetilación remueve las cargas positivas de las lisinas
celulares. Las regiones amino terminales de las histonas haciendo más difícil que las histonas neutralicen las cargas
sobresalen de la estructura globular del nucleosoma y pre- negativas del ADN. Sin embargo el efecto más importante de
sentan cambios post-traduccionales los cuales aumentan o las modificaciones de las colas de histonas es que pueden
debilitan las uniones de estas proteínas básicas con el ADN. reclutar otras proteínas a estas regiones. De acuerdo a la
Estas histonas son ricas en residuos de lisina, los cuales son naturaleza del cambio estas proteínas adicionales pueden
Figura 15. Acción de los complejos relajar de remodelaje ATP dependientes en la
o compactar a la cromatina. Las combinaciones de
blanco de modificaciones covalentes tales como acetilación,
estructura de la cromatina (Clapier
metilación, fosforilación, ubiquitinación y sumoilación. Estos y col. 2009)
diferentes tipos de modificaciones forman parte de proce-

FiguraFigura [Link]
16. Diferentes Diferentes dominios
de la proteína de la
de remodelaje ATPproteína
dependientede remodelaje
CHD1 ATP dependiente
en mamíferos (Clapier y col. 2009)
CHD1 en mamíferos (Clapier y col. 2009)
50

4.2. Modificaciones post-traduccionales de las histonas o Código de

histonas
 sos como activación o inactivación de un gen, segregación 5. Heterocromatina
positivas dedelas lisinas haciendo
cromosomas másdeldifícil
o el control que lasSehistonas
ciclo celular. conocen neutralicen
a las
cargas negativas del ADN. Sin embargo el efecto más
todas estas modificaciones como: “código de histonas” (Fig. importante de las
Se propuso el término de heterocromatina para designar a
modificaciones
17). de
Laslas colas de histonas
modificaciones es que puedenfavorecen
post-traduccionales reclutar otras
la proteínas
aquellas regiones de los núcleos en interfase o telofase que
a estas regiones. De acuerdo
comunicación a la naturaleza
entre nucleosomas del cambio
modificando y regulandoestas proteínas
muestran un mayor grado de condensación y un incremento
adicionales localmente
pueden relajar o compactar
la estructura a la cromatina.
de la cromatina, Las de
tanto a nivel combinaciones
un de (heteropicnosis positiva). Representa el 10% apro-
de tinción
diferentes tipos de modificaciones
dominio forman parte
e incluso de un cromosoma de procesos como activación
completo. o
ximadamente del genoma en mamíferos. Una de las funcio-
inactivación Diferentes
de un gen, segregación
modificaciones dehistonas
de las cromosomas o elentre
pueden influir control del
nes ciclo
de la heterocromatina es el correcto funcionamiento de
si y pueden
celular. Se conocen a también interactuar
todas estas con la metilación
modificaciones como: del ADN, de histonas”
“código centrómeros y telómeros. En el núcleo celular existen dos
en parte
(Fig. 17). Las por la acciónpost-traduccionales
modificaciones de complejos proteicosfavorecen
que se unen la acomunicación
tipos de heterocromatina: constitutiva y facultativa.
las histonas modificadas o por la metilación de las
entre nucleosomas modificando y regulando localmente la estructura de lacitosinas
del ADN.
cromatina, tanto a nivel de un dominio e incluso de un cromosoma completo.
5.1 Heterocromatina constitutiva
Este tipo de heterocromatina aparece desde las primeras
divisiones de la cigota y se distribuye en forma semejante
en los dos cromosomas homólogos. El empleo de la hibri-
dización de los ácidos nucleicos in situ, permitió demostrar
la coincidencia de las regiones de heterocromatina y la
localización de ADN altamente repetitivo.
En los núcleos en interfase la heterocromatina aparece en la
forma de bloques intensamente coloreados (cromocentros),
los cuales se hallan diseminados en el núcleo o asociados a
la membrana nuclear. En el mismo individuo la distribución
y aspecto de los cromocentros varía en relación al tejido
estudiado, al estado funcional de la población celular o al
período de desarrollo (embrionario, fetal o adulto).
En las distintas especies animales, la heterocromatina
constitutiva se localiza con preferencia en las regiones
centroméricas y menos frecuentemente en las regiones
teloméricas de los cromosomas.
Figura 17. Figura 17. Modificaciones
Modificaciones post-traduccionales de las de
post-traduccionales regiones
lasamino
regiones Laamino
organización en heterocromatina se produce por la acción
terminales de las histonas: El número indica la posición y el aminoácido
terminales de modificado.
las histonas: El número
Ac: acetilación, indica la
U: ubiquitinización, posicióny P:y el aminoácido
M: metilación de las histonas deacetilasas (proteína Sir en varios eucario-
modificado. Ac: acetilación, U: ubiquitinización,
fosforilación M: metilación y P: fosforilación
tas). Estas proteínas se organizan en forma de complejos
(Alberts y col. 2002) que reconocen los extremos aminos de las histonas creando
(Alberts y col. 2002)
un patrón de desacetilación propio de la heterocromatina

51
Diferentes modificaciones de las histonas pueden influir entre si y pueden
también interactuar con la metilación del ADN, en parte por la acción de
complejos proteicos que se unen a las histonas modificadas o por la metilación
 (embrionario, fetal o adulto).
En las distintas especies animales, la heterocromatina constitutiva se localiza
con preferencia en las regiones centroméricas y menos frecuentemente en las
regiones teloméricas de los cromosomas.
La organización en heterocromatina se produce por la acción de las histonas
deacetilasas (proteína Sir en varios eucariotas). Estas proteínas se organizan
(Fig. 18). Estaen desacetilación de las colas que
forma de complejos aminoreconocen
de las his- los Inactividad
extremos aminosgénica yde efecto de posición variegado
las histonas
tonas nucleosómicas conduce a un orden de plegado mayor
creando un patrón de desacetilación propioEndeloslagenomas heterocromatina
intactos, los(Fig.
genes18).
ocupan determinadas
ejecutado por los complejos de remodelaje de la cromatina
Esta desacetilación de las
ATP dependientes. Todas estas modificaciones atraen a
colas amino de las histonas
posiciones ennucleosómicas
los cromosomas, conduce
pero cuan do se producen rea-
a un orden de plegado mayor
proteínas adicionales responsables de formar y mantener ejecutado por los complejos
rreglos de
cromosómicos, remodelaje
los genes de
pueden lacambiar de posición
cromatina ATPOtro
el estado de heterocormatina. dependientes. Todas es
aspecto a considerar en el genoma. Las alteraciones
estas modificaciones atraen a proteínas cromosó micas estructurales
la acción de las metiltransferasas de histonas que metilanmantener
adicionales responsables de formar y (ver capítulo 9 - Alteraciones
el estado cromosómicas) como las trans-
de heterocormatina.
las lisinas en Otro aspecto
posición 9 de H3.a considerar es la es
Esta modificación “leida”de laslocaciones
acción o las inversiones,
metiltransferasas pueden que
de histonas determinar que algunos
por proteínas metilan genes situados en zonas eucromáticas pueden pasar a zonas
las lisinas que
de la heterocromatina en seposición
unen a la9forma
de H3. Esta modificación es “leida” por
modificada deproteínas
H3 para aumentar el nivel de plegamiento
de la heterocromatina que( se
heterocromáticas. En tales circunstancia
er unen a la forma modificada de H3 para s dichos genes se
capítulo 3 -Regulación deella nivel
expresión génica). convierten de activos en inactivos, como consecuencia de su
aumentar de plegamiento ( er capítulo 3 -Regulación
vecindad de la expresión
con la heterocromática. Este cambio en la expresión
Diversos experimentos muestran que in vivo, el ADN altamen-
génica). de un gen debida a un cambio de su posición en el genoma
te repetitivo (característico de ciertas zonas heterocromáticas)
Diversos experimentos muestran
no actúa de molde en la síntesis del ARN. Por lo tanto, resulta
que in vivo,
se el
denominaADN altamente
efecto de posición repetitivo
variegado.
evidente que (característico
la heterocromatina deconstitutiva
ciertas zonas
no sólo heterocromáticas)
carece no actúa de molde en la
síntesis del ARN. Por lo tanto,
de genes sino que no puede ser transcripta. De esta forma resulta evidente que la heterocromatina
5.2 Heterocromatina facultativa
podemos concluirconstitutiva no sólo carececonstitutiva
que la heterocromatina de genesestá sino que no puede ser transcripta. De esta
formada por ADN forma podemos
altamente concluir
repetitivo que noque la heterocromatina
se transcribe y Este término se utiliza
constitutiva paraformada
está la inactivación
por de uno de los cro-
que se agrupaADN altamente
en regiones repetitivo
circunscriptas que
de los no se transcribe
cromosomas. mosomasy que X de
selasagrupa
hembras enderegiones
mamíferos. En éstas, ambos
circunscriptas de los cromosomas.

Proteínas de unión Histonas modificadas

al ADN
30 nm

Proteínas Sir

Heterocromatina Eucromatina Eucromatina Heterocromatina

Figura 18. Modelos para la organización de la heterocromatina (A: Frente y B: Perfil) (Alberts y col. 2002)
Figura 18. Modelos para la organización de la heterocromatina (A: Frente y B:
52
Perfil) (Alberts y col. 2002)

16
 cromosomas X se hallan descondensados e isopicnóticos al • Metacéntricos: el centrómero divide al cromosoma en dos
comienzo del desarrollo embrionario. Sin embargo, en estadios brazos de longitud semejante.
muy tempranos de este desarrollo, uno de los dos cromosomas • Submetacéntricos: hay una pequeña diferencia de lon-
X se heterocromatiniza, se transforma en heteropicnótico y a gitud entre ambos brazos, el brazo p es más pequeño.
partir de este momento permanecen en tales condiciones en • Acrocéntricos: el brazo p es muy pequeño casi invisible
la mayor parte de los tejidos ( er capítulo 3 - Regulación de al microscopio.
la expresión génica). • Telocéntrico: el centrómero está en un extremo del cro-
mosoma, de manera que éste sólo tiene un brazo.
El tamaño de los cromosomas varía dentro de amplios límites.
6. Estructura Externa del Cromosoma Dentro de los animales, los ortópteros y los anfibios tienen cro-
mosomas grandes. La mayoría de los animales domésticos
Eucariota presentan cromosomas cortos y las aves y reptiles presentan
junto a cromosomas de longitud normal, otros muchos más
6.1 Morfología y Tamaño cortos llamados microcromosomas.
Un cromosoma en metafase está constituido por dos cromáti-
das diferentes. Entendemos por cromátide a cada una de las
6.2 Centrómero
dos estructuras longitudinales que constituyen el cromosoma
y que son visibles en metafase mitótica y desde diplonema La constricción primaria o centrómero es la región del cro-
hasta la metafase II meiótica. La forma del cromosoma está mosoma que se asocia con las fibras del huso en la mitosis
dada por la constricción primaria o centrómero, que divide al y meiosis, facilitando la migración de las cromátides o cro-
mismo en dos brazos (Fig. 19). Al brazo más pequeño se lo mosomas hacia los polos de la célula.
llama “p” y al brazo de mayor longitud “q”. Según la posición En un sentido estricto, el cinetocoro es la zona específica del
del centrómero los cromosomas se clasifican en: centrómero que se asocia con los microtúbulos del huso. El
cinetocoro se hace evidente como un componente distinto
del cromosoma en profase, éste consiste en una zona central
densa rodeado de una zona menos densa. Esta estructura se
encuentra a nivel de la constricción primaria del cromosoma.
Cuando la inserción de las fibras del huso está restringida a
una pequeña porción del cromosoma se dice que el centró-
mero es localizado, si la inserción ocurre en toda la longitud
del cromosoma se dice que el centrómero es difuso.
A nivel del centrómero, la cromatina se organiza como hetero-
cromatina centromérica (histonas desacetiladas y metiladas)
junto con proteínas estructurales adicionales que compactan
Figura 19. Distintas morfologías de cromosomas metafásicos (imagen a un más a los nucleosomas. Si bien pueden existir secuen-
Figura 19. Distintas morfologías deextraídacromosomas
de la Web)
metafásicos (imagen extraída
de la Web)
53

El tamaño de los cromosomas varía dentro de amplios límites. Dentro de los

animales, los ortópteros y los anfibios tienen cromosomas grandes. La mayoría
a nivel de la constricción primaria del cromosoma. Cuando la inserción de las
fibras del huso está restringida a una pequeña porción del cromosoma se dice
que el centrómero es localizado, si la inserción ocurre en toda la longitud del
cromosoma se dice que el centrómero es difuso.
A nivel del centrómero, la cromatina se organiza como heterocromatina
centromérica (histonas desacetiladas y metiladas) junto con proteínas
estructurales adicionales
cias de ADNquealtamente
compactan a un más
repetidas a losADN
(llamado nucleosomas.
a-hélice), Si bien
pueden existir secuencias de ADN
los centrómeros altamente
parecen ser unrepetidas
ensamblado (llamado ADN -hélice),
de proteínas Repeticiones de alto orden
los centrómeros específicas
parecen ser unque
más ensamblado de proteínas
una secuencia particular específicas
de ADN (Fig.más que
20 y 21). de ADN (Fig. 20 y 21).
una secuencia particular
Proteínas específicas del ADN satélite
centrómero
Heterocromatina centromérica

Microtúbulos Cinetocóros

Nuecleosoma
Centromérico
Figura 20. Estructura de la heterocromatina a nivel nucleosómico (Alberts y col.
Figura 20. Estructura de la heterocromatina a nivel nucleosómico
2002)
(Alberts y col. 2002) Cinetocóro interno ADN satélite
18
6.3 Constricciones secundarias Cinetocóro externo
Además del centrómero, pueden observarse sobre algunos
cromosomas constricciones secundarias entre las que hay
que distinguir: Figura 21. A: Estructura a nivel del ADN de la heterocromatina
1) Constricciones secundarias propiamente dichas: sonFigura
pe- [Link]érica
A: Estructura a nivel de
y B: Estructura del ADN de la heterocromatina
la heterocromatina a nivel centromérico centromérica y
queñas estrangulaciones observables en las cromátideB: (Alberts y col. 2002)
s y Estructura de la heterocromatina a nivel centromérico (Alberts y col. 2002)
cuya función se desconoce.
2) Organizadores nucleolares: es una región muy especial esa región del cromosoma. En ocasiones, el organizador
que aparece sólo en algunos cromosomas del complemento, nucleolar separa
6.3 Constricciones del resto del cromosoma un trozo del brazo
secundarias
y que en células somáticas aparecen ópticamente vacías cromosómico llamado satélite.
Además del centrómero, pueden observarse sobre algunos cromosomas
durante metafase por no presentar avidez por los colorantes
constricciones secundarias entre las que hay que distinguir:
utilizados para teñir ADN. El organizador nucleolar contiene
1) Constricciones
6.4 Telómeros secundarias propiamente dichas: son pequeñas
los genes que codifican para los ARNr 18 S y 28 S e incluyen
estrangulaciones
la formación del nucléolo. Estas constricciones secundarias
observables en las cromátides y cuya función se desconoce.
Son los extremos de los brazos cromosómicos. Estas porcio-
se forman porque los genes para los ARNr se transcriben 2) Organizadores nucleolares:
nes terminales es una región
de los cromosomas muy especial
presentan ciertas que
parti-aparece sólo en
algunos
de manera activa, lo que interfiere con la condensación de cromosomas del complemento, y que en células
cularidades. El extremo intacto de un brazo cromosómico no somáticas aparecen
ópticamente vacías durante metafase por no presentar avidez por los
54 colorantes utilizados para teñir ADN. El organizador nucleolar contiene los
genes que codifican para los ARNr 18 S y 28 S e incluyen la formación del
nucléolo. Estas constricciones secundarias se forman porque los genes para
los ARNr se transcriben de manera activa, lo que interfiere con la condensación
puede fusionarse con otro segmento cromosómico. Cuando les permite que formen un complejo sinaptonémico durante
se rompen los brazos cromosómicos, los extremos rotos Profase I, con la posibilidad de quiasmas y posterior recom-
suelen fusionarse entre sí y muy raras veces el extremo roto binación a todo su largo.
cicatriza convirtiéndose en telómero.
En la meiosis animal se ha comprobado cierta tendencia - Alosomas
de los telómeros a situarse en una zona determinada de la Se denomina así al par de cromosomas sexuales, el cual es
membrana nuclear en la proximidad del centrosoma, lo cual morfológicamente diferente del resto. Se los denomina con las
produce una cierta polarización (orientación Rabl) en la dis- letras X e Y en mamíferos, siendo XX hembras y XY machos.
posición espacial de los cromosomas. Para designar los cromosomas sexuales de las aves, algunos
autores utilizan las letras Z y W, siendo ZW el genotipo de
6.5 Número las hembras y ZZ el de los machos.
El número de cromosomas presente en las células es muy El sexo que presenta dos cromosomas X se denomina
variable. La mayoría de las especies se caracterizan porque “homogamético estructural” ya que produce sólo un tipo
las células somáticas presentan durante la mayor parte del de gametas que portan n autosomas y un cromosoma X;
ciclo vital del organismo dos juegos idénticos de cromoso- en cambio al sexo que lleva los cromosomas X e Y se lo
mas (un juego de origen paterno y otro de origen materno) llama “heterogamético estructural” pues produce dos clases
de manera que el número cromosómico se representa por gaméticas estructuralmente diferentes, algunas que poseen
2n y se denomina número diploide. El 2n de los animales n autosomas y un cromosoma X y otras que poseen n auto-
domésticos varía desde 38 en el gato a 78 en el perro. Las somas y el cromosoma Y.
gametas presentan la mitad de los cromosomas (número En algunas especies el sexo heterogamético estructural es el
haploide) y se representa como “n”. masculino, como en los nematodos, equinodermos, mamífe-
ros y en la mayor parte de los artrópodos. En otras especies
el sexo heterogamético estructural es el femenino, como
ocurre en algunos insectos, los reptiles, las aves y algunos
7. El complemento cromosómico en anfibios. Obviamente el sexo homogamético estructural es
el femenino y masculino, respectivamente.
eucariotas En la estructura de los alosomas del sexo heterogamético
En el completo cromosómico de las especies domésticas se estructural puede observarse una región no homóloga, seg-
distinguen dos tipos de cromosomas: autosomas y cromo- mento diferencial o no apareante y otra región con homología
somas sexuales o alosomas. o apareante, también denominada pseudoautosómica (PAR o
Pseudoautosomal Region) (Fig. 22). La región PAR varía de
- Autosomas posición y en tamaño debido a la diferencias (en secuencias
Estos cromosomas se presentan de a pares con igual mor- de ADN altamente repetidas) y la cantidad de genes en las
fología y tamaño, y portan los mismos genes en machos y diferentes especies domésticas (Fig. 23 y 24).
hembras. La homología total entre ambos miembros del par

55
 varía de posición y en tamaño debido a la diferencias (en secuencias de ADN
altamente repetidas) y la cantidad de genes en las diferentes especies
Figura
domésticas (Fig. 22 24. Estructura de PAR y PAB (Raudsepp y col. 2012)
y 23).
Figura 22. Estructura de PAR y PAB (Raudsepp y col. 2012)

Como puede verse en la Figura 23 los bloques de color negro corresponden a

genes en igual dosis en ambos sexos. La existencia de homología entre dichos
cromosomas en esa región permite la formación de quiasmas y la
recombinación génica, lo que asegura una correcta segregación de homólogos
durante la anafase I en los machos. En el par de alosomas XY existe una
región PAB (pseudoautosomal boundary) que se comporta como límite entre
las regiones apareante y diferencial donde se ve dificultada la formación de
quiasmas por la presencia de una secuencia SINE en el cromosoma Y.
El cromosoma Y es pequeño y contiene pocos genes (Figura 25). La mayoría
de ellos se encuentran en la región PAR. Esta región es igual en ambos
alosomas. La región diferencial, que corresponde al 95 % restante del
Figura [Link]
PosiciónY,de no la región con
recombina PAR el Xeny diferentes
se la denominaespecies (Raudse
región especifica depp y col.
2012) macho MSY (male specific region of the Y). Si bien en la región diferencial del
Y se encuentran algunos genes de homología parcial con genes del X (por ej.
zinc finger protein Y linked y zinc finger proteín X linked), el resto de los genes
están relacionados con la determinación sexual y la espermatogénesis. Un
56 ejemplo de esto último es el gen SRY (Factor determinante testicular, del inglés
Sex determining region of the Y chromosome). Otro gen que se encuentra en
dicha región es el Sly que actúa en la activación de genes durante la
espermatogénesis, e interactúa con la acetiltransferasa 5 de modo que puede
Figura 22. Posición de la región PAR en diferentes especies (Raudsepp y col.
2012)

Figura [Link]
Figura Diferentetamaño
tamaño de la región
de la regiónPAR
PAR dede diferentes
diferentes especies
especies
(Raudsepp
(Raudsepp yycol.
col.2012)
2012) Figura 25. Par de alosomas del ratón (Wijchers y Festenstein, 2011).
Figura 25. Par de alosomas del ratón (Wijchers y Festenstein, 2011).

Como puede verse en la Figura 23 los bloques de color ne- ( a e specific re ion o the ). Si bien en la región diferencial
gro corresponden a genes en igual dosis en ambos sex os.
8. CARIOTIPOdel Y se encuentran algunos genes de homología parcial con
La existencia de homología entre dichos cromosomas en genes del X (por ej. inc fin er protein inked y inc fin er
Es la técnica citogenética mediante la cual los cromosomas de una célula
esa región permite la formación de quiasmas y la rec(complemento
ombi- proteín X linked), el resto de los genes están relacionados con
cromosómico) se ordenan de una manera sistemática, en
nación génica, lo que asegura una correcta segregación de
relación la determinación
con su forma y sexual tamaño.y la espermatogénesis.
A través del mismo Un ejemplo
se puede obtener
homólogos durante la anafase I en los machos. En información
el par desobre
esto último es el gen SRY
el conjunto de las (Factor determinante testicular,
características morfológicas externas
de alosomas XY existe una región PAB (pseudoauto(forma,somal tamañodel inglés Sex determining
y número) region of the Yde
de los cromosomas chromosome).
una célula. Otro
La representación
boundary) que se comporta como límite entre las regiones gen que se
gráfica simplificada delencuentra
cariotipoen dicha región
constituye es el Sly que
el idiograma. actúa
Para la obtención del
apareante y diferencial donde se ve dificultada la formcariotipo
ación se
endeben realizar
la activación de cultivos celulares.
genes durante Lo más frecuente
la espermatogénesis, e es realizar
de quiasmas por la presencia de una secuencia SINEcultivos
en el deinteractúa
linfocitoscon dela sangre periférica
acetiltransferasa 5 de en modo
mediosque líquidos.
puede Luego de
cromosoma Y. cosechar dichos
producircultivos
cambios se realizan
en la preparados
organización con células
de la cromatina y por en metafase.
Dicho estadio
El cromosoma Y es pequeño y contiene pocos genes (Figura de en
lo tanto la ladivisión
expresión celular
de geneses enel losideal ya que En
autosomas. el el
cromosoma se
encuentra en el período de mayor condensación y puede verse muy bien su
25). La mayoría de ellos se encuentran en la región PAR. Esta humano también se han identificado en la región diferencial
morfología.21
región es igual en ambos alosomas. La región diferencial, que del cromosoma
El cariotipo estándar asíY el gen de
como el lacariotipo
retinitis pigmentosa
por bandas ligada al
permite identificar
corresponde al 95 % restante del cromosma Y, no recombina Y y de un tipo de sordera totalmente ligada al
alteraciones de número y de estructura de cromosomas pero no genes en Y.
con el X y se la denomina región especifica de machoparticular
MSY A diferencia
ya que las bandas del Y elrepresentan
cromosoma Xgrandes
es más grande
regionesy contiene
del genoma.
La representación gráfica del cariotipo se conoce como idiograma (Fig. 28 y
29). 57

8.1 Cariotipo Estándar

Con esta técnica los cromosomas se colorean sólo con Azul de Metileno sin
 Marrube, Graciela

entre 800 a 1000 genes. Entre machos y hembras existe una 8.2 Bandeo cromosómico
diferencia de dosis para dichos genes.
8.2 BandeoComo muchos cromosomas tienen morfología y tamaño
cromosómico
semejante,
Como muchos cromosomas un cariotipo estándar
tienen no es confiable,
morfología y tamañopor lo semejante,
tan- un
8. CARIOTIPO cariotipo to es
estándar necesario
no es recurrir
confiable, a
portécnicas
lo tantoespeciales
es del
necesario cariotipo
recurrir a técnicas
especiales (bandeo cromosómico)
del cariotipo (bandeo para poder individualizarlos.
cromosómico) para poderExisten
individualizarlos.
Es la técnica citogenética mediante la cual los cromosomas distintos tipos de bandeo cromosómico, los cuales
Existen distintos tipos de bandeo cromosómico, los cuales tienen distinta tienen
de una célula (complemento cromosómico) se ordenan utilidad uno.a utilidad cada uno.
de cadadistint
una manera sistemática, en relación con su forma y tamaño.
A través del mismo se puede obtener información sobre el 8.2.1 Bandeo C
8.2.1
conjunto de las características morfológicas externas (forma, Bandeo C
Este tipo de bandeo sirve para teñir, y por lo tanto poner de
tamaño y número) de los cromosomas de una cé[Link] La re-tipo de bandeo sirve
manifiesto, para teñir, yconstitutiva,
la heterocromatina por lo tanto poner
la cual se de manifiesto, la
carac-
heterocromatina
presentación gráfica simplificada del cariotipo constituye el teriza por permanecer condensada durante la interfase ypermanecer
constitutiva, la cual se caracteriza por
condensadadivisión
idiograma. Para la obtención del cariotipo se deben realizar durante la interfase
celular, y poseer uny tamaño
división celular, y constante.
relativamente poseer un tamaño
relativamente
cultivos celulares. Lo más frecuente es realizar cultivos de constante.
Se dice Se dicedeque
que las regiones lasC regiones
bandas de bandas
están constituidas por C están
constituidas
linfocitos de sangre periférica en medios líquidos. Luego de por satélite
ADN ADN satélite (altamente
(altamente repetidorepetido
y que no yseque no se transcribe).
transcribe). Las Las
proteínas de
cosechar dichos cultivos se realizan preparados con células la heterocromatina serían más resistentes
proteínas de la heterocromatina serían más resistentes a la a la extracción,
en metafase. Dicho estadio de la división celular es eprotegiendo
l ideal al ADN asociado
extracción, a ellas
protegiendo al ADNdando lugar aaellas
asociado las típicas bandas C (Fig.
dando lugar
ya que el cromosoma se encuentra en el período de mayor26). a las típicas bandas C (Fig. 26).
condensación y puede verse muy bien su morfología.
El cariotipo estándar así como el cariotipo por bandas per-
mite identificar alteraciones de número y de estructura de
cromosomas pero no genes en particular ya que las bandas
representan grandes regiones del genoma.

8.1 Cariotipo Estándar

Con esta técnica los cromosomas se colorean sólo con Azul
de Metileno sin ningún tipo de tratamiento previo a la colo-
ración. Este tipo de técnica citogenética sólo nos permite
reconocer número, tamaño y morfología, no pudiéndose
identificar a cada cromosoma del complemento en forma in-
equívoca ni detectar alteraciones estructurales del cariotipo.
Por lo tanto, este cariotipo no se puede utlizar para confirmar
una alteración numérica ni estructural. Figura 26. Metafase con cromosomas tratados con Bandeo C (imagen
Figura 26. Metafase con cromosomas extraída tratados
de la Web) con Bandeo C (imagen extraída
de la Web)
58

8.2.2 Bandas fluctuantes: Bandeo G, Q, R

Las bandas fluctuantes aparecen en cromosomas elongados (durante profase)
 genes ribosomales 18 S y 28 S, pero en realidad el material teñido por este
método no se encuentra en el cromosoma mismo, sino que es un material
proteico adyacente. Se supone que esta técnica indica el grado de actividad de
los genes ribosomales. Este bandeo tiñe los organizadores nucleolares.
Organización del ADN en la cromatina

8.2.2 Bandas fluctuantes: Bandeo G, Q, R

Las bandas fluctuantes aparecen en cromosomas elongados
(durante profase) como numerosas bandas finas, las cuales
se fusionan para formar un menor número de bandas en
metafase. Las bandas, aún las más pequeñas, contienen
más de un millón de nucleótidos lo que correspondería al
genoma completo de una bacteria. Estas bandas parecen
indicar una división del cromosoma en diferentes regiones
(Fig. 27). Por ejemplo las bandas, originadas por digestión
con tripsina que se tiñen de color azul con Giemsa (bandas
G+) están asociadas a zonas de bajo contenido GC e indican
regiones del cromosoma que replican sus ADN tardíamente
en el período S. En general las regiones del genoma ricas
Este tipo de cariotipo GC
en secuencias permite diagnosticar
contienen alteraciones
una mayor densidad de genesde número o de
estructura de(housekeeping)
los cromosomasque se (mayores
expresan virtualmente
a 3 Mb) ,en todos los
debido a que el patrón de
bandas de tipos
cadacelulares.
par de cromosomas es único y propio, por lo tanto permite
La representación
identificar en forma gráfica
inequívoca del cariotipo
cada cromosoma se conoce como idio-
del complemento.
grama (Fig. 28 y 29).

Figura 28. Idiograma por bandeo G de un cariotipo canino (imagen

extraída de la Web)
Figura 28. Idiograma por bandeo G de un cariotipo canino (imagen extraída de
la Web)
Este tipo de cariotipo permite diagnosticar alteraciones de
número o de estructura de los cromosomas (mayores a 3 Mb),
debido a que el patrón de bandas de cada par de cromosomas 25
es único y propio, por lo tanto permite identificar en forma
inequívoca cada cromosoma del complemento.
8.2.3 Bandeo NOR
Los NORs (nucleolus organizer regions) son los sitios donde
se encuentran los genes ribosomales 18 S y 28 S, pero en
realidad el material teñido por este método no se encuentra
Figura 27. Cariotipo por bandeo G de una metafase canina (imagen
Figura 27. Cariotipo por bandeo G de una
extraída de la Web) metafase canina (imagen
en extraída
el cromosoma mismo, sino que es un material proteico
de la Web)
59

8.2.3 Bandeo NOR

Los NORs (nucleolus organizer regions) son los sitios donde se encuentran los
genes ribosomales 18 S y 28 S, pero en realidad el material teñido por este
 Debido a que en la actualidad existe una gran variedad de
fluorocromos y en consecuencia múltiples colores, a esta
técnica se la denomina chromosome painting o pintado de
cromosomas. Por lo tanto, mediante el empleo de distintas
sondas marcadas con distintos fluorocromos (distintos co-
lores) o distintas combinaciones de fluorocromos podemos:
- Distinguir cromosomas: Mediante el uso de una única
sonda por cromosoma, es posible formar pares de homólogos
en forma inequívoca (Fig. 32). Esta técnica permite confirmar
alteraciones numéricas y rearreglos entre cromosomas.
- Distinguir regiones de un mismo cromosoma: Mediante
el uso de más de una sonda por cromosoma, cada una de
ellas marcada con un fluorocromos diferente, se pueden
Figura 29. Esquema de un idiograma de un cromosoma metafásico
Figura 29. Esquema de un idiograma de un cromosoma metafásico
(imagen extraída de la Web) analizar(imagen
rearreglos intercromosómicos, tales como delecio-
extraída de la Web) nes, inserciones, inversiones o duplicaciones de segmentos
cromosómicos. Esta variante de FISH requiere conocer las
adyacente. Se supone que esta técnica indica el grado de
secuencias de las sondas y permite detectar rearreglos del
actividad de los genes ribosomales. Este bandeo tiñe los
orden de las 500 a 1500 Kb. El pintado cromosómico es
organizadores nucleolares.
de gran utilidad y posee una gran variedad de aplicaciones
8.3 Pintado Cromosómico tanto con fines clínicos como básicos, es decir, es empleada
8.3 Pintado Cromosómico en estudios de cariotipos, mapeo de genes, diagnóstico y
Por varias décadas, se analizo a los cromosomas por los monitoreo característicos
de distintas patologías.
Por varias décadas, se analizo a los cromosomas
patrones de bandas obtenidos mediante los distintos tipos de bandeo por los
característicos patrones de bandas obtenidos mediante los Aplicación del cariotipo
fluctuante, pero distintos
su limitada resolución
tipos de bandeo fluctuante, constituye
pero su limitada su mayor desventaja.
resolución Sin
embargo, el desarrollo
constituyede la técnica
su mayor deSin
desventaja. hibridización fluorescente
embargo, el desarrollo de La in situ (FISH)estudio del cariotipo de un individuo ra-
importancia del
la técnica de hibridización dica en que el hallazgo de ciertas anormalidades del mismo
permitió visualizar y localizar en fluorescente
forma directain situ (FISH Fluores-
determinadas regiones
están asociadas dela patologías. Además muchas alteraciones
cence in situ hybridization) permitió visualizar y localizar en
genoma. Dicha forma técnica consiste en el reconocimiento
directa determinadas regiones del genoma. Dicha técni- específico
de la de
fertilidad una
de los animales domésticos están causadas
secuencia de ADN presente
ca consiste en los cromosomas
en el reconocimiento por medio de una sonda cariotipo. Dado que todas estas anor-
específico de una secuencia por alteraciones del
malidades se transmiten a la descendencia es importante
fluorescente (unadesonda es una
ADN presente en lossecuencia
cromosomas de ADNdede
por medio una alsonda
menos 70 kb, aunida
detectar en portadores y eliminarlos como futuros
los animales
fluorescente (una sonda es una secuencia de ADN de al menos
este caso a partículas fluorescentes). El híbrido resultante (ADN-sonda)
70 kb, unida en este caso a partículas fluorescentes). El híbri- reproductores. se
expone a luz U do(microscopio
resultante (ADN-sonda) de fluorescencia)
se expone a luz U y(microscopio
la emisión deLa fluorescencia
utilidad de esta técnica será mejor comprendida por el
alumno en el capítulo de alteraciones numéricas y estructu-
nos indica la presencia y la ubicación
de fluorescencia) y la emisiónde la sonda. nos indica la
de fluorescencia
rales del cariotipo.
Debido a que enpresencia y la ubicación
la actualidad de la sonda
existe una (Figgran 30 variedad
y 31). de fluorocromos y en
consecuencia múltiples
60 colores a esta técnica se la denomina chromosome
painting o pintado de cromosomas. Por lo tanto, mediante el empleo de
distintas sondas marcadas con distintos fluorocromos (distintos colores) o
distintas combinaciones de fluorocromos podemos:
La utilidad de esta
causadas por técnica serádel
alteraciones mejor comprendida
cariotipo. por elestas
Dado que todas alumno en el capítulo
anormalidades
de alteraciones numéricas
se transmiten y estructurales
a la descendencia es del cariotipo.
importante detectar a los animales
portadores y eliminarlos como futuros reproductores.
La utilidad de esta técnica será mejor comprendida por el alumno en el capítulo
de alteraciones numéricas y estructurales del cariotipo.

Figura Figura [Link]

[Link] del pintado
Figura [Link]
del pintado cromosómico
del pintado
cromosómicocromosómico (Xcyte Lab
(Xcyte
(Xcyte Lab Manual.
LabManual. MetaSystems
Manual.
MetaSystems GmbH, Robert Bosch Strasse 6, D-68804 Altlussheim,
MetaSystems
GmbH, Robert Bosch Strasse 6, D-68804 Altlussheim, Germany. )
GmbH, Robert Bosch Strasse 6, D-68804 Altlussheim,
Germany. ) Germany. )

Figura 32. Metodología del pintado

Figura 31. Metodología cromosómico
del pintado XcyteLab
cromosómico Fuente Xcyte Lab
Manual.
Manual.
MetaSystems GmbH, MetaSystems
Robert GmbH,6,
Bosch Strasse Robert BoschAltlussheim,
D-68804 Strasse 6, D-68804
Germany.
Altlussheim, Germany.
Figura 31. Cariotipos y análisis de diferentes bandas por medio del pintado
cromosómico (imagen extraída de la Web)
Fig 32. Cariotipo por medio del pintado cromosómico
Figura 31. Cariotipos y análisis de diferentes bandasBIBLIOGRAFIA
por medio del pintado
cromosómico (imagen extraída de la* Web)Alberts, Bruce; Johnson, Alexander; Lewis, Julian; Raff, Martin; Roberts,
61
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62
Regulación de la Expresión Génica

CAPÍTULO 3

Regulación de la
Expresión Génica

63
 Regulación de la Expresión Génica

Regulación de la Expresión Génica

Marrube, Graciela; Motter, Mariana y Martínez, Marcela

Los tejidos del organismo están formados por células que Estas etapas son reguladas a dos niveles:
difieren en estructura y función. Todas las células poseen, sin 1. Regulación epigenética.
embargo, el mismo genoma. Las diferencias observadas se 2. Regulación genética o a nivel de secuencia del ADN.
deben a patrones de expresión génica distintos, producto de
cambios en la regulación génica. Estos patrones diferenciales
se establecen y mantienen después del desarrollo embrio- 1. Regulación Epigenética
nario, a través de modificaciones epigenéticas propias de
cada tejido. En diferentes tejidos o en diferentes momentos Epigenética describe el conjunto de cambios heredables en la
del desarrollo, se establecen diferentes epigenomas, que expresión génica que se producen sin modificar la secuencia
mantienen la memoria de la identidad celular. de los genes. Es decir que dos tejidos o incluso dos individuos
con el mismo genoma (gemelos, por ejemplo) podrán tener
patrones de expresión genética, y por lo tanto fenotipos,
Control de la expresión génica distintos debido a diferencias epigenéticas.
La expresión génica puede regularse en cualquier de los Los cambios epigenéticos se producen por los siguientes
pasos que conducen a la síntesis proteica: mecanismos:
1. Metilación del ADN
2. Código de Histonas
1. Transcripción del gen. Etapa más importante y frecuente
3. ARN no codificantes
de regulación.
2. Splicing del ARNm resultante.
3. Transporte y localización del ARNm. A través de ellos, se regula la expresión génica a nivel trans-
4. Traducción: Selección de cuáles de los ARNm serán cripcional o post-transcripcional. El efecto sobre el primero
traducidos a proteínas. se ejerce sobre la estructura de la cromatina, en particular a
5. Degradación del ARNm. nivel del nucleosoma, que controla el acceso de proteínas de
6. Post-traduccional: Activación, inactivación y degradación unión al ADN, factores de transcripción y polimerasas. Como
de las proteínas. vimos en el capítulo 2 (Organización del ADN en cromatina)

65
modificaciones en la metilación del ADN o cambios químicos metilaciones con excepción de los genes que experimentan
en los aminoácidos expuestos de las histonas, modifican la imprinting (ver más adelante), asegurando así la pluripoten-
exposición de la cromatina. Las enzimas responsables de cia de sus células. El genoma es gradualmente remetilado
catalizar estas modificaciones son conducidas a la cromatina durante las siguientes divisiones mitóticas. La distribución
por ARN no codificantes largos, que reconocen secuencias de regiones diferencialmente metiladas (DMR, por sus siglas
target específicas. A esto se añade la acción de enzimas en inglés) presente en promotores y enhancers, exhibe un
modificadoras de la cromatina. Algunas proteínas actúan patrón tisular específico.
como remodeladoras de la cromatina, que reconfiguran los Atendiendo a su definición de mecanismo epigenético, las
nucleosomas. metilaciones se heredan en la mitosis, a través de la metil-
El epigenoma puede además ser modificado por efectos transferasa DNMT1, que preserva la metilación durante la
ambientales como la alimentación, temperatura, infecciones, replicación del ADN previo a la división celular.
o el manejo. Y para algunos casos, se ha demostrado la exis- El ambiente afecta este mecanismo epigenetico, permitien-
tencia de una herencia transgeneracional. En las secciones do una respuesta dinámica de la expresión génica frente a
sucesivas, veremos ejemplos del efecto regulador epigenético cambios externos. Un ejemplo de esto, es la variación en
y de su interacción con el ambiente. la expresión de los genes de la leche en bovinos producida
por cambios en su metilación inducidos por la nutrición,
infecciones y manejo.
1.1 Efecto de la metilación del ADN sobre la La frecuencia de ordeñe en la raza Holstein de bovinos de
expresión génica leche, afecta directamente la producción de leche. A mayor
La metilación del ADN, a nivel del carbono 5 de las citosinas número de ordeñes diarios, mayor es el volumen de leche
(5mC) (ver capítulo 2), es uno de los mecanismos epigenéti- producida, con un cambio en la expresión de gran número
cos mas estudiados y se asocia con el silenciamiento génico. de genes. Para el gen de la Caseína -S1 se ha demostrado
Corresponde a la adición de grupos metilo preferentemente que la metilación de una zona regulatoria distal del gen es
en islas CpG. La localización de las metilaciones afecta su afectada por la frecuencia de ordeñe. Como se observa en la
función en la transcripción y la estructura que adquiere la Figura 1, corriente arriba del gen aparece una región regula-
cromatina, tal como ocurre con las secuencias repetitivas toria con tres islas CpG, cuyo nivel de metilación cambia de
ricamente metiladas del centrómero y de los telómeros acuerdo al tejido, al estado fisiológico o al manejo. Cuando
donde se establece la heterocromatina constitutiva. Ade- los animales son ordeñados dos veces al día, las islas CpG
más, la metilación actúa como una señal más localizada de resultaron metiladas en un 33, 34 y 28%, respectivamente,
silenciamiento cuando se produce a nivel de los promotores. comparados con una metilación de 38, 38 y 33% cuando
Aquellos que poseen expresión constitutiva no presentan se ordenó solo una vez al día. Estos niveles, son además
promotores metilados, en tanto que los genes expuestos a mucho menores, respecto a los observados en otros teji-
una regulación inducida, aparecen metilados siguiendo un dos, como hígado (74, 78 y 61%, respectivamente), en el
patrón específico de cada tejido. cual, el gen no se expresa (Fig. 2). Es decir que el nivel de
En el embrión recién formado, el ADN esta desprovisto de metilación, que da una medida del silenciamiento génico,

66
 mucho menores, respecto a los observados en otros tejidos, como hígado (74,
78 y 61%, respectivamente), en el cual, el gen no se expresa (Fig. 2). Es decir
que el nivel de metilación, que da una medida del silenciamiento génico, se
reduce con el número de ordeñes. Esto explica como un efecto ambiental
impacta sobre la expresión genética, de una forma dinámica y reversible.
Regulación de la Expresión Génica

Figura 1. Esquema de la región regulatoria, corriente arriba del gen Caseína α-

S1 (CSN1S1) en el cromosoma 6 bovino (BT6). Las islas CpG aparecen en las
posiciones
Figura 1. Esquema de la región -10276, -10216
regulatoria, corriente y del-10196,
arriba respecto
gen Caseína -S1 (CSN1S1) al en
inicio de la6 bovino
el cromosoma transcripción
(BT6). Las islas CpG aparecen
(Nguyen en las posiciones
[Link] -10276,
col. 2014). -10216 y -10196, respecto al inicio de la transcripción (Nguyen M. y col. 2014).
Figura de la región regulatoria, corriente arriba del gen Caseína α-
S1 (CSN1S1) en el cromosoma 6 bovino (BT6). Las islas CpG aparecen en las
posiciones -10276, -10216 y -10196, respecto al inicio de la transcripción
(Nguyen M. y col. 2014).

Figura 2. Porcentaje promedio de metilación de las islas CpG en tejido mamario (barras grises: vacas ordeñadas dos veces por día, barras negras:
Figura 2. una
ordeñadas Porcentaje promedio
vez por día, o preñadas, barrasde metilación
punteadas) y hepáticode lasrayadas)
(barras islas(Nguyen
CpGM. eny col. tejido
2014).

mamario
Figura(barras grises: promedio
2. Porcentaje vacas ordeñadas dos veces
de metilación de las por
islasdía,
CpGbarras negras:
en tejido
se reduce con el número
ordeñadas
mamario de
unaordeñes. Estodía,
vez grises:
(barras por explica como un
o preñadas,
vacas de
doslosveces
barras
ordeñadas tambos.
porSudía,
punteadas) patógeno
ybarrasmás
hepático frecuente,
(barras la bacteria Es-
negras:
efecto ambiental impacta sobre la expresión genética, de cherichia coli, incrementa la metilación de la región regulatoria
rayadas) (Nguyen
ordeñadas M. ypor
una vez col.día,
2014).
o preñadas, barras punteadas) y hepático (barras
una forma dinámica y reversible. del gen CSN1S1, reduciendo la expresión del gen en glándula
rayadas) (Nguyen M. y col. 2014).
La mastitis o infección de las glándulas mamarias, reduce la mamaria durante la lactancia y el contenido de dicha proteína
producción deLaleche,
mastitis o infección
afectando de ellas
severamente glándulas mamarias,
rendimiento en la leche. reduce la producción de
La afectando
leche, mastitis o infección
severamentede laselglándulas mamarias,
rendimiento de los reduce
tambos. la Su
producción
patógeno demás
leche, afectando severamente el rendimiento de los tambos. Su patógeno más
frecuente, la bacteria Escherichia coli, incrementa la metilación de la región 67
frecuente, la bacteria Escherichia coli, incrementa la metilación de la región
regulatoria deldel
regulatoria gengenCSN1S1,
CSN1S1, reduciendo
reduciendo la la expresión
expresióndeldel
gengenen en glándula
glándula
mamaria durante
mamaria la la
durante lactancia
lactanciayyelelcontenido dedicha
contenido de dichaproteína
proteína
en en la leche.
la leche.
 Nutrición y el Epigenoma
El gen agutí (A) en ratones codifica una proteína reguladora, que cambia la síntesis de
Marrube,
eumelanina (pigmento Graciela;
negro) Motter Mariana
por feomelanina y Martínez,
(pigmento Marcelaen los melanocitos
amarillo)
foliculares. El gen se expresa temporalmente produciendo el color amarillo de la base
del pelo, en tanto que el resto del folículo es oscuro, originando el pelaje agutí. Una
Nutrición y el Epigenoma variante del gen (Avy) resulta de la inserción de un retro-transposón en el extremo 5’
del gen, produciendo a través de un promotor propio, la expresión constitutiva del gen.
El gen agutí (A) en ratones codifica unade
La actividad proteína reguladora,
este promotor que cambia
dependerá la síntesis
del grado de eumelanina
de metilación (pigme
de los grupos CpGnto negro) por feomelanina
(pigmento amarillo) en los melanocitos
presentes en foliculares. El metilación,
él. A mayor gen se expresa temporalmente
resultará produciendo
silenciado, y el el color
gen se expresará amarillo de la base del pelo, en
desde
tanto que el resto del folículo su
es propio
oscuro, originando
promotor, el pelaje el
produciendo agutí. Una
pelaje variante
agutí. Si estádel gen (Avy) resulta
hipometilado, de la
resultará inseryción de un retro-transposón
activo
el gen se expresará
en el extremo 5’ del gen, produciendo a través de constitutivamente dandolaunexpresión
un promotor propio, pelaje amarillo. Esto del
constitutiva significa
gen. que
La actividad de este promotor
ratones,de
dependerá del grado de metilación genéticamente
los grupos CpG idénticos pueden
presentes entener
él. A fenotipos distintos (pelajes
mayor metilación, resultarádistintos)
silenciado, y el gen se expresará
debido a un cambio epigenético producido por el grado de metilación del ADN.
desde su propio promotor, produciendo el pelaje agutí. Si está hipometilado, resultará activo y el gen se expresará constitutivamente
dando un pelaje amarillo. EstoEste fenotipoque
significa se ratones,
ve afectado además por idénticos
genéticamente la dieta. Crías de hembras
pueden cuya dieta
tener fenotipos fue (pelajes distintos) debido
distintos
suplementada con compuestos ricos
a un cambio epigenético producido por el grado de metilación del [Link] metilo (colina, betaina, ácido fólico, vitamina
B12) tendrán más posibilidad de tener pelajes agutí, respecto de hembras cuya dieta
Este fenotipo se ve afectado no
además por la dieta. Crías de hembras cuya dieta fue suplementada con compuestos ricos en metilo (colina,
fue suplementada.
betaina, ácido fólico, vitamina B12) tendrán más posibilidad de tener pelajes agutí, respecto de hembras cuya dieta no fue suplementada.

A) Esquema de la inserción del transposón

IAP en el extremo 5’ del gen agutí A. El
transposón presenta un promotor (flecha
marcada como Avy), que produce la
expresión ectópica del gen A. B) Ratones
(Avy) genéticamente idénticos presentan
diferente color de pelaje de acuerdo a la
metilación del promotor IAP. La
hipometilación, permite la máxima
expresión y produce un pelaje amarillo. A
mayor metilación, se silencia el promotor
IAP y el gen A se expresa desde su propio
promotor produciendo el pelaje marrón
normal (agutí) del ratón.

El efecto de la dieta como modulador epigenético no se restringe al caso anterior. En abejas, la reina y las trabajadoras son genéticamente
idénticas, pero anatómica y funcionalmente muy como
El efecto de la dieta diferentes. La primera
modulador es fértil,
epigenético no semás grandealy caso
restringe longeva, en tant
anterior. En o que las trabajadoras, son
abejas,delaunreina
estériles, pequeñas y viven menos día. yCómo
las trabajadoras son un
puede resultar genéticamente idénticas, de
fenotipo tan diferente, peroun anatómica y
genotipo idéntico La respuesta parece
estar en la dieta. La larva defuncionalmente
la abeja reina muy diferentes. con
es alimentada La primera es en
jalea real fértil, más
tanto grande
que y longeva,sólo
la trabajadora en tanto
inicialmente es alimentada con
jalea real para pasar luego a que
una las trabajadoras,
dieta de polén yson estériles,
néctar. pequeñas yeste
Aparentemente vivencambio
menos ende la
undieta,
día. cambia
Cómo puede
el patrón de expresión génica, y
resultar un fenotipo tan diferente, de un genotipo idéntico La respuesta parece estar
así el fenotipo resultante. Unen
análisis de la metilación del genoma de ambas, reveló que más de 550
la dieta. La larva de la abeja reina es alimentada con jalea real en tanto que la genes involucrados en el desarrollo
cerebral presentan patronestrabajadora
de metilaciónsólodiferentes
inicialmenteentre la reina y con
es alimentada las trabajadoras.
jalea real para Y estaluego
pasar evidencia
a una se ha reforzado con el silencia-
dieta
miento de la metil-transferasadeDNMT3,
polén yen larvasAparentemente
néctar. destinadas a ser trabajadoras,
este cambio en que desarrollaron
la dieta, cambia elovarios
patrónprodepios del linaje de las reinas.
expresión génica, y así el fenotipo resultante. Un análisis de la metilación del genoma
Conclusiones: Un postuladde ambas,dereveló
o clásico que más
la genética de 550
es que genes involucrados
el fenotipo de un individuoen resulta
el desarrollo cerebralación del genotipo y el am-
de la combin
biente. Considerando lo quepresentan patrones
ahora sabemos de metilación
sobre diferentes
epigenética, entre la como
ésta actuaría reina yunlas trabajadoras.
nexo Y esta
entre ambos, permitiendo que el ambiente
evidencia se ha reforzado con el silenciamiento de la metil-transferasa DNMT3, en
module al genotipo y así al fenotipo fina l.
larvas destinadas a ser trabajadoras, que desarrollaron ovarios propios del linaje de
las reinas.
68
Conclusiones: Un postulado clásico de la genética es que el fenotipo de un individuo
resulta de la combinación del genotipo y el ambiente. Considerando lo que ahora
sabemos sobre epigenética, ésta actuaría como un nexo entre ambos, permitiendo
que el ambiente module al genotipo y así al fenotipo final.
 Regulación de la Expresión Génica

La herencia epigenética trans-generacional es definida como la trasmisión, a través de las generaciones, de marcas
epigenéticas, en ausencia Ladelherencia
efecto ambiental que produjo
epigenética estas marcas. Esto es ilustrado
trans-generacional con la alimentación
es definida como en
como la trasmisión, a través
ejemplo mostrado en la figura, pero ha sido reportado para la influencia de tóxicos tales como pesticidas.
Dos grupos de hembras de las generaciones,
preñadas fueron alimentadasde conmarcas
una dieta epigenéticas,
suplementada (A)en y noausencia
suplementadadel(B)efecto ambiental que
en fuentes
produjo
de metilo, durante la etapa intermediaestas [Link]
de la gestación. observaes ilustrado
como con
las crías de la alimentación
la generación como en ejemplo
F2 serán predominan-
mostrado
temente agutíes o amarillas, en la
dependiendo delfigura, pero
tipo de dieta de ha sido reportado
la generación para la
F0. Esto implica queinfluencia de tóxicos tales como
individuos genéticamente
idénticos de la F1, sujetos a diferente
pesticidas. dieta in utero, tendrán crías fenotípicamente diferentes..

Dos grupos de hembras

preñadas fueron
alimentadas con una
dieta suplementada (A)
y no suplementada (B)
en fuentes de metilo,
durante la etapa
intermedia de la
gestación. Se observa
como las crías de la
generación F2 serán
predominantemente
Estudios equivalentes realizados en cerdos machos,agutíes
mostraron oun amarillas, dependiendo
efecto trans-generacional en F2 dedelgenes
tiporegulados
de dieta de la
generación
epigenéticamente por metilación. F0. Esto
Esto último implica
confirma que laque individuos
herencia no dependegenéticamente
del efecto que idénticos de haya
la alimentación la F1, sujetos a
diferente dieta in utero, tendrán crías fenotípicamente diferentes..
tenido sobre las células germinales de F1 cuando estaba siendo gestada en F0, ya que esa influencia no se produce en la
línea paterna.. Estudios equivalentes realizados en cerdos machos, mostraron un efecto trans-
La metilación de genes y la herencia de ARNnc (ver punto 1.3.2) a través de las gametas serían los mecanismos más claros
generacional en F2 de genes regulados epigenéticamente por metilación. Esto último
de herencia trans-generacional.
confirma que la herencia no depende del efecto que la alimentación haya tenido sobre
las células germinales de F1 cuando estaba siendo gestada en F0, ya que esa
1.1. 1 Impronta genómica influencia no se produce en la línea paterna..
La mayoría de los genes deLa losmetilación de presentes
mamíferos están genes y la regulación
herenciaespecial
de ARNnc mediante(verun punto
proceso 1.3.2) a través
de impronta (del de las
gametas
en dos copias que se expresan serían
y regulan los
de igual mecanismos
forma. Sin más
inglés clarosode
imprinting) herencia
sellado genó[Link]-generacional.
Este mecanismo origina
embargo un reducido número de genes está sujeto a una la expresión diferencial de los genes de acuerdo a su origen
69

1.1. 1 Impronta genómica

La mayoría de los genes de los mamíferos están presentes en dos copias que
parental (materno o paterno), es decir; ciertos genes aunque posibles combinaciones del patrón de herencia. El ratón de
tengan dos copias solo expresan una. Un ejemplo son los la derecha recibe la copia paterna metilada y por lo tanto al
genes H19 e IGF2, involucrados en el desarrollo embrionario, expresar la copia materna expresa el alelo a. El ratón de la
que se encuentran ligados (contiguos en el cromosoma) y izquierda también expresa el gen recibido de su madre, pero
presentan un mecanismo de impronta opuesto. Independien- en este caso es el alelo A. Es decir que aunque los ratones
temente del sexo del individuo siempre se expresa el alelo son genéticamente idénticos para este gen (genotipo Aa),
materno de H19 y el paterno de Igf2, quedando silenciados su expresión estará epigenéticamente regulada, por lo tanto
los otros alelos, paterno y materno respectivamente (Fig. 16). presentarán fenotipos distintos.
A nivel cromosómico se ha demostrado que la impronta suele
afectar a racimos o “cluster” de genes próximos que compar- 1.2. Efecto del Código de histonas
ten regiones reguladoras comunes. (Modificaciones post-traduccionales de las
El silenciamiento diferencial de uno de los alelos se produce histonas) sobre la expresión génica
por la metilación de sus regiones reguladoras como se des-
Las modificaciones post-traduccionales (acetilación, metila-
cribió en la sección anterior.
ción, fosforilación, ubiquitinación y sumoilación) que se pro-
El fenómeno de impronta ocurre durante la gametogénesis,
ducen en los extremos amino terminales de las histonas del
se mantiene durante la fecundación, pero a medida que se
nucleosoma afectan la compactación de la cromatina expuesta
suceden las primeras divisiones del futuro embrión se pierde
a estos cambios. Como vimos en el capítulo 2 (Organización
este marcaje de la línea germinativa (óvulos y espermato-
del ADN en cromatina), dependiendo del tipo de cambio quími-
zoides) para volver a establecerse durante la maduración
co, del aminoácido modificado y de su posición en la cadena
de los gametos según el sexo del nuevo individuo. De este
amino terminal, el efecto será un aumento o una disminución
modo el patrón de impronta heredado del progenitor con el
en la compactación de la cromatina. Metilaciones (H3K4me3 y
mismo sexo se elimina y vuelve a establecerse en la línea
H3K36me3) y acetilaciones (H3K9ac y, H3K27ac) de la histona
germinativa del embrión, pero las marcas heredadas por el
H3, son marcas epigenéticas de eucromatina. La H3K4me3 se
progenitor del sexo opuesto no vuelven a imprimirse una vez
localiza en regiones cercanas a promotores activos, promo-
eliminadas. Esto queda ejemplificado en la Figura 3, que
viendo la transcripción a través del reclutamiento de complejos
muestra 2 ratones adultos, una hembra y un macho con un par
de remodelamiento de la cromatina y de histona-acetilasas.
de cromosomas homólogos, regulados por imprinting. Ambos
En cambio metilaciones en las lisinas 9 y 27 (H3K9me3 y
ratones han heredado el cromosoma superior de su padre y el
H3K27me3) se localizan en la cromatina facultativa y consti-
inferior de su madre. La copia paterna esta metilada, lo cual
tutiva. La metilación de la Lys27 en la histona 3 es mediada
impide su expresión y la copia materna se expresa porque
por el complejo PRC2 (polycomb repressive complex 2), que
no está metilada. Durante la meiosis se borra el imprintig
responde a señales de diferenciación celular. H3K27me3 re-
para ser luego repuesto. En los óvulos producidos por la
cluta al complejo PRC1 (polycomb repressive complex 1), que
hembra ninguna copia del gen se metila, en cambio todos los
cataliza otros mecanismos de represión genética. H3K9me3
espermatozoides tienen el gen metilado (impronta paterna).
en tanto está presente en centrómeros y telómeros, de la he-
En la parte inferior de dicha figura se muestran dos de las
terocromatina constitutiva.
70
 al expresar la copia materna expresa el alelo a. El ratón de la izquierda también
expresa el gen recibido de su madre, pero en este caso es el alelo A. Es decir
que aunque los ratones son genéticamente idénticos para este gen (genotipo
Aa), su expresión estará epigenéticamente regulada, por lo tanto presentarán
fenotipos distintos. Regulación de la Expresión Génica

HEMBRA MACHO

ALELO a ALELO a
(PATERNO) IMPRINTADO
IMPRINTADO

EXPRESIÓN DEL
ALELO A
EXPRESION DEL
CÉLULAS CÉLULAS
ALELO A
SOMÁTICAS SOMÁTICAS
(MATERNO)
MEIOSIS DE ELIMINACIÓN
IMPRINTING
ESTABLECIMIENTO DEL IMPRINTING DE LA ESTABLECIMIENTO DEL IMPRINTING DEL
HEMBRA MACHO

ÓVULOS ESPERMATOZOIDES

EXPRESIÓN DE LOS
DISTINTOS ALELOS
DEL GEN SEGÚN
ORIGEN

Expresión del alelo A Expresión del alelo a

A

Figura 3. Establecimiento del imprinting durante la gametogénesis (Alberts y

Figura 3. Establecimiento del imprinting durante la gametogénesis (Alberts y col. 2002)
col. 2002)

1.2. Efecto del Código de histonas (Modificaciones post-traduccionales de

las histonas) sobre la expresión génica
71

6
 reproducido, en ausencia de apareamiento, por el tratamiento de los animales
con un inhibidor de la histona desacetilasa. Esto se confirmó midiendo,
después del apareamiento, el nivel de acetilación de los promotores,
observando un aumento que se correlaciono con un incremento en la expresión
de los respectivos genes.

Como con las regiones diferencialmente metiladas, la distribu-

ción de estas marcas en las histonas, determina la actividad
transcripcional y la identidad de cada tejido. Por ejemplo, en
células cardíacas, muchos factores de transcripción que inter-
vienen en la diferenciación pierden gradualmente las modifi-
caciones represivas como H3K27me3 y ganan en H3K4me3,
características de tejidos transcripcionalmente activos.
Diferentes modificaciones de las histonas pueden influir entre
sí y pueden también interactuar con la metilación del ADN,
configurando una red interdependiente de regulación. Un ejem-
plo de esto último se observa en la mastitis, que como vimos,
induce la metilación de genes que se expresan en glándula
mamaria, reduciendo su expresión. La infección desencadena
también la hiperacetilación de H3 en la cromatinaFigura
asociada 4.
a La acetilación
Figura 4. La de la Lisina
acetilación 1414de
de la Lisina de lalaHistona
HistonaH3 en elH3 en el domino de
los promotores de algunos genes vinculados con la domino de cromatina de los genes
respuesta de los genes que codifican para los receptoresque codifican para los receptores
cromatina de oxitocina (oxtr) y vasopresina (avpr1a) se incrementa luego del de oxitocina (oxtr) y
inflamatoria a la infección, incrementando su expresión.
vasopresina (avpr1a) se incrementa apareamiento ( ang luego del
H y col. apareamiento ( ang H y col.
2013).
Actualmente, varios mecanismos epigenéticos explican efectos
2013).
sobre la memoria y el comportamiento animal. Uno de ellos se
unos 600 miARN con función conocida en la expresión
ha relacionado con el comportamiento monógamo de los Micro-
génica. En mamíferos muchas mutaciones pueden crear o
tus ochrogaster, una especie de roedor silvestre, en el que se
destruir secuencias blanco de miARN en el ARNm de unos
1.3 Regulación
establecen relaciones monógamas después del apareamiento. de la
12.000 expresión génica mediada por ARN no codificantes
genes.
Este efecto mediado por la oxitocina y vasopresina podía ser
Un ejemplo de ello lo constituye el fenotipo doble músculo
reproducido, en ausencia de apareamiento, por el tratamiento
1.3.1 MicroARN en los ovinos de raza Texel que está determinado por una
de los animales con un inhibidor de la histona desacetilasa.
Muchos
Esto se confirmó midiendo, después del apareamiento, el ni-genes en mamíferos se regulan a través de microARN (miARN). Hasta
mutación que crea un sitio de unión a un miARN en el extremo
la aumento
actualidad se3´UTR
handelidentificado
gen de la miostatina
unos (MSTN).
600 miARN La miostatina es una conocida en la
con función
vel de acetilación de los promotores, observando un
proteína de la superfamilia de los factores transformadores
expresión
que se correlaciono con un incremento en la expresión de los génica. En mamíferos muchas mutaciones pueden crear o destruir
de crecimiento β (TGF-β), que se expresa fundamentalmente
respectivos genes. secuencias blanco de miARN
en el músculo en el ARNm
esquelético. Su función de unos 12.000 genes.
es la regulación ne-
1.3 Regulación de la expresión génica mediada Un ejemplo de ello
gativa dello constituye
crecimiento el fenotipo
muscular. La doble
supresión demúsculo
su función en los ovinos de
por ARN no codificantes raza Texel que
seestá
asociadeterminado
con un aumento por de una
la masamutación
muscular, queno crea
sólo un
por sitio de unión a
un miARN en hipertrofia
el extremo del3´UTR
músculodel sinogen de lapor
también miostatina
hiperplasia (MSTN).
lo que La miostatina
se ha convenido en denominar el fenotipo
es una proteína de la superfamilia de los factores transformadores de “doble músculo”.
1.3.1 MicroARN
La sustitución 6723 G A (Adenina sustituye a la Guanina
Muchos genes en mamíferos se regulan a través de mi-
-
presente como alelo salvaje o T) en el gen MSTN en los
esquelético.
croARN (miARN). Hasta la actualidad se han identificado Su función
ovinos de raza esTexel
la regulación negativa
produce un fenotipo de del
doble crecimiento
músculo muscular. La
supresión de su función se asocia con un aumento de la masa muscular, no
72
sólo por hipertrofia del músculo sino también por hiperplasia lo que se ha

La sustitución 6723 G A (Adenina sustituye a la Guanina presente como alelo

salvaje o T) en el gen MSTN en los ovinos de raza Texel produce un fenotipo
 Regulación de la Expresión Génica

debido a la disminución en la expresión de MSTN mediada tercio de miostatina circulante con respecto a los de genotipo
por miR-1 y miR-206, dos miARNs muy abundantes en el GG. Esta reducción, debida a la inhibición de la traducción por
músculo esquelético (Fig. 5 y 6). Se postula que estos miARN estos miARN, es responsable del fenotipo doble músculo. En
aceleran la degradación del ARNm de MSTN que lleva A en la Figura 6 se puede observar la secuencia parcial del extremo
el 3’ UTR. Los animales de genotipo AA presentan sólo un 3´UTR del gen MSTN con los alelos A y G. El miR1 se une
por complementariedad de bases al alelo A pero no al alelo
G. Este fenómeno provoca la degradación de los mensajeros
portadores del alelo A por el complejo RISC.
A Siguiendo con el efecto del ambiente sobre la epigenética,
durante el proceso inflamatorio de la glándula mamaria (masti-
LD tis), la regulación de la expresión genética no sólo se produce
SM a través de la metilación del ADN y la acetilación de histonas,
sino también por aumento de la transcripción de miARN, como
el miARN15a. Dicho miARN regula negativamente los genes
de caseína, reduciendo su expresión.
B Texel MSTN 3'UTR : 5'UACUGUCAUUGUAUUCAAAUCUCAACAUUCCAUUAUUUUAAUA
Input: Texel A ! WT G II: I III IIIIIIII
miR-I : 3'AUGUAUGAAGAAAUG UAAGGU

WT MSTN G
WT MSTN 3'UTR : 5'UACUGUCAUUGUAUUCAAAUCUCAACGUUCCAUUAUUUUAAUA
II: I III II:IIIII
Texel MSTN AGO miR-I : 3'AUGUAUGAAGAAAUG UAAGGU

A
Figura 6. Secuencia parcial del extremo 3´ UTR del gen MSTN Texel
A (A) y salvaje T (G). Obsérvese que la secuencia de miR1 se une
G miR-1/206 por complementariedad de bases al alelo A pero no al alelo G. Este
fenómeno provoca la degradación de los mensajeros portadores del
G G alelo A por el complejo RISC (Takeda H. y col, 2010).
A

Figura 5. A) Oveja Texel con fenotipo de doble músculo. B) Asociación

preferencial del complejo RISC (AGO) al alelo mutante A del gen
MSTN respecto del alelo salvaje G. En músculo esquelético los ARNm
que portan A son menos abundantes que los ARNm (G) en animales
heterocigotas (AG) como resultado de su degradación por el complejo
RISC (AGO) (Takeda H. y col, 2010).

73
 1.3.2 ARN no codificantes de cadena larga
Los ARNlnc (ARN no codificantes de cadena larga) fueron descriptos
previamente en el capítulo 1 ((Genoma y Genes Eucariotas: aspectos
estructurales y funcionales) y cumplen un rol central en la regulación
transcripcional
1.3.2 ARN no codificantes y post-transcripcional
de cadena larga (Fig. 7). Estas
nativo, interacciones,
afectando se producen
la generación de mensajeros, o afectar
por complementariedad de secuencias entre la estabilidad de los ARNm,pre-ARNm
los ARNlnc y ARNm o aumentando o disminuyendo
Los ARNlnc (ARN no codificantes
específicos. Asídepueden
cadenaenmascarar
larga) fue- secuencias, involucradas en el splicing
la vida media de los mensajeros target (Fig. 7, A, B y D).
ron descriptos previamente en afectando
alternativo, el capítulola1 generación
((Genoma yde mensajeros, o afectar la estabilidad de
Genes Eucariotas: los ARNm,estructurales
aspectos disminuyendo la Otra
aumentandoy ofuncionales) vida forma
media dede afectar la disponibilidad
los mensajeros target de ARNm es su
(Fig. 7,enA,laBregulación
y cumplen un rol central y D). Otra transcripcional efecto sobre los miARN, ya
forma de afectar la disponibilidad de ARNm es su efecto sea secuestrando los mismos
sobre
y post-transcripcional los 7).
(Fig. miARN,
Estasyainteracciones,
sea secuestrandose los ymismos
por lo tanto
y porreduciendo su efectosu
lo tanto reduciendo sobre los respectivos
efecto sobre los respectivos
producen por complementariedad de secuencias entre mensajeros o generando
mensajeros onuevos miARN,
generando nuevosya que
miARN, ya que algunos
algunos ARNlnc actúan
los ARNlnc y ARNm o pre-ARNm específicos. Así pueden como precursores
ARNlncde los
actúan mismos
como luego
precursoresde desulos mismos luego de
procesamiento (Fig. 7, E y F).
enmascarar secuencias, involucradas en el splicing alter- su procesamiento (Fig. 7, E y F).

Figura 7. Modos de acción de ARNlnc a nivel post-transcripcional. (A) Estabilización del ARNm, (B) Degradación del ARNm, (C) Direccionamiento a
Figura
ribosomas, 7. Modos
(D) Regulación de acción
del splicing, de de
(E) Secuestro ARNlnc
miARNs,a(F) nivel post-transcripcional.
Precursor de miARNs (Angrand P. y(A)
col, 2015).
Estabilización del ARNm, (B) Degradación del ARNm, (C) Direccionamiento a
74 ribosomas, (D) Regulación del splicing, (E) Secuestro de miARNs, (F)
Precursor de miARNs (Angrand P. y col, 2015).
 Regulación de la Expresión Génica

Su efecto a nivel transcripcional puede ser negativo o positivo, machos, el dosaje genético es diferente entre ambos sexos,
reduciendo o incrementando la tasa de transcripción (Fig. 8). generando un desbalance, que se compensa a través de la
Así, los ARNlnc pueden interaccionar con la secuencia de heterocromatinización del cromosoma X adicional presente
un promotor, disociando el complejo basal requerido para en las hembras (heterocromatina facultativa).
la transcripción, o puede interactuar con los factores de Este proceso, se inicia poco después de la fecundación en el
transcripción atrayéndolos o alejándolos de las secuencia cromosoma X que será silenciado en una región denominada
promotoras. Su efecto a nivel transcripcional puede ser
XICnegativo o positivo,
(X inactivation reduciendo
center). XIC o regiones re-
contiene varias
incrementando
Además de su función regulatoria a la tasa
estos de interaccio-
niveles, transcripción gulatorias
(Fig. 8).y cuatro
Así, genes,
los ARNlnc pueden
uno de ellos es XIST. Al comienzo
interaccionar con la secuencia
nan con otros componentes epigenéticos, como ocurre con de un promotor,
de la inactivación, XIST se transcribe basal
disociando el complejo desde el cromosoma
requerido
el ARNlnc responsable paray mantener
de iniciar la transcripción, o puede
la inactivación X queinteractuar con(Xi),
se va a inactivar losy elfactores de
ARNlnc resultante cubre por
transcripción
de uno de los cromosomas X enatrayéndolos
las hembras deomamíferos.
alejándolos de las secuencia
completo promotoras.
al cromosoma induciendo en cis una cascada de
Al presentar éstas un cromosoma X adicional respecto de los cambios que conducen a la heterocromatinización del mismo.

Figura 8. Efectos de los ARNlnc sobre la transcripción. A) Interacción ARN-ADN impide la formación del complejo basal, (B) Unión a factores de
transcripción, alejándolos del promotor, C) O su efecto opuesto, direccionándolos hacia el promotor, (D) Regulación sobre el tráfico de reguladores
Figura 8. Efectos de lostranscripcionales
ARNlnc sobre la transcripción. A) Interacción ARN-
(Angrand P. y col, 2015).
ADN impide la formación del complejo basal, (B) Unión a factores de
transcripción, alejándolos del promotor, C) O su efecto opuesto, 75
direccionándolos hacia el promotor, (D) Regulación sobre el tráfico de
reguladores transcripcionales (Angrand P. y col, 2015).
Entre los cambios se encuentra: la desacetilación y metilación
de las histonas 3 y 4 en distintos residuos de lisina (H3K4,
H3K9, H3K27 y H4k20), aumento de la macrohistona H2A, Xist
PRC2-RepA loads on to chromatin.
metilación de promotores y la formación de un complejo re- PRC2 methylates ( ) the future Xi.
Tsix
presivo para el acceso de la ARN polimerasa II por medio de
la asociación a una proteína del complejo Polycomb (PRC2),
responsable de las metilaciones en las histonas (Fig. 9 y 10).
Production of Jpx RNA (not shown)
La elección del cromosoma (paterno o materno) a ser si- Xist RNA
and the loss of Tsix sunthesis
lenciado se produce al azar y de hecho en algunas líneas Xist promotes Xist RNA expression

celulares de la hembra se inactiva un cromosoma y en otras Xist binds to PRC2.

líneas, se inactiva otro. Solo unos pocos genes del cromo-

soma inactivado, no son silenciados, entre ellos XIST, cuya
transcripción constitutiva es requerida para el mantenimiento PRC2-Xist spread along the future
Xi and methylates the entire chromosome.
del silenciado epigenético.
Xist

PRC1 X-linked
Xist RNA
PRC2 gene MacroH2A
expression scilencing Xi
localisation localisation

Hypo-
Xic H4 acetylation Figura 10. Detalle de los cambios epigenéticos asociados al
silenciamiento del cromosoma X (Lee T, 2012).
H2AK119ub1 establishment of
Xist RNA accumulation
Pol II exclusion
H3K27me3
H4K20me1
late replication inactive
X chromosome
la misma, reduce la progresión de la ARN polimerasa, y la
formación del ARNm, favoreciendo el reclutamiento local de
Figura 9. Inactivación del cromosoma X y cambios epigenéticos
asociados (Ohhata y utz, 2013)
los factores de splicing en exones con sitios débiles, permi-
tiendo la inclusión de estos exones. Además, otros cambios
epigenéticos como las modificaciones post-traduccionales
de las histonas, afectan el reclutado de los reguladores del
1.5 Control epigenético del splicing alternativo splicing que reconocen secuencias en el mensajero naciente.
Como vimos en las secciones previas, en particular con los Por ejemplo la trimetilación de la histona 3 (H3K4me3) desen-
ARNlnc, la regulación a nivel epigenético se extiende a dis- cadena una cascada de eventos (unión de la proteína CHD,
tintos niveles, incluyendo el control del splicing alternativo. reclutamiento de la ribonucleoproteína U2 y de MRG15, que
Como se explicó en el Capítulo 1 (Organización de genes atrae a la proteína PTB al sitio débil del splicing) que inducen
y genomas), el splicing alternativo depende de la tasa de la eliminación del exón. Si no se produce la trimetilación de
transcripción de la ARN polimerasa, la cual está afectada por H3 (H3K4me3), no se presenta MRG15, no se recluta PTB a
la estructura de la cromatina. Una estructura compacta de su sitio de unión al y no se excluye el exón (Fig. 11).

76
 Regulación de la Expresión Génica

ARN polimerasa rápida Complejos adaptadores de splicing

H3K4me3
débil Proteína
adaptadora
fuerte

U2

Figura 11. Efecto de la cromatina en el splicing alternativo. A) Regulación por la velocidad de elongación de la ARN Pol II. B) Modificaciones en las
histonas (círculos rojos) pueden reclutar factores de splicing a través de un adaptador (Luco y col, 2011).

2. Regulación a nivel de la secuencia del Cada célula del organismo adulto está caracterizada por una
dotación de proteínas reguladoras, (que pueden actuar en
ADN trans sobre genes que no se hallan en continuidad lineal con el
Bajo este término se agrupan una serie de secuencias de gen regulador o en cis cuando ejercen su efecto sobre genes
nucleótidos que interactúan con diferentes tipos de proteínas que se hallan en el mismo cromosoma) y que funcionan como
reguladoras para regular la expresión génica e incluyen a: activadoras o represoras de diferentes genes en diferentes
promotores, potenciadores, silenciadores, delimitadores y momentos del desarrollo.
elementos de control del locus. Una proteína reguladora de la expresión génica reconoce una
Estas secuencias pueden ser propias de cada gen (promotor secuencia específica en el ADN. Las proteínas establecen un
o elementos de control del locus) o comunes a varios genes gran número de contactos con la molécula del ADN a través
(potenciadores, silenciadores y delimitadores). de uniones débiles en forma directa o mediada por ARNlcn

77
 último ilustrado com m s detalle, en el regulador CTCF, que participa en
muchos proceso de regulación (Fig. 13).

como se vio antes (Fig. 8). Las proteínas reguladoras efecto

pre- sobre genes que se hallan en el mismo cromosoma) y que funcionan
sentan dominios estructurales conservados del tipo a)como héliceactivadoras o represoras de diferentes genes en diferentes momentos del
desarrollo.
vuelta hélice, b) hélice loop hélice, c) cremallera de leucina o
d) dedos de zinc, este último ilustrado en el reguladorUnaCTCF,proteína reguladora de la expresión génica reconoce una secuencia
que participa en muchos proceso de regulación ([Link]ífica
12). en el ADN Las proteínas establecen un gran número de contactos
con la molécula del ADN a través de uniones débiles en forma directa o
2.1. Promotores mediada por ARNlcn como se vio antes (Fig. 8). Las proteínas reguladoras
Su estructura y función se explicó en el capítulo 1 (Genoma
presentan dominios estructurales conservados del tipo a) hélice vuelta hélice,
y Genes Eucariotas: aspectos estructurales y funcionales). A loop hélice, c) cremallera de leucina o d) dedos de zinc, este último
b) hélice
nivel epigenético, los genes que se están expresando poseen
ilustrado en el regulador CTCF, que participa en muchos proceso de regulación
Figura 12. Esquema de diferentes proteínas reguladoras y su unión a ADN.
usualmente promotores hipometilados, con regiones (Fig.
de cro-
12). Figura 12. Esquema de diferentes proteínas reguladoras y su unión a ADN.
matina cuyas histonas presentan marcas del tipo H3K4me3,
H3K9ac, H3K27ac, asociadas a regiones abiertas.
2.2. Potenciadores o enhancers
Estas secuencias pueden incrementar la transcripción de un
gen, independientemente de la orientación y de la distancia
a la que se encuentren en relación con el sitio de inicio de la
transcripción, originalmente se identificaron en cis. Se pueden
situar a grandes distancias dentro de un intervalo que puede
ir desde 200 pb hasta decenas e incluso centenas de kilo-
bases. Los potenciadores pueden relacionarse físicamente
con la secuencia promotora del gen a través de interacciones
proteína-proteína. Se formaría un holocomplejo que facilita
los procesos de iniciación y elongación en los que participa
la ARN polimerasa II. También pueden facilitar la transcrip- Figura 13. Esquema del factor nuclear CTCF, que presenta múltiples dedos de
ción al atraer proteínas con diferentes actividades a la región n. En cada dedo, un átomo de metal se asocia a histidinas y cisteínas de la
cadena de aminoácidos.
promotora, para relajar la estructura de la cromatina y facilitar
la formación del complejo de pre-iniciación. 2.1 Promotores
Su estructura y función se explicó en el capítulo 1 (Genoma y Genes
A nivel epigenetico, los potenciadores activos están hipome- Eucariotas: aspectos estructurales y funcionales). A nivel epigenético, los
tilados y presentan marcas como H3K4me1, diferentes a las 12. Esquema
Figura genes que sedel
estánfactor
Figura 13. Esquema delnuclear
expresando poseenCTCF, que
usualmente
factor nuclear CTCF, quepresenta múltiples dedos de
promotores hipometilados,
presenta múltiples
observadas en los promotores, que indicarían la presencia de cadacon
n. En dedos
regiones de cromatina cuyas histonas presentan marcas del tipo
dedo,de un
n. átomo
En cada de
dedo, metal
un se
átomo deasocia
metal sea histidinas
asocia a y cisteínas
histidinas y de la
H3K4me3, H3K9ac, H3K27ac, asociadas a regiones abiertas.
un enhancer en las regiones ricas en estas modificaciones.
cadena de aminoácidos. cisteínas de la cadena de aminoácidos.

14
78 2.1. Promotores
Su estructura y función se explicó en el capítulo 1 (Genoma y Genes
Eucariotas: aspectos estructurales y funcionales). A nivel epigenético, los
genes que se están expresando poseen usualmente promotores hipometilados,
con regiones de cromatina cuyas histonas presentan marcas del tipo
 Regulación de la Expresión Génica

2.3. Silenciadores o silencers 2.6 Ejemplos de la organización de la cromatina

En las secuencias regulatorias distales también se pueden e interacción con elementos reguladores de
localizar secuencias denominadas silenciadoras. Estas se- secuencia
cuencias se han definido como secuencias a los que se unen Ejemplo 1: Organización de la cromatina en el locus de la b
factores nucleares y regulan en forma negativa o reprimen globina del pollo
el proceso de transcripción. Dichas secuencias ejercen su Los dominios activos se encuentran delimitados por señales
función de manera independiente de su posición y orientación de cromatina transcripcionalmente activa (ej. histonas hipe-
en relación con el sitio de inicio de la transcripción. racetiladas) y sus límites definen claramente una transición
2.4. Delimitadores entre cromatina transcripcionalmente activa y la cromatina
transcripcionalmente inactiva. Un ejemplo se presenta en el
Los genes se organizan en regiones de la cromatina “abier- dominio b globina del pollo de 55 kb formado por un gen que
tas”, en un tiempo y espacio determinado del desarrollo. A se expresa en la etapa fetal ( ), dos genes adultos (bH y bA)
estas regiones se las conoce también como dominios cro- y un gen embrionario ( ). Este dominio está delimitado por
mosómicos transcripcionalmente activos, que poseen lími- elementos tipo “insulator”, que en su extremo 5’ lo separa de
tes bien definidos e incluyen a los elementos de regulación una región de 16 kb de cromatina compacta y metilada, y en
necesarios para llevar a cabo la transcripción de sus genes. su extremo 3’ de un enhancer que actúa sobre un gen que co-
Como se explicó en el capítulo 2 (Organización del ADN en difica para uno de los receptores olfatorios (OR) con expresión
cromatina), los límites entre cromatina activa e inactiva están cerebro específica. Los límites tanto 5’ cHS4 y 3’ cHS definidos
constituidos por delimitadores (insulators). Estos delimitado- por el insulator están asociados a CTCF, un factor nuclear con
res serían responsables de la formación y el mantenimiento múltiples dedos de n, lo que permite una posible interac-
de un dominio o región en la que se encuentran varios genes ción física y la formación de un asa cromatínica entre los
transcripcionalmente activos. extremos que definen el dominio (Fig. 14).
2.5. Elementos de control del locus
En cambio, las regiones de control del locus (LCR o Locus 5' cHS4 3' cHS
Insulator Insulator
Control Region) son secuencias de ADN que contienen CTCF CTCF
múltiples sitios de unión para las proteínas activadores de la HSA LCR ! "H "A $
FR OR
transcripción, formando un sitio abierto en la cromatina que
es fácilmente identificado por el corte por ADNsa I (sitios de "#$
hipersensibilidad a la DNasa). Los LCR abarcan zonas del 16 kb cromatina enhancer cerebro
compacta HS
genoma de corta extensión (200 a 600 pb) donde se ve favo-
recida la unión de los factores de transcripción a las regiones Figura 14. Estructura de la organización del dominio del gen de la b
promotoras debido a que la cromatina es más laxa. globina del pollo (Recillas Targa, 2004)

79
 Ejemplo 2: Efecto del imprinting sobre la regulación de los compacta. Las regiones entre territorios participan de la
genes IGF2/H19 expresión génica. Las regiones del genoma que serán trans-
Como se puede observar en la Figura 15, un ejemplo de blo- criptas se relocalizan en la periferia de los territorios donde se
queo de la actividad de un enhancer es la regulación de los encuentran con la ARNpol y los factores necesarios para la
genes IGF2/H19 mediada por el factor CTCF (CCCTC bin- transcripción y procesado del ARN (Fig. 16). La organización
ding factor), el cual se une al delimitador ICR (imprinting control de estos dominios es dinámica y diferente de acuerdo al tipo
region). La proteína reguladora CTCF al unirse delimitador celular como lo ilustra la figura 17.
bloquea la acción del enhancer PO sobre el promotor del gen
IGF2, silenciando el alelo materno. En el alelo de origen pa-
dominio
terno, el delimitador ICR se encuentra metilado, impidiendo la Modelo de dominios intercromatiniano gen
inactivo
unión de CTCF, y por lo tanto su efecto como delimitador; esto intercromosomas
permite que el enhancer PO active la expresión de IGF2. Por gen
lo tanto la metilación diferencial de ICR, de acuerdo al origen activo

paterno/materno del alelo, determina qué genes se expresarán. RNA granulos

intercromatinianos

Modelo de
compartimientos Territorios
cromatinianos
intercromatiniano
membrana
nuclear
asas de
lámina
cromatina
nuclear

Figura 16. Dominios genómicos dentro del núcleo (Recillas Targa, 2004)

Figura 15. Rol de los delimitadores en la regulación del efecto de

Figura 14. Rol de los delimitadores enlos
imprinting de lagenes
regulación del efecto de imprinting de
IGF2/H19
los genes IGF2/H19

3. Organización del genoma en el interior

3 Organización del genoma en el interior del núcleo
El núcleodel núcleo
celular es una entidad dinámica que participa en la regulación de la
expresión génica. Dentro del núcleo, el genoma se organiza en dominios. Las
regiones El másnúcleo celular
centrales del es una entidad
interior dinámica
de un dominio que participa
presentan en más
la cromatina
compacta. la Las
regulación
regionesde la expresión
entre territorios génica.
participanDentro del núcleo,
de la expresión el
génica. Las
regiones genoma
del genoma se organiza
que seránen dominios. se
transcriptas Las regiones en
relocalizan másla centra-
periferia de los
territoriosles
donde
del se encuentran
interior de un con la ARNpol
dominio y los factores
presentan necesarios
la cromatina más para la
transcripción y procesado del ARN (Fig. 15). La organización de estos dominios
es dinámica 80 y diferente de acuerdo al tipo celular como lo ilustra la figura 16.
 Regulación de la Expresión Génica

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cada tipo [Link] Regiones
mismo cromosoma (círculos o ende colores)diferentes
cromosomas dentrointeraccionan
del mismo cromosoma the bovine alpha S1 casein gene after once or twice daily milking. PLoS ONE 9(11):
o en cromosomas entrediferentes
sí en una forma específica de cada
interaccionan tipo celular.
entre sí en Esto unapermite
formauna especí[Link]:
de 10.1371/[Link].0111556.
vinculación entre dominios transcripcionalmente activos, cuya regulación
cada tipo celular. Esto permite una
es compartida. vinculación entre dominios
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 Biotecnología y Genómica Animal

Biotecnología y Genómica Animal

Soria, Liliana A; Martínez, Marcela y Huguet, Miguel J.

Introducción el campo de la genética zootécnica son: la identificación de

individuos, la detección de animales portadores de variantes
En este capítulo se tratarán una serie de temas relacionados genéticas de interés, la selección asistida por marcadores y
con la Biotecnología aplicada a la Genómica Animal y a la la selección genómica.
Producción Animal.
De acuerdo al Convenido sobre la Diversidad Biológica de
Naciones Unidas, por biotecnología se entiende a toda aplica- 1. Biotecnología Animal
ción tecnológica que utilice sistemas biológicos y organismos La aplicación de técnicas biotecnológicas ha permitido la clo-
vivos o sus derivados para la creación o modificación de nación de animales de diferentes especies de interés, entre
productos o procesos para usos específicos. ellas: ovinos, caprinos, porcinos, equinos, bovinos, caninos y
En el campo de la medicina veterinaria existen algunas felinos. Las razones por las cuales se realiza la clonación de
técnicas de biotecnología que se aplican en forma genera- animales pueden ir desde el interés afectivo en el caso de una
lizada desde hace muchos años, un caso es la producción mascota, hasta multiplicar un animal de alto valor genético (ej.
de vacunas. Con relación al mejoramiento genético, las bovinos productores de carne o leche), recuperar animales en
tecnologías más desarrolladas y difundidas han sido aplica- extinción, prolongar la vida de un animal de alto rendimiento
das en reproducción y orientadas a aumentar la difusión del (ej. caballos de polo), etc.
material genético de alto valor. La más antigua y difundida
La Biotecnología Animal moderna también se centra en la
es la inseminación artificial, y en menor medida, la ovulación
creación de animales modificados genéticamente para ayudar
múltiple y la transferencia embrionaria.
a la comprensión y el tratamiento de enfermedades humanas
En este capítulo se tratarán las estrategias y métodos em-
pleados para clonar animales, modificar la composición y a crear animales transgénicos que produzcan proteínas y
genética de los mismos (OGM, Organismos Genéticamente otros productos para ser utilizados en seres humanos.
Modificados) y corregir defectos genéticos a través de la La terapia génica es uno de los usos innovadores de la
terapia génica y la selección del sexo. tecnología del ADN recombinante, el cual ofrece un enorme
La Genómica Animal es una rama de la biología molecular potencial al tratamiento generalizado de numerosas enfer-
que estudia la estructura, evolución y función de los geno- medades genéticas en humanos y en animales. Durante
mas de las especies. Sus principales áreas de aplicación en muchos años, la terapia génica aplicada en humanos, ha

85
 Soria, Liliana A; Martínez, Marcela y Huguet, Miguel J.

sido centro de controversia pública, por cuestiones éticas, Los primeros intentos de clonación realizados en mamíferos se
legales y sociales. Sin embargo, se han logrado algunos desarrollaron en ratones a comienzo de los años ´80, gracias
avances asombrosos no sólo en el laboratorio de investiga- a los cuales, hoy en día es posible clonar animales de interés
ción con animales, sino también en algunos casos clínicos veterinario. Existen varios tipos de estrategias de clonación:
con pacientes humanos.
Las técnicas de laboratorio que se citan en cada uno de los Gemelación: Por medio de la partición de un embrión
distintos tópicos que se tratan en este capítulo se detallan se pueden obtener individuos semejantes entre si, pero
someramente en el anexo. diferentes a la generación que le dio origen. Esto se
realiza separando los blastómeros de embriones preim-
1.1 Clonación plantatorios (de 2-32 células) a la mitad e introduciendo
La clonación se puede definir como la acción de generar cada mitad en una membrana pelúcida de un óvulo.
clones, pero hay que hacer una diferencia en la definición de Estos óvulos se implantan en úteros receptores. No es
clon. Se puede definir un clon como un conjunto de fragmen- una clonación propiamente dicha sino que deberíamos
tos idénticos de ácido desoxirribonucleico (ADN) obtenidos nombrarla como una gemelación artificial. Se ha aplicado
a partir de una secuencia original, pero también un clon es desde hace años en ganadería ovina y se ha logrado que
un conjunto de células u organismos genéticamente idén- algunos blastómeros de embriones de 4-8 células originen
ticos, originados por reproducción asexual a partir de una individuos completos.
única célula u organismo, o por división artificial de estados
embrionarios iniciales. Paraclonación: Es una técnica de clonación donde se
La primera definición es la que hace referencia a la utilización transfieren núcleos procedentes de blastómeros en óvulos
de técnicas de Ingeniería Genética para aislar un fragmento no fecundados. Por medio de la paraclonación se obtiene
de ADN, incorporarlo a un plásmido bacteriano y permitir que individuos casi idénticos entre sí, siendo clones del indi-
una bacteria lo amplifique. La segunda definición incluye a la viduo que hubiera surgido del embrión destruido. A me-
de clonación de organismos superiores genéticamente idénti- diados de los años 80, S. Willadsen, obtuvo terneros por
cos, utilizando para tal fin métodos de reproducción asexual. paraclonación de núcleos de embriones de 128 células.
Desde el siglo XIX se sabe que es posible clonar plantas a En 1996, ilmut y Campbell lograron dos ovejas (Megan
partir de una única célula tomada de alguna de sus partes y Morag) por transferencia de núcleos de embriones.
(tallo, hoja, raíz, etc.). Recién en 1967, ohn Gurdon logró
desarrollar embriones de rana africana (Xenopus lavéis) Clonación: La clonación propiamente dicha consiste en la
destruyendo con radiación ultravioleta el núcleo de huevos transferencia de núcleos de células de individuos ya naci-
no fecundados e inyectando en ellos núcleos de células dife- dos a óvulos o cigotos enucleados. El embrión resultante
renciadas. Aunque dichos embriones morían antes de llegar se implanta en un útero receptor, originándose individuos
al estado de renacuajo, estos estudios demostraron que el idénticos entre sí y al donante. Los individuos que se ob-
núcleo de una célula diferenciada contiene toda la información tienen son genéticamente idénticos entre sí e idénticos al
genética necesaria para generar un organismo. individuo del cual se extrajo el material genético.

86
 Biotecnología y Genómica Animal

división celular está detenida hasta la fusión con la gameta

masculina, es enucleado (eliminación del núcleo) y recibe
Transferencia Nuclear Celular Somática en su espacio perivitelino, al fibroblasto que será clonado.
El año 1996 marcó el inició de la clonación animal con el La fusión de las membranas celulares es promovida por un
nacimiento de la oveja Dolly, el primer mamífero en ser clo- pulso eléctrico, que desencadena además la liberación in-
nado por la técnica de transferencia nuclear celular somática. tracelular de calcio, estimulando la continuidad de la división
Actualmente, este procedimiento se ha aplicado a más de 16 meiótica en el óvulo receptor, así como las primeras divisio-
especies animales
Transferencia Nuclear Celular([Link]ática
1). Sus aplicaciones incluyen la mul- nes del embrión resultante. Aproximadamente una semana
tiplicación
El año 1996 marcóde elanimales de alto animal
inició de la clonación mérito congenético
el nacimiento(toros y vacas
de la oveja Dolly, más tarde, el embrión que fue mantenido en una estufa de
eldonantes, caballos
primer mamífero en ser de polo),
clonado por la
la preservación de especies
técnica de transferencia en
nuclear celular cultivo, es transferido al útero de una hembra receptora,
somática.
riesgo de Actualmente,
extinción esteoprocedimiento
la clonación se ha
deaplicado
mascotas a másporde 16 especies
razones como en otros procedimientos de transferencia embrionaria
animales (Fig. 1).
afectivas. EnSusbovinos
aplicaciones incluyen
y en la multiplicación
equinos, se ha de animales de alto
convertido enmérito
una (Fig. 2). En bovinos, y en promedio (los porcentajes varían
genético (toros y vacas donantes, caballos de polo), la preservación de especies en de acuerdo a las fuentes consultadas), sólo el 4-5 % de los
herramienta complementaria a las técnicas de inseminación
riesgo de extinción o la clonación de mascotas por razones afectivas. En bovinos y en
artificial
equinos, se o
ha de transferencia
convertido embrionaria
en una herramienta para apreservar
complementaria las técnicas el
de
embriones transferidos sobreviven a término, y de los nacidos,
pool genético
inseminación artificial de animalesembrionaria
o de transferencia muy valiosos, especialmente
para preservar el pool genético de aproximadamente el 30-40% no alcanzan el estado adulto
cuandomuy
animales hanvaliosos,
llegadoespecialmente
al fin de sucuando
vida reproductiva.
han llegado al fin Uno de de
su sus
vida debido a un conjunto de defectos conocidos bajo el término
aplicaciones
reproductiva. Uno de más valiosas ha
sus aplicaciones más sido
valiosaslahaclonación de animales
sido la clonación de animales de síndrome del crecimiento fetal exagerado (LOS, Large
transgénicos,
transgénicos, que demostraron
que demostraronbuena expresión
buena delexpresión
transgen, garantizando así su
del transgen, Offspring Syndrome). Se trata de fallas en la placentación del
perpetuación.
garantizando así su perpetuación. embrión, que derivan en problemas inmunológicos, defectos
cardiovasculares y respiratorios, y que conducen a abortos
tempranos o muerte perinatal. Estas fallas son atribuidas a
defectos en la reprogramación epigénetica del ADN nuclear
transferido. Considerando que entre 8.000 a 10.000 genes
que se expresaban en la célula somática (fibroblasto en este
caso) deben ser “silenciados” y aproximadamente 10.000
genes, requeridos para el desarrollo embrionario, deben ser
correctamente expresados, no resulta difícil explicar la baja
Figura
Figura1. Cronología de los principales
1. Cronología eventos en la Clonación
de los principales eventos Animal (adaptado de Animal
en la Clonación Suk y col, eficiencia del proceso de clonación. Eficiencia que es aún
2007). (adaptado de Suk y col, 2007). menor en otras especies animales.
Estudios realizados comparando clones y sus fundadores
ElElprocedimiento
procedimiento de transferencia nuclear se inicia
de transferencia con la se
nuclear obtención
iniciadeconcélulas
la (fundador es el animal, cuyo material genético fue clonado)
somáticas del animal a ser clonado, generalmente fibroblastos
obtención de células somáticas del animal a ser clonado, de la oreja, que son revelaron cambios epigenéticos entre ambos, manifestados
cultivados in vitro hasta el momento de la transferencia. Simultáneamente, se aíslan
generalmente fibroblastos de la oreja, que son cultivados in
óvulos provenientes de ovarios de frigorífico, cuyo citoplasma recibirá el núcleo a ser en los patrones de metilación de los genes que experimentan
vitro hasta
transferido. el momento
El óvulo, decelular
cuya división la transferencia.
está detenida hastaSimultáneamente,
la fusión con la gameta “impriting” o en la extensión de la heterocromatización del
se aíslan
masculina, óvulos (eliminación
es enucleado provenientes de ovarios
del núcleo) y recibe ende frigorífico,
su espacio cuyo
perivitelino, al cromosoma X, etc. A estas variaciones, y al efecto ambiental,
citoplasma
fibroblasto recibirá
que será clonado. el
La núcleo a ser
fusión de las transferido.
membranas celulares esElpromovida
óvulo, cuya
por un se le han adjudicado las diferencias de fenotipo (distribución
pulso eléctrico, que desencadena además la liberación intracelular de calcio,
87
estimulando la continuidad de la división meiótica en el óvulo receptor, así como las
primeras divisiones del embrión resultante. Aproximadamente una semana más tarde, el
embrión que fue mantenido en una estufa de cultivo, es transferido al útero de una
hembra receptora, como en otros procedimientos de transferencia embrionaria (Fig. 2).
En bovinos, y en promedio (los porcentajes varían de acuerdo a las fuentes consultadas),
 Soria, Liliana A; Martínez, Marcela y Huguet, Miguel J.

de manchas en el pelaje, rendimiento productivo, etc) obser-

vadas entre ambos grupos de animales.
Debido a la naturaleza impredecible de estas variaciones, se
ha debatido extensamente sobre la seguridad de introducir
en el mercado productos (carne y leche) derivados de clones
o de sus crías. En Estados Unidos, donde son considerados
productos seguros para el consumo humano, se ha aceptado
su comercialización, en tanto que en Europa ha sido estric-
tamente prohibida.

Situación en nuestro país

En nuestro país, tanto en el ámbito privado como
público, se han clonado bovinos, equinos, ovinos y
caprinos. A nivel privado, la empresa de biotecno-
logía Biosidus generó animales transgénicos, que
fueron más tarde clonados. Ñandubay, el primer
caballo clonado en Sudamérica, fue desarrollado a
partir de la colaboración entre la Facultad de Agro-
nomía de la UBA y Biosidus. En el ámbito privado
también, Goyaike, otra empresa biotecnológica
especializada en genética bovina, produjo más
de 100 clones de diferentes razas bovinas. Esta
empresa, con filiales en Brasil, Chile y Estados
Unidos, ha sido una de las principales producto-
ras de genética por transferencia nuclear a nivel
mundial. En la actualidad la mayor demanda se
centra en la clonación de caballos de las razas
Polo Argentino y criollos de alto valor comercial.
El procedimiento de clonación de equinos ha
resultado muy complejo, y los clones de la raza
Polo que existen en el país, fueron generados en
Estados Unidos a partir de material genético de
Figura 2. Figura
Esquema 2. Esquema de ladetécnica
de la técnica de clonación
clonación de mamíferos
de mamíferos (Código (Código
Sanitario para los animales locales.
Sanitario
Animales Terrestres, para los Animales Terrestres, [Link]
[Link]

88
Estudios realizados comparando clones y sus fundadores (fundador es el animal, cuyo
material genético fue clonado) revelaron cambios epigenéticos entre ambos,
manifestados en los patrones de metilación de los genes que experimentan “impriting” o
en la extensión de la heterocromatización del cromosoma X, etc. A estas variaciones, y
 Biotecnología y Genómica Animal

1.2 Animales Transgénicos ha ocurrido, en el área animal, con la aprobación en Estados

Unidos en el año 2010 de la variante AquAdvantage salmon,
Incluidos en la categoría de los Organismos Genéticamente un salmón transgénico que es capaz de crecer en la mitad
Modificados (OGM), los animales transgénicos son aquellos de tiempo respecto de los ejemplares no modificados, debido
en los que se ha introducido uno ó más genes provenientes a la expresión de la hormona de crecimiento de otro tipo de
de otra especie a fin de optimizar propiedades existentes salmón y puede además resistir bajas temperaturas al ex-
o incorporar nuevas. Los métodos que se emplean para la presar un gen con propiedades anticongelantes proveniente
introducción del ADN no pueden controlar el sitio de la incor- de otra especie de pez.
poración, lo que conlleva el riesgo de interrumpir secuencias Los objetivos presentes en la generación de organismos
de importancia en el genoma blanco o quedar expuestos a transgénicos han estado siempre presentes en la agricultura y
una regulación no controlada de su expresión. Debido a ello, ganadería tradicional, donde la cría representa seleccionar y
cuando se obtiene una inserción exitosa, se trata de replicar reproducir variantes de cultivo o de cría, superiores respecto
el organismo reproduciéndolo o clonándolo. En el primer del promedio. En este sentido, la transgénesis permite llevar
caso, en promedio sólo la mitad de las crías recibirán el gen adelante estos propósitos en un sentido más directo y en un
o genes insertados, por lo que la clonación, como reproduc- lapso de tiempo más corto.
ción asexual, se ha convertido en una opción más favorable.
En nuestro país, la empresa Biosidus, produjo la vaca Pampa 1.3 Terapia Génica
Mansa, incorporando el gen de la hormona del crecimien- La terapia génica es una técnica terapéutica destinada a
to humana para ser expresado en células de la glándula restituir la función de un gen mutado y/o anular el efecto del
mamaria de una vaca de la raza lechera ersey. Otro tanto mismo, sí su expresión causa daño celular, transfectando
se hizo con el toro Pampero. Pampa Mansa fue más tarde ADN recombinante a las células del paciente afectado. Se
clonada, obteniéndose Pampa Mansa II y Pampa Mansa III, aplica tanto a defectos genéticos congénitos como adquiridos.
generando un proyecto de tambo farmacéutico, en el cual la De acuerdo al procedimiento de aplicación, la terapia puede
hormona pudiera ser fácilmente producida y aislada a partir clasificarse como:
de la leche estas vacas transgénicas. Se han desarrollado
además linajes de vacas, que producen la hormona de cre- -Terapia génica ex vivo: consiste en el tratamiento aplicado
cimiento bovino para uso veterinario y animales productores a células extraídas del paciente, que luego son reintegra-
de insulina humana. das al mismo. Se aplica por ejemplo a la corrección del
Además de su utilización en el área farmacéutica, una apli- síndrome de inmunodeficiencia combinada severa, en la
cación central de los OGM está en el área de los alimentos. que no hay funcionalidad de los linfocitos B y T debido a
Así ocurre con las variantes comerciales de soja transgénica, deficiencia genética de la enzima Adenosina Desaminasa.
en la que se ha introducido el gen de resistencia al glifosato, La terapia consiste en introducir una copia del gen en los
un herbicida empleado para controlar las malezas de los linfocitos de la sangre colectada de los pacientes, que luego
campos sembrados con esta variante de soja. Estas variantes es re-transfundida a los mismos.
son aceptadas para el consumo humano y animal, aunque
las regulaciones varían de acuerdo a cada país. Otro tanto
89
 Soria, Liliana A; Martínez, Marcela y Huguet, Miguel J.

-Terapia génica in vivo: consiste en la inoculación de ADN leucemia atribuidas a la activación de un gen tumoral en
empleando agentes que permiten su llegada e incorpora- lo glóbulos blanco tratados.
ción a las células afectadas. Ejemplo de esta terapia es
la administración local (subretinal o intravitreal) de genes -Liposomas con ADN encapsulado: Se trata de membranas
terapéuticos para el tratamiento de varias formas de ce- lipoproteícas, que pueden fusionarse con las membranas
guera hereditaria en perros. celulares permitiendo la entrada del ADN. Este procedi-
miento logra tasas de expresión menores a las obtenidas
Para ambos tipos de terapias, se han usado varios procedi- con los vectores virales por lo cual no es aún la terapia de
mientos de administración del ADN recombinante: elección. Sin embargo presenta dos ventajas respecto de
las terapias virales: en primer término no genera respuesta
-Inyección del ADN “desnudo”: con muy baja eficiencia, de- inflamatoria en el paciente como ocurre con la administra-
bido a su rápida degradación por endonucleasas celulares. ción de altas dosis de virus, que en algún caso ha tenido
curso fatal. Y adicionalmente, pueden transportar canti-
-Uso de vectores virales: capaces de infectar células e in- dades más grandes de ADN de las que puede cargar los
yectar el ADN encapsulado en el virión. Se trata de virus virus, una limitante en el empleo de los mismos.
recombinantes atenuados, en los que los genes virales res-
ponsables de la replicación viral son reemplazados por los Considerando lo anterior, los desafíos de estos tratamientos
genes terapéuticos. Se han utilizado adenovirus (del tipo de incluyen lograr:
la gripe), lentivirus o retrovirus, estos últimos con capacidad
-Administración específica, es decir dirigida sólo a las células
para integrar su material genético en el genoma nuclear.
blanco. Este aspecto es crítico para aumentar la eficiencia
Los primeros, cuyo ADN no se integra quedando como un
del tratamiento. Eso puede lograrse realizando inoculacio-
episoma o elemento genético extra-cromosómico, son útiles nes localizadas (ej. a nivel subretinal para la corrección de
para células en reposo. En tanto que para células en activa cegueras de origen genético y no en la corriente sanguínea
división, la elección son los retrovirus, cuya expresión será general) o empleando promotores con especificidad de tejido
más prolongada. Sin embargo, y dado que no es posible en las construcciones de ADN recombinante.
predecir los sitios de inserción del ADN recombinante, el
efecto puede resultar más perjudicial que benéfico, ya que -Expresión controlada y suficiente, es decir que una can-
la inserción puede afectar la expresión de genes requeridos tidad apropiada de células afectadas reciba los genes
para la función celular o activar oncogenes o genes supreso- terapéuticos y que éstos se expresen durante el tiempo
res de tumores. Este tipo de efecto colateral fue reportado en suficiente para restaurar la función celular. Esto suele re-
un ensayo clínico en el año 2000, donde 9 niños afectados querir repetir el tratamiento, tanto porque que la cantidad
por el síndrome de inmunodeficiencia combinada severa de células transfectadas fue insuficiente como a causa
fueron tratados por terapia génica retroviral. Tiempo después de que la expresión de los genes no alcanzó los niveles
del tratamiento, 3 de ellos desarrollaron varias formas de requeridos para restaurar la función celular.

90
 Biotecnología y Genómica Animal

-Evitar la respuesta inmune del hospedador, que puede

destruir el agente terapéutico (virus) o dañar al paciente
que recibe el tratamiento.

Además de restaurar la función de un gen, la terapia génica

puede estar destinada a bloquear la expresión del mismo,
cuando resulta “tóxica” por diversas razones. Este tipo de
efecto ha sido descrito en ciertas enfermedades retinales de
herencia dominante o ligado al sexo. Para estos casos así
como terapia alternativa para distintas formas de cáncer, se
ha probado el empleo de ARN de interferencia, con capacidad
para bloquear la expresión de un ARNm complementario a su
secuencia. La Figura 3 muestra la terapia génica empleando
ARN de interferencia (ver capítulo de genes y genomas). A
través de un vector viral, se transfectan las células blanco,
el ARN incorporado se transcribe y es reconocido por el
complejo proteico RISC, que participa en el reconocimiento
específico de su ARNm blanco. A fin de prolongar su efecto,
estos ARN son incorporados en vectores retrovirales, que
aseguran su inserción en el genoma de la célula, permitiendo
una expresión perdurable.
.

1.4 Selección del Sexo

Bajo este término, se agrupan dos procedimientos que per-
miten seleccionar el sexo de las crías previo a su nacimiento.
El primero de ellos consiste en el empleo de semen “sexado”.
Dado que el sexo será determinado por la gameta masculina,
Figura 3. Terapia de silenciamiento
Figura 3.(Beltran,
Terapia deWA, 2009). (Beltran, A, 2009).
silenciamiento
el empleo de semen enriquecido en espermatozoides que po-
seen un cromosoma X o un cromosoma Y permitirá, a través
de la inseminación artificial (I.A), determinar el1.4
sexo de los del Sexo
Selección mayor al semen que no ha sido seleccionado. La selección
embriones resultantes. Este sistema se empleaBajo por ejemplo
este término, se
se realiza
agrupanempleando un citómetro
dos procedimientos que de flujo, que
permiten separa los
seleccionar el sexo de
entre los ganaderos lecheros para garantizar el nacimiento espermatozoides de acuerdo a su contenido de ADN, el cual
las crías previo a su nacimiento. El primero de ellos consiste en el empleo de semen
de hembras, que serán empleadas en el tambo. Los centros difiere ligeramente por portarpor el cromosoma X respecto
“sexado”. Dado que el sexo será determinado la gameta masculina, el del
empleo de
de I.A comercializan dosis de semen “sexado”, a un costo Y, lo que le confiere una carga eléctrica diferente después de
semen enriquecido en espermatozoides que poseen un cromosoma X o un cromosoma Y
permitirá, a través de la inseminación artificial (I.A), determinar el sexo de los
91
embriones resultantes. Este sistema se emplea por ejemplo entre los ganaderos lecheros
para garantizar el nacimiento de hembras, que serán empleadas en el tambo. Los centros
de I.A comercializan dosis de semen “sexado”, a un costo mayor al semen que no ha
sido seleccionado. La selección se realiza empleando un citómetro de flujo, que separa
 los embriones colectados y el ADN obtenido de estas células se emplea para el
diagnóstico genético, que para sexar requiere la determinación de los genes de
Amelogenina y SRY. El gen que codifica la Amelogenina (AME) presente en el
cromosoma Y posee un tamaño menor al de la Amelogenina del cromosoma X, lo que
permite realizar la distinción del sexo, ya que en las hembras la reacción de PCR
produce un único fragmento de amplificación, en tanto que en machos se producen 2
fragmentos
Soria, Liliana A; Martínez, dey tamaño
Marcela diferente,
Huguet, Miguel J. uno a partir de cada tipo de cromosoma. El sexo
masculino se confirma analizando simultáneamente el marcador SRY (gen SRY), que
un tratamiento apropiado. La eficiencia de este procedimiento obtenidos en las especies domésticas han sido enriquecidos,
sólo esta presente en el cromosoma Y (Fig. 4). En forma posterior los embriones,
nunca es total, y el grado de enriquecimiento en un tipo u otro en gran
seleccionados por sumedida,
sexo, son portransferidos
los provenientes de especies
a una yegua receptora, más es-
completando el
de espermatozoides varía de acuerdo a la especie, siendoprocedimiento
en tudiadas, como humano y
de transferencia embrionaria. ratón.
bovinos donde alcanza su mayor aplicación.
En caballos de polo, son las yeguas las que se emplean en ese
deporte. En esta raza la transferencia embrionaria está per-
mitida y los embriones producidos pueden ser sexados previo
a su implantación en una yegua receptora. El procedimiento,
conocido como diagnóstico pre-implantacional, es el segundo
de los métodos empleados para la selección del sexo, y puede
aplicarse también para el diagnóstico de defectos genéticos o la
identificación de caracteres de interés como el color del pelaje.
A través de un micromanipulador, guiado por un microscopio,
el veterinario separa de 10-20 células de los embriones colec-
tados y el ADN obtenido de estas células se emplea para el
diagnóstico genético, que para sexar requiere la determinación
de los genes de Amelogenina y SRY. El gen que codifica la
Amelogenina (AME) presente en el cromosoma Y posee un
tamaño menor al de la Amelogenina del cromosoma X, lo que
permite realizar la distinción del sexo, ya que en las hembras la 4. Detección
Figura Figura
del 4. Detección
sexo del sexo
en equinos, en equinos,
empleando PCRempleando PCR ycapilar de los
y electroforesis
reacción de PCR produce un único fragmento de amplificación, fragmentos electroforesis
amplificados. capilar de los fragmentos amplificados.
en tanto que en machos se producen 2 fragmentos de tamaño
diferente, uno a partir de cada tipo de cromosoma. El sexo mas- Se ha logrado descifrar la secuencia del genoma de varias
2. Genómica Animal
culino se confirma analizando simultáneamente el marcador especies de interés zootécnico. Disponer de información
Durante las últimas tres décadas el desarrollo de nuevas técnicas moleculares ha
SRY (gen SRY), que sólo esta presente en el cromosoma Y acerca
permitido lograr de genes,
grandes avancesmapas genéticos ydelgenotipos
en el conocimiento genoma deconstituye
los animales. Los
(Fig. 4). Posteriormente los embriones, seleccionados porconocimientos
su una obtenidos
oportunidad para
en las identificar
especies directamente
domésticas han sidoaenriquecidos,
los animalesen gran
sexo, son transferidos a una yegua receptora, completando el
medida, porportadores de los
los provenientes genes deseables.
de especies más estudiadas, como humano y ratón.
procedimiento de transferencia embrionaria. Toda descifrar
Se ha logrado esta información disponible,
la secuencia en bases
del genoma de datos
de varias de acce-
especies de interés
zooté[Link]
públicode información
y gratuito, ha acerca
servidodeparagenes, mapas genéticos
identificar y genotipos
marcadores
constituye moleculares.
una oportunidadLos paraindividuos
identificar directamente
de una misma a los especie
animales tienen
portadores de
2. Genómica Animal los genes deseables.
una gran similitud entre sus secuencias de ADN, sin embargo
Toda esta información disponible, en bases de datos de acceso público y gratuito, ha
poseen diferencias, las cuales se denominan polimorfismos.
servido para identificar marcadores moleculares. Los individuos de una misma especie
Durante las últimas tres décadas el desarrollo de nuevas téc- Un marcador molecular es un polimorfismo o variante a nivel
tienen una gran similitud entre sus secuencias de ADN, sin embargo poseen diferencias,
nicas moleculares ha permitido lograr grandes avances en el deldenominan
las cuales se ADN quepolimorfismos.
se puede poner en evidencia
Un marcador a través
molecular de un
es un polimorfismo o
conocimiento del genoma de los animales. Los conocimientos método o técnica de laboratorio.
variante a nivel del ADN que se puede poner en evidencia a través de un método o
técnica de laboratorio.
92 La tecnología del ADN permite recopilar información que es útil para identificar a los
animales y para realizar selección (elección de los animales que serán padres de la

9
 Biotecnología y Genómica Animal

La tecnología del ADN permite recopilar información que es y por lo tanto no afectan la performance individual. Por lo
útil para identificar a los animales y para realizar selección tanto muchos marcadores moleculares no están asociados
(elección de los animales que serán padres de la próxima con un fenotipo particular.
generación), debido a que se utiliza directamente el genoti- Cuando el marcador es la verdadera causa funcional de la
po. Esto último constituye una enorme ventaja para algunas expresión diferencial del atributo, se convierte en el mejor
características o atributos tales como: caracteres de baja marcador.
heredabilidad (ej. fertilidad), caracteres que se expresan
tardíamente o que se expresan en un solo sexo (ej produc- 2.1.2 Tipos de marcadores moleculares
ción de leche), que son difíciles de medir (ej. resistencia a e acuerdo al tipo de polimorfismo
enfermedades o docilidad) o que se evalúan después del El ADN tiene diferentes clases de polimorfismos que pueden
sacrificio (ej. calidad de la res). ser marcadores moleculares (Fig. 5), estos son:
1. SNP (Single Nucleotide Polymorphisms) o sustitución de
2.1 Marcador Molecular un nucleótido por otro,
2. InDel o inserción y deleción.
3. NTR (Variable Tandem Number Repeat) o repetición en
2.1.1 Definición
tandem de número variable de nucleótidos.
Un marcador molecular es una variación específica en la Los SPNs e InDels fueron descriptos en el capítulo de Genes
secuencia de ADN, es decir que es un polimorfismo molecu- y Genomas. Los NTRs son múltiples copias en tandem de
lar entre individuos. La misma se puede localizar dentro de una secuencia de ADN y están flanqueadas por secuencias
un gen o fuera del mismo, y se pueden poner en evidencia conservadas. Estas repeticiones pueden abarcar pocas
mediante una técnica de laboratorio. o muchas pares de bases. Las repeticiones cortas (2 a 4
Cuando dicho polimorfismo se ubica dentro del gen que de- nucleótidos), por ejemplo: (CA/GT)n, reciben el nombre de
termina a un atributo o está muy próximo al mismo (porque microsatélites (MS), en tanto que las más largas (cientos de
está ligado) es posible asociar la presencia de una variante nucleótidos) se denominan minisatélites.
del marcador con un cambio a nivel fenotípico. Es decir que Las distintas copias de un NTR se diferencian en el número
un marcador molecular es un fragmento de ADN que sirve de repeticiones y cada una de ellas se la considera un alelo.
de referencia para seguir la transmisión de un segmento Actualmente la nomenclatura ha cambiado y se acepta el
cromosómico de una generación a otra y se hereda de forma término NTR para los minisatélites y STR (Short Tandem
mendeliana. Repeat) para los microsatélites.
El genoma de cualquiera de las especies mamíferas de Los MS (STRs) son altamente polimórficos y por esto muchos
interés zootécnico comprende aproximadamente 3 Mb em- individuos son heterocigotas. Su herencia es codominante.
paquetadas dentro de los cromosomas (ej. 30 pares en la Son los más utilizados y han sido empleados en numerosos
especie bovina). Debido a que sólo parte del genoma es experimentos que han permitido identificar regiones cromo-
codificante (tiene función), muchas de las variaciones (poli- sómicas asociadas con caracteres de interés económico de-
morfismos) entre individuos no tienen significación biológica nominados Loci asociados a Caracteres Cuantitativos o QTL

93
 Soria, Liliana A; Martínez, Marcela y Huguet, Miguel J.

(Quantitative Trait Loci), también se los utiliza para realizar gen en forma cuantitativa o cualitativa, dependiendo de su
análisis de identidad genética y filiación. localización, es decir si se localizan en regiones regulatorias
El polimorfismo
Caracteres Cuantitativosdeo los
QTL MS se pone enTrait
(Quantitative evidencia a travéssede
Loci), también o codificantes.
los utiliza para
la Reacción
realizar en Cadena
análisis de identidad de layPolimerasa
genética filiación. o PCR (ver anexo) El alelo favorable de un marcador directo es el mismo en todas
El polimorfismo de los MS
utilizando primers quese pone en evidencia a travésade
son complementarios la la Reacción en Cadena
secuencia de
las familias analizadas, porque existe una gran tendencia a que
la Polimerasa o PCR (ver anexo) utilizando primers que son complementarios
que los flanquean. unaa alternativa
la alélica del marcador se herede junto con una
secuencia que los flanquean.
La diferencia en el número de repeticiones se pone en evi- de las alternativas alélicas del gen, esto se debe a que ambos
La diferencia en el número de repeticiones se pone en evidencia por el diferente tamaño
dencia por el diferente tamaño de cada fragmento amplificado locus se encuentran próximos sobre un mismo cromosoma, y
de cada fragmento amplificado cuando éstos son separados por electroforesis.
cuando éstos son separados por electroforesis. por lo tanto la probabilidad de recombinación en paquinema
es casi nula.
Los marcadores directos son los más convenientes porque hay
coincidencia total entre el genotipo del marcador y el del gen
que controla el atributo de interés. Ejemplos de marcadores
directos son:
• Hipertermia maligna en porcinos: SNP en el gen crc.
• Doble músculo en bovinos: SNP e InDels en el gen MSTN
(miostatina).
• Poliquistosis Renal en gatos: SNP en gen PKD.
Figura 5. Tipos de polimorfismos que pueden ser marcadores
Figura 5. Tipos de polimorfismos que pueden ser marcadores moleculares.
moleculares.
En la Figura 6 se puede observar que siempre se hereda la
e acuerdo a su posición variante favorable del marcador con un alelo particular del gen
LosDemarcadores
acuerdo a su también
posición se pueden clasificar de acuerdo a de interés.
Los la
marcadores también se pueden clasificar de acuerdo
posición que tienen respecto a la variante (alelo) del gen a la posición que tienen
respecto a la variante (alelo) del gen de interés y responsable
de interés y responsable del cambio fenotípico, en: del cambio fenotípico, en:
1. Directos
1. Directos
2. Indirectos
2. Indirectos
El marcador directo es el polimorfismo que se localiza dentro de la secuencia de un gen,
muy El marcador
cerca directo es
de la mutación el polimorfismo
responsable del cambioquefenótípico
se localiza den- e inclusive
observado
tro veces
muchas de laessecuencia de un gen,
la misma mutación. Por muy
ejemplo,cerca de lacon
bovinos mutación
genotipo CC para una
responsable
mutación localizada del
en elcambio fenótípico
exón 9 del gen de laobservado e inclusive
microcalpaina, producen en promedio,
carnemuchas
más tiernaveces es la misma
que animales mutación.
con genotipo GG. Por ejemplo, bovinos
Los marcadores
con genotipo moleculares
CC paradirectos son del localizada
una mutación tipo SNP o enInDel, es decir
el exón 9 mutaciones
puntuales,
del gen quedealteran la expresión producen
la microcalpaina, del gen enenforma cuantitativa
promedio, carne o cualitativa,
dependiendo
más tiernade su
quelocalización,
animales con es decir si se GG.
genotipo localizan en regiones regulatorias o
codificantes.
Los marcadores moleculares directos son del tipo SNP o InDel,
El alelo favorable de un marcador directo es el mismo en todas las familias analizadas, Figura 6. Se indica con la letra A y B a los alelos del marcador y con un
es decir mutaciones puntuales, que alteran la expresión delFigura 6. Se indica círculocon la letra
o un A y B aa las
cuadrado los alelos del marcador
variantes y con
alélicas del unde
gen círculo o un cuadrado
interés.
porque existe una gran tendencia a que una alternativa alélica del marcador se herede
a las variantes alélicas del gen de interés.
junto con una de las alternativas alélicas del gen, esto se debe a que ambos locus se
94
encuentran próximos sobre un mismo cromosoma, y por lo tanto la probabilidad En un marcador de indirecto, contrariamente al caso anterior, el alelo favorable varía entre
recombinación en paquinema es casi nula. familias o poblaciones analizadas, debido a que varía el alelo del marcador que se
Los marcadores directos son los más convenientes porque hay coincidencia total junto
hereda entre con
el el alelo favorable del gen de interés. Esto se debe a que ambos locus
genotipo del marcador y el del gen que controla el atributo de interé[Link]án Ejemplos de
lo suficientemente alejados uno de otro, permitiendo que entre ellos ocurra
marcadores directos son:
 Biotecnología y Genómica Animal

En un marcador indirecto, contrariamente al caso anterior, el alelo favorable del marcador, cambia en cada familia. Esto
alelo favorable varía entre familias o poblaciones analizadas, significa que se debería analizar qué alelo es el favorable
Figura 6. Se indica a
debido con
quela letra
varíaAely alelo
B a losdel
alelos del marcador
marcador que se y con un círculo
hereda junto o un cuadrado
en cada población, antes de ser utilizado masivamente.
a las variantes
conalélicas delfavorable
el alelo gen de interés.
del gen de interés. Esto se debe a que Esta necesidad de tener que validarlo necesariamente cada
ambos locus están lo suficientemente alejados uno de otro, vez que se lo desee utilizar, lo convierte en un marcador no
En un marcador indirecto,
permitiendo quecontrariamente al caso
entre ellos ocurra anterior, el aleloy favorable
entrecruzamiento recom- varía entre y costoso.
seguro
familias o binación.
poblaciones analizadas, debido a que varía el alelo
Es decir, el ligamiento parcial existente determina del marcador que se
hereda junto con el alelo favorable del gen de interés. Esto
que la fase de ligamiento entre alelos del marcador y del gen se debe a que ambos locus
2.1.3 Algunas técnicas para analizar marcadores
están lo suficientemente alejados uno de otro, permitiendo
sea diferente entre familias. Obsérvese en la Figura 7 que el que entre ellos ocurra
moleculares
entrecruzamiento y recombinación.
toro producirá Es decir, el ligamiento
gametas recombinadas, parcial
en las que existente
cambia la determina
que la fasecombinación
de ligamiento entre alelos del marcador y del
de los alelos del gen y del marcador [Link] sea diferenteLos SNPs pueden ser analizados a través de diversas téc-
entre
familias. Obsérvese en la de
La frecuencia Figura 7 que el torodependerá
recombinación producirá gametas recombinadas, en laslas cuales cambian constantemente debido al avance
de la distancia
nicas,
que cambia la combinación de los alelos del gen y del marcador molecular. tecnológico
La que se produce permanentemente. La elección
que separa el gen del marcador. de una metodología en particular depende del equipamiento
frecuencia de recombinación dependerá de la distancia que separa el gen del marcador.
disponible y de los costos de los reactivos.
Se enumerarán las técnicas que se pueden aplicar para discri-
minar alelos de cada tipo de marcador molecular. El fundamen-
to y la descripción somera de cada técnica figura en el anexo.
Los métodos en general combinan la PCR (Polimerase Chain
Reaction) con algún método analítico que evidencia al poli-
morfismo propiamente dicho. Uno de los casos más simples
es la utilización de una enzima de restricción (RFLP: Res-
triction Fragment Length Polymorphism). También se puede
utilizar solo PCR con primers específicos para cada alelo del
polimorfismo a estudiar, los cuales se pueden distinguir por
tamaño en un gel de agarosa o por secuenciación automáti-
ca de fragmentos. Otra alternativa es la PCR de tiempo real
con sondas alelo-especificas, los microarrays para SNPs o
Figura 7. Se indica con la letra A y B a los alelos del marcador y con
un círculo o un cuadrado a las variantes alélicas del gen de interés. La
la secuenciación.
distancia que separa al gen del marcador determina el porcentaje de Los microsatélites se pueden amplificar por PCR con ce-
gametas recombinantes. badores o primers complementarios a secuencias que los
flanquean. Se realizan 2 ó 3 PCR múltiples en las cuales se
Cuando se va a utilizar al genotipo de un marcador para
Figura 7. Se indica con la letra A y B a los alelos del marcador y con un círculo o un cuadrado co-amplifican varios microsatélites a la vez. Los productos de
seleccionar individuos, se tiene que considerar qué tipo
a las variantes alélicas del gen de interés. La distancia que separa al gen del marcador determina las amplificaciones se separan mediante una electroforesis
el porcentajededemarcador se está utilizando. Los marcadores indirectos
gametas recombinantes. capilar en un secuenciador automático y los resultados se
tienen el inconveniente de la recombinación, por lo tanto, el analizan con un software apropiado.

95

12
 Soria, Liliana A; Martínez, Marcela y Huguet, Miguel J.

2.1.4 Usos de los marcadores moleculares por estrés (Hipertermia Maligna) y produce perdidas econó-
micas por causar el síndrome de carnes blandas, pálidas y
Una vez que se ha identificado a un marcador molecular y exudativas (carnes PSE). Se conocen las mutaciones pun-
dependiendo de la naturaleza del mismo, puede ser aplicado tuales que causan estas patologías y es posible determinar
para muchos fines en producción animal. Las principales si el animal es portador determinando su genotipo a través
aplicaciones son: de una técnica de laboratorio.
1. Detección de animales portadores de alelos de interés
2. Identificación genética (ej. test de filiación)
3. Selección asistida por marcadores 1.b) etección de animales portadores de alelos favora-
4. Selección genómica les desea les. Exceptuando algunos caracteres simples,
5. Análisis de diversidad genética
como color y largo del pelaje, los caracteres de interés
6. Detección de introgresión
económico (ej. terneza en la carne, fertilidad, eficiencia de
conversión de alimentos, etc.) en especies de importancia
Dichas aplicaciones de los marcadores no son analizadas productiva (bovinos, porcinos, ovinos, etc.) son poligénicos.
con detalle en este capítulo porque este libro está orientado Su estimación resulta dificultosa no sólo por la cantidad de
a alumnos que aún no tienen los conceptos básicos de gené- genes involucrados, sino porque se sospecha que cada uno
tica cuantitativa, para poder comprenderlas. Por esta razón de ellos sólo contribuye en una pequeña proporción al efecto
en este capítulo se detallan los usos indicados en primer y genético total. De lo anterior se desprenden dos consecuen-
segundo término. cias: la primera es que aquellos animales que presentan una
combinación óptima de alelos en los genes contribuyentes,
1. etección de animales portadores de alelos de inter s manifestarán el fenotipo más favorable; y la segunda es que
los caracteres productivos no serán fáciles de estimar a partir
1.a) etección de animales portadores de alelos indesea- de un test genético simple.
les que causan enfermedades (defectos genéticos rece- El mérito genético de estos caracteres se estima por métodos
sivos generalmente letales). Se considera animal portador a estadísticos aplicados a mediciones cuantitativas del carácter
un individuo que presenta un fenotipo normal pero es capaz (ej. volumen y contenido de la leche, área de ojo de bife, etc.).
de transmitir a su descendencia un carácter indeseable que Sin embargo, las mediciones fenotípicas tienen limitaciones,
los predispone a padecer una patología. Generalmente el algunas están restringidas a un sexo (las características
carácter se comporta siguiendo un modelo de herencia simple lecheras se estiman indirectamente para un toro), o son de
recesiva, de tal modo que sólo los homocigotas recesivos estimación tardía (fertilidad), o sólo pueden medirse en estado
presentan el fenotipo indeseable. Podemos citar el ejemplo post-mortem (terneza). Para este tipo de caracteres o para
del gen BLAD (Bovine Leukocyte Adhesión Deficiency) en realizar una selección temprana de los futuros reproductores,
bovinos que causa una enfermedad que se caracteriza por que no dependa de la medición de fenotipos, se ha intentado
severas y recurrentes infecciones bacterianas y el gen crc encontrar los genes involucrados para cada carácter. Luego
(Calcium Release Chanel) en cerdos que determina muertes de varios años, sólo se determinaron algunos de los alelos

96
 determinarse variantes alélicas de SNP asociados a cada fenotipo. Estos SNP asociados
a cada carácter productivo actuarán como marcadores predictivos del fenotipo para
otros animales (población incógnita) en los que no se ha medido el mismo, pero se ha
realizado un test genético empleando el panel de SNP para su especie (Fig. 8). Para
garantizar la validez de los estudios, las estimaciones deben realizarse en animales de la
Biotecnología y Genómica Animal
misma raza, sin extrapolar información entre países aún para razas idénticas. Se aplica a
favorables, con una contribución parcial al efectolatotal
estimación
(Tabla delpermitan
merito genético
estimar suenproducción
animaleslechera)
jóveneso(en nuestro ejemplo
en animales a los en toritos sin
3). Como alternativa, Meuwissen y colaboradores (Prediction que no se requiere faenar para realizar la estimación de
hijas que permitan estimar su producción lechera) o en animales a los que no se requiereun
of Total Genetic Value Using Genome-Wide Dense faenarMarker
para realizarcarácter.
la El análisis se llama
estimación de unSelección Genómica
carácter. porquese
El análisis se llama Selección
Maps. Meuwissen et al., Genetics 2001; 157: 1819-1829) utiliza para seleccionar animales en base a un merito genético
Genómica porque
propusieron una nueva estrategia conocida como Selección
se utiliza para seleccionar animales en base a un merito genético
estimado por genómica es decir por análisis de marcadores
Genómica. Se trata de un método indirecto, cuyo estimado por genómica
objetivo es decir
moleculares por análisis
distribuidos de marcadores moleculares distribuidos en
en el genoma.
el genoma.
no es identificar la identidad y la contribución de cada gen al
carácter en estudio, sino la identidad de marcadores molec-
ulares (SNP) asociados a estos genes. Para ello se utiliza
un gran número de SNP con polimorfismo y distribución
uniforme en el genoma de la especie en estudio. Por ejem-
plo, si el carácter en estudio es el volumen diario de leche
en bovinos, el componente genético podría ser mediado
por los genes A1, A2, … Ax (no conocidos), cada uno de los
cuales tendrá uno ó varios SNP asociados. Si el número de
SNP analizados en muy grande (50.000 a 700.000) y están
distribuidos entre todos los cromosomas, debería cumplirse
que, con independencia de la ubicación e identidad de los
genes, habrá SNP asociados.
La técnica se fundamenta en analizar un número grande de
SNP en una población de referencia, que es un grupo grande
de animales (mayor a 1000 ejemplares) que cuenten con
datos cuantitativos de caracteres productivos, en nuestro
ejemplo datos de producción lechera. Si el análisis tiene alta
certeza estadística, entonces, podrán determinarse varian-
tes alélicas de SNP asociados a cada fenotipo. Estos SNP
asociados a cada carácter productivo actuarán como marca-
dores predictivos del fenotipo para otros animales (población
incógnita) en los que no se ha medido el mismo, pero se ha
realizado un test genético empleando el panel de SNP para Figura 8. Fundamento de la Selección Genómica. Un grupo grande de
su especie (Fig. 8). Para garantizar la validez deFigura 8. Fundamento
los estudios, de que
animales la Selección
cuentan conGenómica. Un grupo
información fenotípica grande
confiable de animales que cuentan
(Población
de Referencia) para caracteres productivos de interés son analizados
las estimaciones deben realizarse en animalescon información
de la misma fenotípica confiable (Población de Referencia) para caracteres productivos de
con un panel de 50K o 700K. A través de un método estadístico se
interés son
raza, sin extrapolar información entre países aún para razas analizados con unSNP
relacionan panel de 50K
con cada o y700K.
fenotipo los SNPAasítravés de serán
asociados un método estadístico se
relacionan
idénticas. Se aplica a la estimación del merito genético en SNP con cada fenotipo
analizados en la y los SNP
población así
incógnitaasociados
para serán
predecir su analizados
fenotipo. en la población
animales jóvenes (en nuestro ejemplo en toritosincógnita para predecir su fenotipo.
sin hijas que

Los primeros estudios de Selección Genómica se realizaron 97 con paneles

comerciales de 3000 SNP (3K), pero fueron rápidamente reemplazados por paneles de
50.000 o 700.000 SNP (50 o 700K) que eran analizados empleando el ADN de la
población de referencia inicialmente y luego de los animales incógnita. Los paneles de
 Soria, Liliana A; Martínez, Marcela y Huguet, Miguel J.

Los primeros estudios de Selección Genómica se realizaron . dentificación gen tica

con paneles comerciales de 3000 SNP (3K), pero fueron rá-
pidamente reemplazados por paneles de 50.000 o 700.000 Todos los individuos presentan un genoma estable desde
SNP (50 o 700K) que eran analizados empleando el ADN de el momento de la fertilización, de este modo tendrán un
la población de referencia inicialmente y luego de los animales determinado genotipo para los marcadores moleculares
incógnita. Los paneles de mayor cantidad de SNP son más analizados. Este hecho permite determinar la “huella digital
costosos pero aseguran una mayor exactitud en la predicción del ADN” o fin erprints, la cual es única y relativamente fácil
del merito genético (valor de cría genómico) ya que un mayor de identificar a través de técnicas moleculares en cualquier
número de SNP asegura que cada gen este “rodeado” (Fig. momento y circunstancia.
9) por varios SNP, aumentando así la certeza estadística del Un conjunto o panel de marcadores puede ser utilizado para
estudio. Actualmente se aplica con fines de selección produc- identificación individual, test de filiación o para determinar la
en bovinostiva
de en
leche y carnedey leche
bovinos para fines de investigación
y carne y para fines en
deotras especies (porcinos,
investigación composición u el origen racial de un animal. También puede
ovinos y equinos).
en otras especies (porcinos, ovinos y equinos). ser útil para trazabilidad o abigeato.
En este uso de los marcadores, no interesa el efecto o la
asociación que tienen sobre un fenotipo particular. La apli-
cación de esta tecnología se fundamenta en que al existir
variabilidad entre individuos es muy baja la probabilidad de
que dos animales no relacionados genéticamente (emparen-
tados), compartan por azar el mismo alelo de un marcador.
Cuando se utilizan varios marcadores simultáneamente esta
probabilidad desciende aún más.

• Identificación individual y test de filiación: Los mar-

cadores moleculares se heredan en forma mendeliana. A
través de los mismos es posible realizar la identificación
inequívoca de cada individuo y el control de filiación, lo cual
es sumamente importante como herramienta para mantener
Figura 9. En Figura 9. Enseelrepresenta
el esquema esquema se unarepresenta
porción deluna porción
genoma dedel
un genoma de un gen que
bovino, con la fiabilidad de los registros genealógicos, fundamento de los
un bovino,
contribuye a algún conde
carácter un interés
gen queproductivo.
contribuye A):
a algún carácter
el gen de interés a derecha e
está flanqueado planes de selección y mejora. La filiación se aplica además
izquierda porproductivo. A): el gen está flanqueado a derecha e izquierda por dos
dos SNP, distanciados por 70.000 pb (70kb) uno de otro, cuando la muestra se
SNP, distanciados por 70.000 pb (70kb) uno de otro, cuando la muestra a la asignación de paternidad en los servicios colectivos de
analiza con un panel de 50.000 SNP (50K). B): el mismo gen es ahora analizado con un panel
se analiza con un panel de 50.000 SNP (50K). B): el mismo gen es
de 700.000 SNP (700K), y como se observa, al usarse más SNP, hay ahora varios marcadores bovinos, en los que un rodeo de vacas es servido por 4 ó 5
ahora analizado con un panel de 700.000 SNP (700K), y como se toros. El padre de cada cría es identificado a través de un
flanqueando y sobre el gen. Algunos actuarán como marcadores indirectos y otros como
observa, al usarse más SNP, hay ahora varios marcadores flanqueando
directos, aumentando la exactitud del análisis.
y sobre el gen. Algunos actuarán como marcadores indirectos y otros
test de filiación. La identificación genética, por otro lado,
como directos, aumentando la exactitud del análisis. tiene muchas aplicaciones; que incluyen la trazabilidad de
un animal desde su faenamiento hasta su comercialización,
2) Identificación genética
98
Todos los individuos presentan un genoma estable desde el momento de la fertilización,
de este modo tendrán un determinado genotipo para los marcadores moleculares
analizados. Este hecho permite determinar la “huella digital del ADN” o fingerprints, la
cual es única y relativamente fácil de identificar a través de técnicas moleculares en
cualquier momento y circunstancia.
 panel internacional de marcadores para esta especie (BM1824, BM2113, INRA023,
SPS115, TGLA122, TGLA126, TGLA227, ETH10, ETH225, TGLA53, ETH3 y
BM1818) y que permite el intercambio de registros entre laboratorios. A este panel
mínimo, se recomienda el agregado de otros STR para llegar a un total de 14 a 17. Los
marcadores agregados, que no necesariamente deben ser los mismos entre diferentes
Biotecnología y Genómica Animal
laboratorios, permiten aumentar la eficiencia del panel, para resolver parentescos de
la certificación de identidad de animales valiosos que son El test de filiación se fundamenta en que un individuo hereda
animales muy relacionados.
importados y la posibilidad de resolver casos de abigeato, la mitad de su genoma de cada uno de sus progenitores. Por
en los que por ejemplo un vacuno es faenadoEl en
testel de filiaciónlosetanto,
campo. fundamenta
lo que noen que uncon
comparte individuo hereda
su madre, la mitad de su genoma de
debe provenir
Para esta última aplicación, se compara elcada
perfil uno de sus progenitores.
genético de su padre (Fig. Por
10).lo tanto, lo que no comparte con su madre, debe
de los restos hallados en el campo, con el provenir
perfil de lade su padre (Fig. 10).
car-
ne decomisada en una carnicería o frigorífico, que faenan
clandestinamente.
Para realizar un control de filiación se analizan varios STR si-
multáneamente tanto en la cría como en los padres alegados
y la comparación de los perfiles genéticos, permite establecer
si hay coincidencia o no. De no haber coincidencia en 2 ó
más STR se excluye el parentesco con 100% de certeza.
Si la exclusión es por un único marcador no se considera
evidencia suficiente para rechazar el parentesco ya que
podría deberse a una mutación en el marcador en cuestión.
A diferencia del parentesco en humanos, la coincidencia no
se establece en términos de porcentaje de certeza, debido
a que los cálculos de probabilidad en animales se ven afec-
tados por la consaguinidad existente en los pedigrí de las
diferentes especies evaluadas.
La Sociedad Internacional de Genética Animal (ISAG, http://
[Link]/) es la que recomienda el panel mínimo de
microsatélites que se debe utilizar en cada especie (bovi-
nos, equinos, ovinos, caprinos, porcinos, caninos y felinos).
Por ejemplo, en el caso de bovinos se recomienda el uso Figura 10. A. En el esquema se representan los cromosomas
de un set de 12 microsatélites que conforman Figurael10.
panel
A. En elhomólogos
esquema de se
dos representan los cromosomas
individuos diferentes, homólogos de dos individuos
cada uno de los cromosomas
internacional de marcadores para esta especie (BM1824, contiene distintas copias de un mismo STR. B. El esquema representa
diferentes, cada uno las
debandas
los cromosomas
que se observarían contiene
en un gel distintas copiasun de
cuando se analiza un mismo STR. B. El
mismo
BM2113, INRA023, SPS115, TGLA122, TGLA126, TGLA227,
esquema representa las
STRbandas que se de
en los miembros observarían enununindividuo
una familia y en gel cuando se analiza un mismo STR en
no emparentado.
ETH10, ETH225, TGLA53, ETH3 y BM1818) y que permite
los miembros de una familia y en un individuo no emparentado.
el intercambio de registros entre laboratorios. A este panel
mínimo, se recomienda el agregado de otros STR para lle-
gar a un total de 14 a 17. Los marcadores agregados, que
no necesariamente deben ser los mismos entre diferentes
laboratorios, permiten aumentar la eficiencia del panel, para
resolver parentescos de animales muy relacionados. 17
99
 Soria, Liliana A; Martínez, Marcela y Huguet, Miguel J.

En la Figura 11 se muestra el resultado de la electroforesis En nuestro país es el laboratorio de la Sociedad Rural Argen-
capilar de la PCR de varios microsatélites en una familia tina ([Link] quien se encarga de
de bovinos. Se comparan los alelos de varios marcadores realizar los análisis de confirmación de parentesco, a través
(BM2113, TGLA53, En la Figuray11
BMS510 se muestra
BM1818) paraellaresultado
cría y los de la de
electroforesis
un panel decapilar de la PCR
microsatélites de varios permitiendo la
homologado,
padres [Link]élites en hay
Como se observa, unacoincidencia
familia de enbovinos.
cada Se comparan
inscripción los alelos de varios
de reproductores marcadores
en los registros genealógicos.
(BM2113, TGLA53, BMS510 y BM1818) para la cría y los padres alegados. Como se
uno de ellos, excepto en el marcador BMS510, donde el alelo Ofrece este análisis de ADN para bovinos, equinos, ovinos,
96 de la cría no observa,
esta presente en los padresenalegados.
hay coincidencia cada unoEn porcinos,
de ellos, exceptocamélidos y ciervos.
en el marcador BMS510, donde
la práctica, para el
excluir el parentesco se debe contar con al En bovinos, actualmente,
alelo 96 de la cría no esta presente en los padres alegados. En la práctica, el sistema de STR está siendo
para excluir
menos otro marcador no coincidente, descartando así que reemplazado por un panel de SNP. Dado que cada SNP es
el parentesco se debe contar con al menos otro marcador no coincidente, descartando así
la no coincidencia se deba a una mutación en el marcador bi-alélico, para alcanzar el mismo poder de exclusión que el
BMS510 de la crí[Link] la no coincidencia se deba a una mutaciónlogrado en el marcador BMS510 de
con microsatélites la cría.
(multi-alélico) deben emplearse

Cría

Padre
Alegado

Madre
Alegada

Figura 11. Análisis de parentesco en una familia de bovinos. (Laboratorio SRA) por electroforesis capilar.
Figura 11. Análisis de parentesco en una familia de bovinos. (Laboratorio SRA) por
100 electroforesis capilar.

En nuestro país es el laboratorio de la Sociedad Rural Argentina

 Biotecnología y Genómica Animal

100 SNP. Esta tecnología se está imponiendo dado que los A través de este tipo de análisis es posible realizar la trazabilidad
SNP de filiación forman parte de los paneles de selección de productos de origen animal a diferente nivel, por ejemplo:
genómico ya descriptos y son un subproducto en el análisis
de caracteres de producción. dentificaci n individua : orientado a brindar una herra-
mienta al consumidor que le permita rastrear, en cualquier
Trazabilidad: La calidad e inocuidad de los alimentos son momento, el origen del animal del que provienen los dife-
cada vez más controladas y exigidas por los consumidores. rentes cortes de carne.
El término trazabilidad, aplicado a los productos de origen
animal, se puede definir como la capacidad técnica de co- dentificaci n de especie se aplica cuando es necesario
nocer la historia de una animal, identificándolo desde su corroborar la especie de origen del producto para evitar la
nacimiento hasta el final de la cadena de comercialización y adulteración parcial o total con materia prima de inferior
consumo. La trazabilidad permite la identificación del producto calidad y menor costo. Un ejemplo es el caso de los patés
en los principales eslabones de la cadena, las cuales son: o embutidos cuyos precios dependen de la especie de
producción primaria, industria alimentaria y puntos de venta. procedencia. El valor de un pate depende si es elaborado
El propósito de realizar la trazabilidad de estos productos a partir de pollo, cerdo, pavo o pato. Lo mismo sucede con
surge de la necesidad de efectuar el control y la prevención los quesos, no se cotiza de la misma manera un queso
de enfermedades tóxico-alimentarias de origen animal. El elaborado con leche de vaca que de oveja.
ejemplo más destacable lo constituye la Encefalopatía Es-
pongiforme Bovina (BSE), cuya irrupción en el año 1996 en dentificaci n racia muchos productos procesados tienen
el Reino Unido tuvo consecuencias muy importantes para notables diferencias de precios de acuerdo a la procedencia
ese país como fueron la prohibición absoluta de exportación de la materia prima. Muchas veces es importante verificar
de ganado en pie y carnes, el establecimiento de normativas la coincidencia entre los datos que figuran en el etiquetado
para el etiquetado de la carne como norma para proteger a y el origen genético del producto. Por ejemplo es posible
los consumidores, el inicio de los ensayos de los sistemas distinguir al jamón Serrano y del jamón de cerdo ibérico,
de trazabilidad (actualmente en fase de implementación) y la estos últimos tienen un elevado valor económico, porque
obligatoriedad del uso de pasaportes de los animales donde ciertos alelos del gen del receptor de la melanocortina
se registran todos los movimientos de los mismos. (MC1R) están en el cerdo ibérico y no en otras razas de
Debido a que la identificación del animal vivo a través de la cuales se obtiene el jamón Serrano.
caravanas o microchips se pierde luego del sacrificio, la traza-
bilidad en base al ADN presenta la ventaja que permite com- Detecci n de a i entos e a orados con or anis os odi-
probar el origen y realizar la identificación de los productos ficados en tica ente o trans nicos Actualmente
que lleguen al consumidor porque permanece invariable aún es posible encontrar numerosas especies vegetales modi-
después del sacrificio, aunque el producto esté procesado. ficadas genéticamente que se utilizan para la alimentación
Además el ADN se encuentra en todas las células nucleadas humana, el ejemplo más conocido es la soja. En los países
y es más termoestable que las proteínas. desarrollados está regulada la comercialización de estos

101
 Soria, Liliana A; Martínez, Marcela y Huguet, Miguel J.

productos y se exige la identificación del producto en el En las tablas 2 y 3 se detallan algunos ejemplos de mar-
etiquetado, lo que permita distinguir a los productos ela- cadores moleculares utilizados en bovinos y cerdos, para
borados con materias primasTabla [Link]éticamente modificadas.
Ejemplos de marcadores identificación
utilizados en bovinos y cerdos (Jeongenética o detección de variantes de interés
y col, 2006).
Existen numerosas técnicas de laboratorio que se pueden en caracteres productivos o enfermedades.
aplicar para identificar lasAtributo
secuencias de ADN transgénicas.
o Test Genético Genes o Marcadores Referencias
Bovinos para carne
Tabla 2. Ejemplos de marcadores
Parentesco utilizados en bovinos Heyen
Microsatélites y cerdos (Jeon y col, 2006).et al (2000)
Tabla 2. Ejemplos de marcadores utilizados en bovinosety al (1997),
cerdos ( Schnabel
eon y col, 2006).
Identificación individual Microsatélites Caja (2004), Arana et al (2002)
Atributo o Test
Identificación Genético
racial Genes o Marcadores
Microsatélites Maudet et al (2002) Referencias
Citrulinemia ASS Bovinos para carneDennis et al (1989)
Manosidosis
Parentesco LAMAN, MANB
Microsatélites Berg
Heyenetetalal(1997),
(1997),Leipprandt (1999)
Schnabel et al (2000)
Terneza de la carne
Identificación individual CAST, CAPN1
Microsatélites Lonergan
Caja (2004), et al (1995),
Arana et alPage et al (2002)
(2002)
Color del manto
Identificación racial MGF
Microsatélites Seitz
Maudet et al
et (1999)
al (2002)
Doble músculo
Citrulinemia GDF8
ASS Grobet
Dennis et al (1997)
(1989)
Manosidosis LAMAN, MANB Porcinos Berg et al (1997), Leipprandt et al (1999)
Parentesco
Terneza de la carne Microsatélites
CAST, CAPN1 Nechtelberger
Lonergan et al et al (2001)
(1995), Page et al (2002)
Identificación
Color del manto individual Microsatélites
MGF Caja
Seitz (2004)
et al (1999)
Síndrome de Stress Porcino
Doble músculo RYR
GDF8 Fujii
Grobetet et
al al
(1991)
(1997)
Tamaño de camada ESR, PRLR Porcinos Rothschild et al (1996), Linville et al (2001)
Color blanco dominante
Parentesco KIT
Microsatélites Pielberg et al (2002)
Nechtelberger et al (2001)
Extensión del color
Identificación individual MC1R
Microsatélites Kijas et al (2001)
Caja (2004)
Grasa intramuscular
Síndrome de Stress Porcino FABP3
RYR Gerbens
Fujii et alet(1991)
al (2001)
Consumo
Tamaño dedecamada
alimento MC4R
ESR, PRLR Kim et al (2000)
Rothschild et al (1996), Linville et al (2001)
Color blanco dominante KIT Pielberg et al (2002)
Extensión del color MC1R Kijas et al (2001)
Grasa intramuscular FABP3 Gerbens et al (2001)
Consumo de alimento MC4R Kim et al (2000)
Tabla 3. Ejemplos de marcadores para calidad de carne utilizados en bovinos y cerdos (Basu y
Tabla [Link], 2009). de marcadores para calidad de carne utilizados en bovinos y cerdos (Basu y col, 2009).
Ejemplos

Gene (símbolo) Especie Mutación Atributo Referencia

Tabla
Acetil [Link]
Ejemplos de marcadores para calidad
c.5634T>C de 46
en exon carne utilizados en bovinos
Desaturación de y cerdos (Basu y
col, 2009). Cerdos Muñoz et al (2007)
(ACACA) c.6681 G<T en exon 54 ácidos grasos
Cerdos Muchos SNPs Terneza Ciobanu et al (2004)
Gene (símbolo) Especie identificados
Mutación Atributo Referencia
Calpastatina (CAST)
Acetil CoA carboxilasa Muchos
c.5634T>CSNPs
en exon 46 Desaturación de
Cerdos
Bovinos Terneza Muñoz et et
Barendse al al
(2007)
(2007)
(ACACA) identificados
c.6681 G<T en exon 54 ácidos grasos
Ácido graso sintasa Cerdos Muchos SNPs Composición
Terneza de Ciobanuetetalal(2007)
(2004)
Bovinos g.1792 A>G (Thr>Ala) Morris
(FASN) identificados ácidos grasos
Calpastatina (CAST)
Ovinos g.6723
MuchosG>ASNPsen 3’ UTR
Miostatina (MSTN) o Bovinos identificados Muscularidad
Terneza Clop et al et
Barendse (2006)
al (2007)
Factor 8 de crecimiento y Kijas et al (2007)
Ácido graso sintasa 821del11 Composición de
diferenciación (GDF8) Bovinos g.1792 A>G (Thr>Ala) Doble músculo McPherron
Morris et al & Lee (1997)
(2007)
(FASN) G938A (Cys313Try) ácidos grasos
Estearoil coenzima g.6723 G>A en 3’ UTR
Ovinos c.T878C Composición de
Miostatina (MSTN) o Bovinos (Val293Ala) Muscularidad Taniguchi et al (2004)
Clop et al (2006)
A desaturasa (SCD) ácidos grasos
Factor 8 de crecimiento y Kijas et al (2007)
Tiroglobulina (TG) Bovinos C1696T
821del11 Marmoleado Barendse (1999)
diferenciación (GDF8) Bovinos G938A (Cys313Try) Doble músculo McPherron & Lee (1997)
102 Estearoil coenzima
Bovinos c.T878C (Val293Ala)
Composición de
Taniguchi et al (2004)
A desaturasa (SCD) ácidos grasos
Tiroglobulina (TG) Bovinos C1696T Marmoleado Barendse (1999)
 Anexo:
Biotecnología
Técnicasy Genómica
de BiologíaAnimal
Molecular

ANEXO

Técnicas de Biología Molecular

Soria, Liliana y Silvestro, Carolina

Introducción

Durante las últimas tres décadas se ha avanzado mucho tanto en investigación como en diagnóstico. No es el propó-
en el desarrollo de metodologías que permiten el estudio sito de este capítulo abarcar todas las técnicas disponibles
de los genes a nivel molecular. Las mismas constituyen para el estudio de la estructura y función de los genes. Las
una serie de técnicas y procedimientos de laboratorio que técnicas que se mencionan serán descriptas someramente,
permiten analizar la estructura y función de los genes. En se indicarán sus posibles aplicaciones y apuntan directa-
muchos casos son técnicas simples y de rápido resultado, mente al análisis de los ácidos nucleicos.
otras requieren el uso de instrumentos y aparatos costosos
y de manejo complejo.
Muchas preguntas pueden surgirle al investigador, por 1. Extracción de ADN
ejemplo: ¿Un gen particular se expresa en linfocitos, mé-
dula ósea, hígado o pulmón? ¿Ese gen se expresa en un Para poder trabajar con ADN, primero es necesario extraerlo
momento determinado del desarrollo embrionario o durante y aislarlo del resto de los componentes celulares. Existen
la vida adulta? ¿Un alelo de ese gen es el que se expresa varias técnicas para lograrlo a partir de diferentes tejidos, e
de un modo alterado durante el desarrollo? ¿Es ese patrón incluso algunos kits comerciales para realizarlo de manera
alterado de expresión el responsable de la enfermedad o muy rápida y sencilla.
síndrome? Estas y otras preguntas similares podrían ser res- En general todas las estrategias de extracción requieren ini-
pondidas mediante el empleo de metodologías apropiadas cialmente la lisis celular con detergentes y proteasas; luego
para el estudio de los genes, teniendo en cuenta que éstos una precipitación y eliminación de proteínas. Por último, la
pueden ser estudiados a nivel del ADN genómico, a nivel de precipitación del ADN y posterior resuspensión en solución
su expresión en ARNm o de su producto final, las proteínas. buffer y su control a nivel de cantidad y calidad a través de
A continuación se describen algunas técnicas que se utilizan, la electroforesis en gel o por espectrofotometría.

103
 Soria,
Soria, Liliana Liliana y Silvestro,
A; Martínez, Marcela yCarolina
Huguet, Miguel J.

2. Corte con endonucleasas o enzimas de Además, cada enzima puede reconocer secuencias de
diferente número de nucleótidos (4, 6, etc). Las que tienen
restricción sitios de restricción más cortos digerirán el ADN en mayor
Para facilitar el manejo y estudio de moléculas grandes como número de fragmentos por tener mayor probabilidad de ha-
el ADN es necesario reducirlas a fragmentos de tamaño ma- llar la secuencia de nucleótidos que reconoce como sitio de
nipulable, un método sencillo para ello es el corte o digestión restricción.
con enzimas de restricción. El nombre de cada enzima comienza con tres letras, las
Las endonucleasas son enzimas que en condiciones norma- cuales indican la bacteria que la produce (Tabla 1).
les, protegen a la bacteria del ADN foráneo (fagos) destru- Tabla 1. Algunas enzimas de restricción con sus secuencias de
yéndolo. Las mismas producen cortes en los enlaces fosfo- restricción y el tipo de extremos que generan (Fitzgerald-Hayes &
diéster de la molécula de ADN en secuencias nucleotídicas
determinadas y diferentes para cada enzima específica. Estas
secuencias específicas se denominan sitios de restricción y
se caracterizan por ser secuencias palindrómicas, es decir,
idénticas en ambas cadenas y en sentido opuesto.
Las enzimas de restricción pueden cortar ambas cadenas de
Las enzimas de restricción
nucleótidos pueden cortar
en un mismo sitioambas cadenas
generando de nucleótidos
“extremos romos” en un mismo
sitio generando o pueden cortarla
“extremos romos”en diferentes
o puedensitios creando
cortarla en“extremos
diferentes sitios creando
cohesivos” (Fig. 1).
“extremos cohesivos” (Fig. 1).

Figura 1. Tipos de extremos que pueden generar las enzimas de

restricción.
Figura 1. Tipos de extremos que pueden generar las enzimas de restricción.
104
Estas enzimas, descubiertas durante los últimos años de la década de 1960 por Werner
Además, cada enzima puede reconocer secuencias de diferente Arber número de nucleótidos
y Hamilton Smith, constituyeron el primer avance hacia la tecnología del ADN
recombinante.
(4, 6, etc). Las que tienen sitios de restricción más cortos digerirán el ADN en mayor
Son útiles para incorporar, in vitro, un gen o segmento de ADN de interés dentro de un
número de fragmentos por tener mayor probabilidad de hallar la secuencia de
 Anexo:
Biotecnología
Técnicasy Genómica
de BiologíaAnimal
Molecular

Estas enzimas, descubiertas durante los últimos años de La electroforesis puede ser en geles de agarosa o de polia-
la década de 1960 por erner Arber y Hamilton Smith, crilamida, siendo los de poliacrilamida de mayor capacidad
constituyeron el primer avance hacia la tecnología del ADN resolutiva, o sea que pueden separar fragmentos de ADN
recombinante. con escasa diferencia de tamaño (de hasta un único nu-
ADN con escasa diferencia de tamaño (de hasta un único nucleótido), permitiendo así
Son útiles para incorporar, in vitro, un gen o segmento de cleótido), permitiendo así detectar pequeñas deleciones.
detectar pequeñas deleciones. Los geles de agarosa proveen una matriz más abierta, lo
ADN de interés dentro de un pequeño cromosoma (plás- Los geles de agarosa proveen una matriz más abierta, lo
que le da menor resolución, pero es más apropiada para separar moléculas de mayor
mido, fago, etc.) denominado vector. También permiten que le da menor resolución, pero es más apropiada para
tamaño (Tabla 2).
caracterizar secuencias de ADN, ya que al cortarlo sólo si separar moléculas de mayor tamaño (Tabla 2).
éste contiene la secuencia de restricción exacta, permite
Tabla 2. Rango de separación de fragmentos de ADN en geles de agarosa y de
detectar mutaciones puntuales, principalmente delpoliacrilamida.
tipo Tabla 2. Rango de separación de fragmentos de ADN en geles de
de las sustituciones. Pueden ser útiles para discriminar agarosa y de poliacrilamida.
alelos de un SNP, para ello se combina la PCR y la di- Tipo de Gel Porcentaje (%) Rango de Separación (en pb)
gestión con endonucleasas, a través de una técnica que 0.6 1.000-20.000
se denomina PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction- 0.8 800-10.000
Restriction Fragment Length Polymorphism), luego los 1 400-8.000
Agarosa
fragmentos digeridos son separados en geles de agarosa 1.2 300-7.000
1.5 200-4.000
o de poliacrilamida. 2 100-3.000
3.5 100-1.000
5 80-500
Acrilamida
3. Separación de fragmentos de ADN por 8 60-400
12 40-200
electroforesis en geles Ref.: pb = pares de bases.

Las moléculas de ADN pueden ser escindidas en forma

La técnica consiste en sembrar la solución con la mezcla de fragmentos de ADN en los
mecánica (por ejemplo, por pasaje a través de la jeringa de La técnica consiste en sembrar la solución con la mezcla de
pocillos ubicados en un extremo del gel. Se puede sembrar también un marcador de
una aguja) o en forma enzimática (por endonucleasas fragmentos
de molecular
peso de ADN en
como referencia los estimar
para pocilloselubicados
tamaño en del un extremo
ADN de interés, este
marcador consiste en fragmentos de ADN de tamaños conocidos y sepeso
restricción) como ya hemos visto. Los fragmentos genera- del gel. Se puede sembrar también un marcador de puede adquirir
dos, como así también los productos de una amplificación molecular
comercialmente. El gelcomo referencia
de agarosa para estimar
se sumerge dentroeldetamaño del de
una cuba ADNelectroforesis
por PCR, pueden ser separados por electroforesis en geles. de una
horizontal con interés, estebuffer
solución marcador consiste
conductora en fragmentos
de corriente elé[Link]
El ADN
voltaje al que se
La electroforesis consiste en someter partículas cargadas de tamaños
a la corrida
realiza conocidos
puede ser y se las
variado según puede adquirirasí
necesidades, comercialmen-
como también el tiempo.
un campo eléctrico para lograr su migración hacia un polo. te. El gel de agarosa se sumerge dentro
Aproximadamente, en 30 a 60 minutos a 60-100V se logra una de unacorrecta
cuba deseparación de
En el caso del ADN y ARN, macromoléculas con cargafragmentos
ne- electroforesis
de ADN (Fig 2). horizontal con una solución buffer conductora
gativa, se las puede separar de acuerdo a su peso molecular de corriente eléctrica. El voltaje al que se realiza la corrida
(dado por el tamaño del fragmento) al pasar por entre los puede ser variado según las necesidades, así como tam-
poros de un gel. bién el tiempo. Aproximadamente, en 30 a 60 minutos a

105
 La técnica de SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) consiste en
pocillos ubicados en un extremo del gel. Se puede sembrar también un marcador de
desnaturalizar fragmentos de ADN a simple cadena y permitir la formación de
peso molecular como referencia para estimar el tamaño del ADN de interés, este
confórmeros de forma similar al ARN para luego observar su migración diferencial en
marcador consiste en fragmentos de ADN de tamaños conocidos y se puede adquirir
comercialmente. El gel de agarosa se sumerge dentro de una la electroforesis.
cuba de electroforesisMétodo que permite hacer un análisis rápido de muestras, sabiendo que
las diferencias
horizontal con una solución buffer conductora de corriente eléctrica. El voltaje al enquela sesecuencia de nucleótidos (bastando tan solo una), cambian la
realiza la corrida puede ser variado según las necesidades, así como también el tiempo. también
Soria, conformación,
Soria,
Liliana A; Liliana
Martínez,y y por
Silvestro,
Marcela ende
Carolina
y Huguet, su patrón de migración.
Miguel J.
Aproximadamente, Para observar los fragmentos de ADN en el gel, se usan diferentes métodos de tinción,
60-100 ense30logra
a 60 una
minutos a 60-100V
correcta se logradeuna
separación correcta separación
fragmentos centes de que se intercalan entre las bases de las dos cadenas
fragmentos dede ADN
ADN (Fig
(Fig 2).
2).
como ser colorantes fluorescentes que se intercalan entre las bases de las dos cadenas
del ADN (Bromuro de etidio, GelRed, SYBR Green I) y luego
del ADN (Bromuro de etidio,
observan bajoGelRed,
luz UV,SYBR Green
o usando I) y luego
tinciones con observan bajo luz UV, o
sales de plata
usando tinciones con sales de plata en el caso de los geles de
en el caso de los geles de poliacrilamida (Fig. 3). poliacrilamida (Fig. 3).

Figura 2. A. Equipamiento utilizado para electroforesis horizontal.

B. Esquema de una gel (Mkr = Marcador de peso molecular).
A B
Figura 2. A. Equipamiento utilizado para electroforesis horizontal. B Esquema de una
gel (Mkr = Marcador de peso molecular). Figura 3. A. Fotografía de un gel de agarosa teñido con Bromuro de
Figura 3. A. Fotografía
La electroforesis en geles permite no solo separar moléculas
de un gel de agarosa teñido con Bromuro de etidio donde se
etidio donde se observa un fragmento de aproximadamente 975 pb en
observa un fragmento
de ADN por su tamaño, sino también por su conformación; de aproximadamente
las calles 1, 2 y 3 y un marcador975
de pb
pesoenmolecular
las calles 1,calle
en la 2 y 53(aylaun marcador
ya queenuna molécula de peso molecular en la
derechacalle 5 (a
se indican la
losderecha
tamaños se indican
de dos los
fragmentos tamaños de dos
del marcador, en fragmentos
La electroforesis geles permitecircular
no solomigra más
separar lentamente
moléculas del
que una
de ADN por suentamaño,
marcador, pares de
pares de bases).
bases). [Link]ía de unde
Fotografía gelunde gel
poliacrilamida
de teñido con teñido con
poliacrilamida
sino tambiénlinear deconformación;
por su igual masa, y ya
el ADN superenrollado
que una (supercoiled),
molécula circular migra
plata másselentamente
donde
plata donde se observan el patrón de migración de un SSCP.
observan el patrón de migración de un SSCP.
migra aún más rápido. El ARN, que al estar en simple cadena
forma conformaciones secundarias y hasta terciarias también
influencian su movilidad electroforética 4. Amplificación de ADN por la técnica de
La técnica de SSCP (Single Strand Conformation 4. Amplificación
Polymor- de ADN24 por la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa
Reacción en Cadena de la Polimerasa
phism) consiste en desnaturalizar fragmentos de La ADNtécnica
a sim- de PCR (Polimerase Chain Reaction) fue descripta por Kary Mullis a
ple cadena y permitir la formación de confórmeros mediados
de formade la década
La técnicade los 80 y,(Polimerase
de PCR revolucionóChainel campo de lafue
Reaction) biología
descriptamolecular al
similar al ARN para luego observar su migraciónposibilitar
diferencialnuevaspor formas
Karyde estudiar
Mullis y analizar
a mediados dealalos [Link] los 80 y, revolu-
década
en la electroforesis. Método que permite hacer Es un una
análisis
técnica sencilla
cionó elque campose basa
de laen el proceso
biología de replicación
molecular al posibilitar delnuevas
ADN y permite
rápido de muestras, sabiendo que las diferencias en la se-la secuencia
amplificar formasparcial
de estudiar
de unay molécula
analizar ade losADN,
[Link]éndose gran cantidad de
cuencia de nucleótidos (bastando tan solo una), copias
cambian de la
la [Link] una técnica sencilla que se basa en el proceso de repli-
conformación, y por ende también su patrón de migración.
Este método puede cación del ADNcuando
ser utilizado y permite amplificardelaADN
la secuencia secuencia parcial
de interés de
es conocida y la
Para observar los fragmentos de ADN en el gel, se usan una molécula de ADN, obteniéndose gran cantidad
misma tiene una longitud relativamente corta, (pocas pb hasta 40 kb aproximadamente, de copias
diferentes métodos de tinción, como ser colorantes fluores- del de
dependiendo la misma. y la polimerasa utilizada). Se puede utilizar cualquier
equipamiento
106 fuente de ADN para una PCR, siendo el único requerimiento que la secuencia a la que
se tienen unir (hibridizar) los cebadores no se modifique. Se ha logrado amplificar por
PCR ADN de 7000 años de antigüedad.
La PCR se basa en la síntesis de ADN de doble cadena por parte de la ADN polimerasa
 Anexo:
Biotecnología
Técnicasy Genómica
de BiologíaAnimal
Molecular

Este método puede ser utilizado cuando la secuencia de Consta de tres etapas o pasos (Fig. 4) los cuales constituyen
ADN de interés es de conocida
longitud) que limitarán la longitud un
y la misma tiene una longitud ciclo:
del fragmento a amplificar y por
relativamente corta, complementariedad
(pocas pb hasta 40 kb aproximadamente,
de bases. 1 Etapa El ADN genómico total se desnaturaliza por tempe-
dependiendo del equipamiento
Consta de tresy laetapas
polimerasa
o pasos utilizada). Se cuales constituyen
(Fig. 4) los ratura (95-98
un C) transformándose en ADN de cadena simple.
ciclo:
puede utilizar cualquier fuente de ADN para una PCR, siendo 2 Etapa
 1 Etapa: El ADN genómico total se desnaturaliza por temperatura El ADN desnaturalizado
(95-98 C)se alinea con los
el único requerimiento que la secuencia a la que
transformándose en ADN de cadena [Link] tienen oligonucleótidos sintéticos (primers). Dicho alineado o
unir (hibridizar) los cebadores
 2 no se modifique.
Etapa: El ADN Se ha logrado se alinea
desnaturalizado “annealing” de los primers sesintéticos
con los oligonucleótidos produce cuando desciende
amplificar por PCR ADN (primers). Dicho alineado o “annealing” de los primers se produce cuando desciende lael apareamiento de
de 7000 años de antig edad. la temperatura (46-60 C) permitiendo
La PCR se basa en temperatura
la síntesis de ADN de
(46-60 C) doble cadenaelpor
permitiendo bases
apareamiento complementarias.
de bases complementarias.
parte de la ADN polimerasa a partir de cebadores u oligonu- 3 Etapa
 3 Etapa: La ADN polimerasa sintetiza, por complementariedad La ADN polimerasa
de bases sintetiza,
a 72 C por complemen-
cleótidos sintéticos (de aproximadamente 20 nucleótidos de tariedad de bases
una nueva cadena de ADN a partir del extremo 3´OH libre de cada primer utilizando a 72 C una nueva
los cadena de ADN a
longitud) que limitarán la longitud del fragmento a amplificar
deoxinucleótidos (dNTPs) agregados en el tubo de reacción. partir del extremo 3´OH libre de cada primer utilizando los
y por complementariedad de bases. deoxinucleótidos (dNTPs) agregados en el tubo de reacción.

Figura 4. Reacción Figura

de PCR ([Link]
4. Reacción de PCR ([Link]

107
Estos ciclos se repiten varias veces (20-35) y con cada uno el número de moléculas de
ADN se duplica, de modo que la amplificación del ADN por PCR permite aumentar
exponencialmente el número de copias del mismo. Por ejemplo: si partiéramos de 1
 Soria,
Soria, Liliana Liliana y Silvestro,
A; Martínez, Marcela yCarolina
Huguet, Miguel J.

Estos ciclos se repiten varias veces (20-35) y con cada uno La técnica de PCR es útil en numerosas áreas de la biología
el número de moléculas de ADN se duplica, de modo que molecular, medicina y biotecnología. A partir de la misma se
la amplificación del ADN por PCR permite aumentar expo- puede obtener suficiente cantidad de ADN para secuenciar,
nencialmente el número de copias del mismo. Por ejemplo: clonar o cortar con enzimas y analizar. Se la utiliza en prue-
si partiéramos de 1 molécula, después de un ciclo tendría- bas diagnósticas de enfermedades infecciosas humanas,
mos 2, 4 después de 2 ciclos, 8 después de 3 ciclos, 1024 animales y vegetales, o para diagnosticar enfermedades
después de 10 ciclos y aproximadamente 1 x 109 después genéticas (diagnóstico prenatal). Las pruebas son senci-
de 30 ciclos. Al cabo de 25-35 ciclos se obtiene una masa llas, rápidas y muy sensibles (con escasa cantidad de ADN
del fragmento buscado de ADN fácilmente observable por a partir de algunas células de cualquier tipo de tejido). En
medio de una electroforesis, y en cantidad suficiente para animales y vegetales permite genotipificar individuos para
poder secuenciar. realizar selección en contra de algún genotipo indeseable.
Originalmente la técnica se realizaba utilizando un fragmento Se puede utilizar también para determinar la identidad de un
de la enzima ADN polimerasa I de E. coli (fragmento Klenow) individuo (fin erprint o huellas digitales del ADN), lo cual es
para polimerizar la nueva hebra. Como esa enzima es ter- útil por ejemplo, para hacer diagnósticos de filiación, realizar
molábil, se inactivaba en cada etapa de desnaturalización trazabilidad de productos de origen animal o vegetal, resol-
(1 etapa) y había que agregarla permanentemente antes ver investigaciones criminales, o resolver investigaciones
de la polimerización (3 etapa), lo cual constituía una limi- de abigeato en animales (cuatrerismo).
tante de la técnica. Un gran avance se logró, al automatizar
la técnica, con una ADN polimerasa termorresistente. Esta
polimerasa se denomina Taq polimerasa y se aisló de la 5. PCR reversa o RT- PCR
bacteria Thermus aquaticus, la cual resiste temperaturas
de 95 C. Esta técnica es muy similar a la tradicional PCR pero
Actualmente la técnica de PCR está automatizada, de modo usando como molde ARN en lugar de ADN. Para lograr la
que en un microtubo de reacción (capacidad de 200 l) o en copia de este se utiliza una transcriptasa reversa en lugar
microplacas, se agrega el ADN genómico que contiene el de la polimerasa de ADN. Esta crea una cadena simple y
segmento que se desea amplificar, los dNTPs (dATP, dCTP, complementaria de ADN copia (ADNc), la cual luego se
dGTP, dTTP), los oligonucleótidos o primers, buffer, Cl2Mg transforma en doble cadena y a partir del cual se puede
y Taq polimerasa en un volumen total de reacción de entre realizar una PCR convencional (Fig. 5).
10 a 50 l. Dicho tubo se coloca dentro de una máquina A partir del ADNc obtenido se puede cuantificar la canti-
(termociclador) en la cual se programa la temperatura y el dad de algún ARN en particular y en determinado tejido,
tiempo de cada etapa del ciclo de PCR, como así también secuenciar, usar para crear sondas, clonar, y hasta armar
el número total de ciclos de la reacción. Transcurridos dos bibliotecas de ADNc.
o tres horas se tendrá un alto número de copias de la se- Conociendo los ADNc obtenidos, podemos averiguar qué
cuencia de ADN de interés, las cuales se obtuvieron a partir genes se expresan en cada tipo celular y en diferentes
de una pequeña cantidad de ADN total condiciones.

108
 Anexo:
Biotecnología
Técnicasy Genómica
de BiologíaAnimal
Molecular

Gracias a un detector (laser) en el termociclador que recibe

la emisión de fluorescencia producida en la reacción (propor-
cional a la cantidad de ADN sintetizado), se puede conocer
y registrar en todo momento la cinética de la amplificación.
Los sistemas de detección por fluorescencia empleados en
la PCR a tiempo real pueden ser de dos tipos:

A entes interca antes: Son fluorocromos que aumentan

notablemente su emisión de fluorescencia al unirse a ADN de
doble cadena. El más empleado es el SYBR Green I. Tiene
como ventaja que la optimización de las condiciones de la
reacción es fácil y además, es más barato que las sondas
específicas. El principal inconveniente de estos es su baja
especificidad, debido a que se unen de manera indistinta
a productos generados inespecíficamente o a dímeros de
cebadores.

ondas espec ficas arcadas con uorocro os: Conocidas

como sondas de hidr isis a an Son oligonucleótidos
marcados con un fluorocromo donador de fluorescencia
(reporter) en el extremo 5’, y un inhibidor de la fluorescencia
(quencher) en el extremo 3’ que absorbe la fluorescencia
liberada por el fluorocromo. Mientras la sonda está intacta,
. Figura 5. Síntesis de ADNc (Fitzgerald-Hayes Reichsman, 2010). la fluorescencia es absorbida por el quencher. Durante la
Figura 5. Síntesis de ADNc (Fitzgerald-Hayes & Reichsman, 2010). amplificación, la Taq polimerasa con actividad 5’ exonucleasa,
hidroliza el extremo libre 5’ de la sonda, produciéndose la li-
beración del fluorocromo (Fig. 6). Así, la fluorescencia emitida
6. PCR en tiempo Real o PCR cuantitativa
puede ser captada por el lector del termociclador real time.
A partir del ADNc obtenido se puede cuantificar la cantidad de algún ARN en particular
y en determinado tejido, secuenciar, usar para crear sondas, clonar, y hasta Los
La PCR en tiempo real (Real time PCR) o PCR cuantitativa termocicladores pueden poseer varios canales de lectu-
armar
(q-PCR) se basa en la monitorización de la PCR a través de ra, permitiendo detectar la emisión de distintos fluorocromos
bibliotecas de ADNc.
técnicas de fluorescencia, permitiendo la cuantificación de a la vez. Así, se pueden usar varias sondas marcadas con
Conociendo los ADNc obtenidos, podemos averiguar qué genes se expresan en cada
ácidos nucleicos con gran exactitud y fiabilidad. distintos fluorocromos, para identificar diferentes segmentos
tipo celular y en diferentes condiciones.
Los procesos de amplificación y detección se producen si- de ADN en la misma reacción (PCR múltiple) o incorporar
multáneamente en el mismo sistema cerrado, sin necesidad controles internos a la reacción, para detectar la presencia
de ninguna acción posterior como la corrida electroforética. de inhibidores.
6. PCR en tiempo Real o PCR cuantitativa
La PCR en tiempo real (Real time PCR) o PCR cuantitativa (q-PCR) se basa en la 109
monitorización de la PCR a través de técnicas de fluorescencia, permitiendo la
cuantificación de ácidos nucleicos con gran exactitud y fiabilidad.
Los procesos de amplificación y detección se producen simultáneamente en el mismo
sistema cerrado, sin necesidad de ninguna acción posterior como la corrida
 Soria,
Soria, Liliana Liliana y Silvestro,
A; Martínez, Marcela yCarolina
Huguet, Miguel J.

para identificar mutaciones. Mediante el uso de sondas alelo-

específicas permite determinar genotipos en forma precisa.
Uno de los campos de mayor aplicación de esta técnica es
en la investigación de cambios en la expresión genética a
través de la cuantificación de ARNm, permitiendo asociar
dichos cambios a estados fisiológicos, presencia de fármacos,
agentes infecciosos, etc.

7. Secuenciación del ADN

El último paso en la caracterización de un gen es la deter-
minación de su secuencia. Existen distintos métodos para
obtener una secuencia de ADN.

7.1 Método enzimático

El método de secuenciación más difundido es el método
enzimático diseñado por Fred Sanger en 1975. Se basa en
la síntesis de ADN por PCR, pero utilizando dideoxinucleó-
tidos trifosfatos (ddNTPs), que carecen del grupo OH en la
posición 3’, necesario para que se produzca el enlace fosfo-
diéster con el nucleótido entrante. Así, los ddNTPs pueden
ser incorporados al extremo 3’OH de una cadena de ADN en
Figura 6. Reacción de PCR en tiempo real con sondas alelo específicas síntesis, pero una vez incorporados, provocan la finalización
Figura 6. Reacción de PCR([Link]
en tiempo real con sondas alelo específicas de la misma. La reacción se realiza en cuatro tubos diferentes
([Link] para el mismo fragmento de ADN, a cada uno se agrega una
Esta técnica es capaz de cuantificar de manera absoluta o pequeña cantidad de uno de los ddNTPs (ddATP, ddCTP, dd-
relativa moléculas molde de ADN o ARN. La PCR en tiempo GTP y ddTTP), además de los cuatro dNTPs convencionales.
real tiene
7. Secuenciación múltiples aplicaciones en el campo de la medicina
del ADN Esto produce la terminación al azar de la secuencia de ADN,
El último paso en la caracterización
veterinaria, de un genen
puede ser utilizada es investigación
la determinación de su secuencia.
científica generando fragmentos de ADN que se diferencian en sólo un
Existen distintos
o enmétodos para obtener
diagnóstico. Es útiluna
porsecuencia
ejemplo,depara
[Link] detección de nucleótido que, al ser separados por electroforesis permiten
agentes infecciosos, caracterización de microorganismos, completar la secuencia de ADN.
7.1 Método cuantificación
enzimático de la carga viral, control de la eficacia de fár- Secuenciación automática por el método de Sanger: Se
El método de secuenciación
macos, más difundido
cuantificación es el método
de la expresión enzimático
de genes diseñado por Fred
y la detección utilizan primers o ddNTPs marcados con fluorocromos de
Sanger en 1975. Se basa en la síntesis de ADN por PCR, pero utilizando
de polimorfismos genéticos (SNPs). Es ampliamente utilizada diferentes. De este modo es posible automatizar la reacción
dideoxinucleótidos trifosfatos (ddNTPs), que carecen del grupo OH en la posición 3',
necesario para que se produzca el enlace fosfodiéster con el nucleótido entrante. Así,
110
los ddNTPs pueden ser incorporados al extremo 3'OH de una cadena de ADN en
síntesis, pero una vez incorporados, provocan la finalización de la misma. La reacción
se realiza en cuatro tubos diferentes para el mismo fragmento de ADN, a cada uno se
agrega una pequeña cantidad de cada uno de los ddNTPs (ddATP, ddCTP, ddGTP y
 un capilar antes de cargar la muestra de secuenciación; las muestras se van analizando
una a una. Este tipo de secuenciadores se utiliza para lecturas no superiores a 450-600pb
y se pueden analizar un número limitado de secuencias, de acuerdo al número de
capilares que tiene el equipo (1, 4 ó 16). El secuenciador automático funciona asociado
a un software apropiado que directamente provee la secuencia de nucleótidos obtenida
(Fig.
Anexo: 7). y Genómica
Biotecnología
Técnicas de BiologíaAnimal
Molecular

de secuenciación en una máquina (secuenciador de ADN) y

se realiza la electroforesis conjunta de las cuatros mezclas
de reacción en un gel de poliacrilamida o en un capilar.
Algunos secuenciadores automáticos utilizan la electroforesis
capilar para separar los fragmentos a secuenciar, contienen
un polímero que se inyecta de forma automática en un capilar
antes de cargar la muestra de secuenciación; las muestras
se van analizando una a una. Este tipo de secuenciadores
se utiliza para lecturas no superiores a 450-600pb y se pue-
den analizar un número limitado de secuencias, de acuerdo
al número de capilares que tiene el equipo (1, 4 ó 16). El
secuenciador automático funciona asociado a un software
apropiado que directamente provee la secuencia de nucleó-
tidos obtenida (Fig. 7).
7.2 Pirosecuenciación
Este método fue desarrollado por Mostaza Rognaghi en 1996,
está basada en la secuenciación por síntesis, pero acoplando
la reacción de síntesis de ADN a una reacción de quimiolu-
miniscencia, lo que permite la detección de la secuencia en
tiempo real. La técnica utiliza cuatro reacciones enzimáticas
que tienen lugar en un único tubo en el que se monitoriza
la síntesis de la cadena complementaria de DNA, usando
como molde un ADN de cadena simple. Los nucleótidos son
añadidos de forma consecutiva a la reacción y, en caso de
incorporación, se libera pirofosfato inorgánico (PPi).
La reacción se realiza en 5 etapas:
1. Un ADN simple cadena amplificado por PCR se hibridiza
con un cebador o primer de secuenciación y se incuba con
las enzimas: ADN polimerasa, ATP sulfurilasa, luciferasa
y apirasa y los sustratos: adenosin 5’ fosfosulfato (APS)
y luciferaza.
2. La adición de uno de los 4 dNTPs a la reacción, si es
complementario al molde, la ADN polimerasa lo agregará Figura 7. Secuenciación automática de ADN por el método de Sanger
Figura 7. Secuenciación automática de G/practicas/secuencia/[Link]).
([Link] ADN por el método de Sanger
en el extremo de la cadena que se está sintetizando. Por
([Link]
111

31
 Soria,
Soria, Liliana Liliana y Silvestro,
A; Martínez, Marcela yCarolina
Huguet, Miguel J.

cada dNTP que se agrega, durante las síntesis, se libera

un PPi, en una cantidad equimolar a la cantidad de ese
nucleótido incorporado (Fig. 8A).
3. La ATP sulfurilasa convierte el PPi en ATP en presencia
de APS. El ATP generado, en presencia de luciferaza,
permite la conversión de luciferina en oxiluciferina, la cual
genera luz visible en cantidades proporcionales al ATP
presente. La luz emitida es captada por una cámara CCD,
puede ser analizada por un programa y genera un pico
en el pirograma. La altura de cada pico es proporcional
a la cantidad de nucleótidos agregados (Fig. 8B).
4. La apirasa degrada los ATP y los dNTPs no incorporados
(Fig. 8C).
5. La adición de dNTPs en la reacción se realiza de a uno por
vez (ej. primero dGTP, luego dCTP, etc). Nuevos dNTPs
son agregados a la reacción para iniciar un nuevo ciclo.
La secuencia completa del fragmento secuenciado será
determinado por la presencia e intensidad de los picos
en el pirograma (Fig. 8D).
La pirosecuenciación es útil para determinar la secuencia de
fragmentos cortos de ADN, determinación de SNPs y análisis
de metilación del ADN.

7.3 Avances en los métodos de secuenciación

de ADN
Durante los últimos años en el mundo se han desarrollado
nuevos métodos y equipamiento con mayor capacidad, para
secuenciar ácidos nucleicos. Estos avances han sido impul-
sados por la necesidad de satisfacer la necesidad creciente
de lograr largas secuencias a bajo costo, como es el caso
de los proyectos de secuenciación de genomas bacterianos
o eucariotas. Estos emprendimientos han sido financiados
por instituciones públicas y privadas así como desarrolladas
y comercializadas por empresas privadas. FiguraFigura 8. Pirosecuenciación
8. Pirosecuenciación de ADNde ADN ([Link]
([Link]
new/whatis/).

112 8.3 Avances en los métodos de secuenciación de ADN

Durante los últimos años en el mundo se han desarrollado nuevos métodos y
equipamiento con mayor capacidad, para secuenciar ácidos nucleicos. Estos avances
han sido impulsados por la necesidad de satisfacer la necesidad creciente de lograr
largas secuencias a bajo costo, como es el caso de los proyectos de secuenciación de
 Anexo:
Biotecnología
Técnicasy Genómica
de BiologíaAnimal
Molecular
genomas bacterianos o eucariotas. Estos emprendimientos han sido financiados por
Los nuevos
instituciones públicassistemas
y privadas permiten una secuenciación
así como desarrolladas más barata
y comercializadas por empresas en este momento. En el país, la mayoría de los secuencia-
y eficiente, a pesar de obtener fragmentos de menor tamaño
privadas. dores existentes utilizan el método enzimático de Sanger
Los nuevos
(desde sistemas
10 a permiten
300 pb una de secuenciación más baratatienen
acuerdo al equipo), y eficiente, a pesar de
la parti- mediante el sistema automatizado capilar: Si embargo,
obtenercularidad
fragmentosde de poder
menor tamaño
generar cientos de miles de secuenciastienen
(desde 10 a 300 pb de acuerdo al equipo), recientemente se han instalado equipos de alta capacidad,
la particularidad de poder generar cientos de miles de secuencias diferentes
diferentesAsí,
simultáneamente. simultáneamente. Así, lasrequieren
las secuencias obtenidas secuencias obtenidas
el empleo de potentes uno de ellos es un 454.
requieren el empleo de potentes
herramientas informáticas para su ensamblaje. herramientas informáticas La reducción del precio de cada reacción de secuenciación,
para sude
Esta tecnología ensamblaje.
secuenciación de alto rendimiento (High-throughput sequencing) o a la mejora de los microprocesadores de las computadoras y
gran escala,
Esta se ha desarrollado
tecnología a lo largo del tiempo,
de secuenciación en etapas
de alto que se denominan:
rendimiento (High- First las herramientas bioinformáticas permitieron completar la
Generation Sequencing, Next Generation Sequencing y Third
throughput sequencing) o a gran escala, se ha desarrollado Generation Sequencing. secuenciación de más de 1000 genomas de bacterias, más
Los sistemas de nueva generación más difundidos son 454, Solexa y SOLiD, de las
a loRoche,
empresas largoIllumina
del tiempo, en etapas
y de Applied que se
Biosystems, denominan:
respectivamente First3).Ge-
(Tabla de 500 eucariotas y un número aún mayor de orgánulos,
neration Sequencing, Next Generation Sequencing
Los métodos que estos sistemas utilizan para la amplificación de la muestra, y Third
previa a la virus, plásmidos y viroides.
Generation
secuenciación, Sequencing.
varían, se puede utilizar la PCR en emulsión (454 y SOLiD) o la A pesar del potencial de las técnicas mencionadas, se están
amplificación clonal (Solexa).
Los sistemas de nueva Losgeneración
métodos demás secuenciación
difundidos de son
los 454,
fragmentos desarrollando actualmente métodos mucho más eficaces
amplificados
Solexa y SOLiD, de las empresas Roche, Illumina y de Applied454 se
también varían en cada equipo (Tabla 3), por ejemplo en el equipo que provocarán una revolución en el campo de la genómica.
utiliza pirosecuenciación (Fig. 9).
Biosystems, respectivamente (Tabla 3).
Tabla 3. Equipos disponibles en el mercado para secuenciación de ADN de alto
Tabla 3. Equipos disponibles en el mercado para secuenciación de ADN
rendimiento. de alto rendimiento. 8. Microarreglos o microarrays
Es una técnica basada en la hibridación de ácidos nucleicos.
Se usa un soporte inerte llamado chip dividido en celdillas y
en cada una se fijan sondas de ADN.
Pueden ser utilizados para analizar expresión (transcripción).
En conjunto estas celdillas escanean numerosos genes de un
organismo que se expresan por ej. en un tejido (o en alguna
patología). Mediante el uso de este tipo de tecnología lo que
Los métodos que estos sistemas utilizan para la amplificación
No es el objetivo explicar cada uno de los sistemas de secuenciación de alto rendimiento
se obtiene es el transcriptoma de una célula, es decir se
de ladisponibles
actualmente muestra,enprevia a la Sólo
el mercado. secuenciación,
se ha tratado devarían, se puede
dar un panorama de cómo puede obtener información sobre todos los ARNm que se ex-
avanzautilizar la PCR
la tecnología y enen
quéemulsión (454 yeste
etapa se encuentra SOLiD)
tema eno este
la amplificación
momento. En el país, presan en la misma, bajo determinadas condiciones. Debido a
la mayoría
clonal de(Solexa).
los secuenciadores
Los métodosexistentes utilizan el método
de secuenciación deenzimático
los fragmen-de Sanger que el ARNm es muy lábil, se debe sintetizar ADNc. Se utiliza
mediante
toselamplificados
sistema automatizado
también capilar:
varíanSi en
embargo, recientemente
cada equipo (Tablase3),
hanpor
instalado uno de los dNTPs marcados con un colorante fluorescente.
equipos de alta capacidad, uno de ellos es un 454.
ejemplo en el equipo 454 se utiliza pirosecuenciación (Fig. 9).
La reducción del precio de cada reacción de secuenciación, la mejora de los
Al colocar la muestra en los chips, hibridará cada ADNc con
No es el objetivo
microprocesadores explicar cada
de las computadoras uno de losbioinformáticas
y las herramientas sistemas depermitieron
se- su sonda específica en la casilla determinada, luego se lava
cuenciación
completar de altoderendimiento
la secuenciación más de 1000actualmente
genomas de disponibles
bacterias, másen de 500 y se observa bajo luz UV. Sólo en los puntos donde ocurrió
el mercado.
eucariotas y un númeroSólo
aún se ha de
mayor tratado de dar
orgánulos, unplásmidos
virus, panorama de cómo
y viroides. hibridización habrá fluorescencia, siendo la intensidad de la
A pesar del potencial
avanza de las técnicas
la tecnología y enmencionadas,
qué etapa se se están desarrollando
encuentra actualmente
este tema fluorescencia detectada proporcional al nivel de expresión
métodos mucho más eficaces que provocarán una revolución en el campo de la
genómica.
113
 Soria,
Soria, Liliana Liliana y Silvestro,
A; Martínez, Marcela yCarolina
Huguet, Miguel J.

Figura 9. Etapas de la secuenciación de ADN en un equipo Roche/454 FLX Pyrosequencer ([Link]

Figura 9. Etapas de la secuenciación de ADN en un equipo Roche/454 FLX
Pyrosequencer ([Link]
de los genes en estudio. Incluso es posible comparar 2 realizar un análisis rápido sobre cuales genes están encen-
tipos celulares marcados con diferente colorante sobre didos y apagados en una célula en determinado momento.
un mismo microarray (Fig. 10). Deo este
8. Microarreglos modo se logra un
microarrays Permitiendo incluso, la comparación de 2 tipos celulares, o
análisis rápido de la expresión de genes en un tejido o un
Es una técnica basada en la hibridación de ácidos delnucleicos.
mismo tipo
Secelular
usa unen diferentes
soporte inertecondiciones. Es muy
organismo. utilizado para comparar
llamado chip dividido en celdillas y en cada una se fijan sondas de ADN. la expresión diferencial entre célu-
Si bien los ensayos con microarreglos son fáciles de realizar, las normales y cancerosas, estudiar
Pueden ser utilizados para analizar expresión (transcripción). En conjunto estas celdillasrutas metabólicas y la
son también difíciles de analizar. La ventaja es que permite expresión durante el desarrollo
escanean numerosos genes de un organismo que se expresan por ej. en un tejido (o en embriológico.
114 alguna patología). Mediante el uso de este tipo de tecnología lo que se obtiene es el
transcriptoma de una célula, es decir se puede obtener información sobre todos los
ARNm que se expresan en la misma, bajo determinadas condiciones. Debido a que el
ARNm es muy lábil, se debe sintetizar ADNc. Se utiliza uno de los dNTPs marcados
con un colorante fluorescente. Al colocar la muestra en los chips, hibridará cada ADNc
 muy utilizado para comparar la expresión diferencial entre células normales y
cancerosas, estudiar rutas metabólicas
Anexo:
y la yexpresión
Biotecnología
Técnicas Genómica
durante el desarrollo embriológico.
de BiologíaAnimal
Molecular

Figura 10. Comparación

Figura [Link] expresión génica de
Comparación de dos
la muestras
expresióna través de análisis
génica de dosdemuestras
microarryasa ([Link]
través de análisis de
genomica aplicada/[Link]).
microarryas ([Link]
En la Figura 10 el punto verde corresponde a los genes se realiza fijando a la matriz secuencias que contengan mu-
que se expresan solo en la condición 1, mientras que el taciones conocidas (por ejemplo dentro de un determinado
En la Figura 10 el punto verde
punto rojo indica los genes expresados únicamente bajo la corresponde a los para
gen), genespoder
que detectar
se expresan solo en tienen
qué genotipo la las muestra
condición 1, mientras que el punto
condición 2. Cuando un gen se expresa igual bajo ambas rojo indica los genes
analizadas. expresados únicamente bajo la
condiciones, secondición
observa el2. Cuando
punto un gen
amarillo se expresa igualDurante
correspondiente bajo ambas condiciones,
lo últimos 5 años sese
hanobserva el microarrays que
diseñado
a la uorescenciapunto amarillo
conjunta correspondiente
de ambas a la fluorescencia
sondas marcadas. conjunta
permiten de ambasensondas
determinar, marcadas.
forma masiva, genotipos de distintos
También los microarrays
Tambiénpueden ser diseñados
los microarrays para analizar
pueden ser diseñadospolimorfismos
para analizarenvariabilidad
un mismo momento. Originalmente
genética. En estaban
variabilidad genética. En este tipo de chips se fijan sonda limitados a unos pocos genes, pero
este tipo de chips se fijan sonda cortas de oligonucleótidos sintéticos (7-30 nucleótidos), los avances tecnológicos
cortas de oligonucleótidos
cada una desintéticos (7-30
las cuales esnucleótidos),
complementaria cada a unaque se han
región producido
de un han permitido
gen determinado, de lograr
modo chips que permi-
una de las cuales es complementaria a una región de un ten determinar genotipos de más 800.000 polimorfismos por
que se puedan identificar alelos (SNPs o InDels) de genes conocidos. Este tipo de
gen determinado, de modo que se puedan identificar alelos ejemplo en bovinos, por lo tanto permiten llevar a cabo un
(SNPs o InDels)análisis se conocidos.
de genes realiza fijando
Este atipo
la de
matriz secuencias
análisis que contengan
análisis completo demutaciones
un genomaconocidas
al mismo tiempo.
(por ejemplo dentro de un determinado gen), para poder detectar qué genotipo tienen las
muestra analizadas. 115
Durante lo últimos 5 años se han diseñado microarrays que permiten determinar, en
forma masiva, genotipos de distintos polimorfismos en un mismo momento.
Originalmente estaban limitados a unos pocos genes, pero los avances tecnológicos que
 Soria,
Soria, Liliana Liliana y Silvestro,
A; Martínez, Marcela yCarolina
Huguet, Miguel J.

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116
 Ciclo Celular y División Celular: Aspectos genéticos

Ciclo Celular y División Celular:

Aspectos genéticos
Motter, Mariana y Huguet, Miguel

Introducción
El material genético de los organismos superiores esta com- produce el crecimiento del organismo y/o la reparación de
puesto por ADN organizado en cromatina, en estructuras tejidos.
llamadas cromosomas. Las células somáticas contienen un En el caso de las células germinales la división celular que
número diploide (representado como 2n) de cromosomas, se lleva adelante es la meiosis la cual genera gametas las
los cuales pueden ser clasificados como autosomas, aque- cuales portan la mitad del número de cromosomas y pre-
llos que no determinan el sexo y alosomas o cromosomas sentan variabilidad genética debida a la recombinación de
sexuales. Por ejemplo un canino con un 2n=78 posee: 76 la información.
autosomas y dos alosomas, siendo este XX (el par sexual
para las hembras) o XY (el par sexual para los machos).
En los pares autosómicos cada cromosoma tiene dos re- 1. Ciclo Celular
presentantes, uno de origen materno y otro paterno, y cada
cromosoma homólogo del mismo par (materno y paterno) Cada ciclo celular comprende un periodo M (de división) y
puede contener distintos alelos de un mismo gen. Para los una interfase compuesta por los periodos: G1, S y G2.
alosomas, en el caso de las hembras, ambos cromosomas Estudios in vitro demuestran que bajo ciertas condiciones de
son totalmente homólogos, pero en los machos el par XY pre- cultivo la mayoría de las células completan su ciclo celular en
senta diferencias en morfología y sólo comparten homología 16 hs. Con periodos S y G2 de duración constante en distintos
en una pequeña región. tipos celulares y mayor diferencia en el periodo G1 (Tabla 1).
La división celular se denomina mitosis o meiosis, de acuerdo Desde G1 la célula puede avanzar hacia S o pasar a un es-
al tipo de célula donde ocurre y a la células resultantes de tadío quiescente, pero metabolitamente activo, denominado
dicha división. Toda la información genética es transmitida G0. Células que se dividen muy lentamente en un organismo
de una generación de células a la siguiente de una manera pueden permanecer días e incluso años en G0, mientras que
extremadamente precisa y ordenada. aquellas de rápida división no lo hacen y el periodo G1 es
En las células somáticas, la división celular es la mitosis, y muy corto.
la misma aumenta el número de células en un tejido, lo que

119
 Motter,
Tabla 1. Tiempo aproximado de duración del ciclo celular en cultivo, tiempoMariana y Huguet, Miguel
que varía según el tipo celular
Tabla 1. Tiempo aproximado de duración del ciclo celular en cultivo, tamente la misma información genética. Los cromosomas
tiempo que varía según el tipo celular duplicados presentan durante este período un bajo nivel de
condensación de la cromatina, por lo que todavía no son
INTERFASE MITOSIS
visibles bajo el microscopio óptico. El nivel de plegado que
G1 S G2 M presenta la cromatina durante este período es el mismo que
5 Hs 7 Hs 3 Hs 1 Hs el que tenía en el período anterior, es decir es la fibra de 30nm.
1.3 Período G2
Durante G2 se sintetizan las proteínas necesarias para
comenzar la fase M. Por ejemplo, se sintetiza una ciclina la
PROFASE METAFASE ANAFASE TELOFASE
que, unida a la proteinkinasa mitótica, formará el complejo
36 min. 3 min 3 min 18 min promotor de la mitosis (MPF). Este complejo aumenta el
nivel de condensación de los cromosomas a través de la
Durante
1.1 Período G1 el ciclo celular se producen cambios en el nivel de fosforilación de las histonas H1 y promueve la formación
Es el primer período
plegamiento de la
deInterfase y su nombre
la cromatina y enproviene de "gap"de
el contenido quelasignifica
informa- de las fibras del huso. Además, a través de un complejo
intervalo. Durante este período la célula se prepara para entrar en S (síntesis multiprotéico denominado condensina, es el encargado de
de ADN)ción genética
o pasar (Tabla
a G0 según 2)
las señales extracelulares.
Durante el mismo se produce la transcripción y traducción de todas las enzimas fosforilar a las proteínas de la membrana nuclear facilitando
1.1para
necesarias Período G1 del ADN. La célula aumenta el transporte de
la replicación la ruptura de la misma.
nutrientes a través de la membrana plasmática y comienza a aumentar de
tamañ[Link] el primer período de la Interfase y su nombre proviene de 1.4 Fase M
El inicio“gap” que significa
de la síntesis intervalo.
de histonas define el Durante
final de G1este período
y comienzo de laS. célula
Las
histonas son una de las pocas proteínas que se expresan en S, ya que son
se prepara para entrar en S (síntesis de ADN) o pasar a G0 A continuación se detallaran los eventos que en cada tipo de
necesarias en altas cantidades para formar los nuevos nucleosomas.
según las señales extracelulares. división celular (mitosis o meiosis) son importantes desde el
Durante
1.2 Período S el mismo se produce la transcripción y traducción de punto de vista genético, omitiéndose detalles que correspon-
Durante esta fase se produce la replicación del ADN, y como consecuencia de
todas las enzimas necesarias para la replicación del ADN. den a cambios citológicos.
ese proceso los cromosomas pasan a estar formados por dos cromátides
La célula aumenta
hermanas que llevan exactamente el transporte
la misma deinformación
nutrientesgenética.
a travésLos de la
1.4.1 Mitosis
membrana plasmática y comienza a aumentar de tamaño.
cromosomas duplicados presentan durante este período un bajo nivel de
condensación de la cromatina, por lo que todavía no son visibles bajo el Esta división celular consta de 5 etapas, las cuales son: Pro-
El inicio de la síntesis de histonas define el final de G1 y co-
microscopio óptico. El nivel de plegado que presenta la cromatina durante este
período mienzo de S.
es el mismo queLas histonas
el que tenía enson una de
el período las pocas
anterior, proteínas
es decir es la fibraque fase, Metafase, Anafase, Telofase y Citocinesis. Al comienzo
de [Link] expresan en S, ya que son necesarias en altas cantidades de la Profase los cromosomas se encuentran duplicados y
para formar los nuevos nucleosomas. alcanzan su máximo nivel de condensación en Metafase don-
1.3 Período G2
Durante G2 se sintetizan las proteínas necesarias para comenzar la fase M. de se disponen en la placa ecuatorial, en forma aislada, es
1.2 se
Por ejemplo, Período S ciclina la que, unida a la proteinkinasa mitótica,
sintetiza una decir que no están apareados con sus respectivos homólogos.
formará el complejo promotor de la mitosis (MPF). Este complejo aumenta el Durante la Anafase, estando cada cromosoma unido al huso
Durante esta fase se produce la replicación del ADN, y como
nivel de condensación de los cromosomas a través de la fosforilación de las
histonasconsecuencia
H1 y promueve la deformación
ese proceso
de las los cromosomas
fibras pasan
del huso. Además, a estar
a través mitótico a través del cinetocoro, se produce la separación de
formados
de un complejo por dos denominado
multiprotéico cromátidescondensina,
hermanas es que llevan exac-
el encargado de cada cromátide hermana hacia polos opuestos. La citocinesis
fosforilar a las proteínas de la membrana nuclear facilitando la ruptura de la
misma. 120
 Ciclo Celular y División Celular: Aspectos genéticos

es la división del citoplasma a nivel del ecuador de la célula, ocurra el intercambio entre cromátides no hermanas (nódulo
generando como resultado dos células hijas con igual número de recombinación o crossing over) (Fig. 1). Cabe aclarar que
de cromosomas e información genética que la progenitora. este evento ocurre solamente entre regiones homólogas, por
Este proceso asegura que toda célula que completa el ciclo lo tanto en los alosomas y en el sexo XY esto estará limitado
celular reparta su información genética de modo tal que sus a la región homologa o pseudo-autosomica.
dos células hijas tendrán la misma función y características.

1.4.2 Meiosis
Los organismos superiores que se reproducen sexualmente
se originan por la combinación de la información genética
proveniente de dos progenitores diferentes. Por lo tanto, es
necesario que en algún momento del ciclo vital de cada futuro
progenitor se formen las células que podrán dar origen a la
siguiente generación. Estas células son las gametas.
La división celular por la cual se originan las gametas se de-
nomina Meiosis, la misma consta de dos divisiones sucesivas
sin mediar entre ellas periodo alguno de duplicación del ADN.
La Meiosis consta de las mismas etapas que la Mitosis, pero
cada etapa se denomina según corresponda a la primera (MI)
o segunda (MII) división meiótica.
Figura 1. Complejo sinaptonémico formado por los elementos laterales
Figura 1. Complejo sinaptonémico formado por los elementos laterales y la
y la región central (Castro A and Lorca T, 2005)
región central (Castro A and Lorca T, 2005)
MEIOSIS I Paquinema: se produce el crossing over que es el inter-
cambio de segmentos cromosómicos entre cromátides no
Profase I (PI): durante este periodo la envoltura nuclear y
Paquinema:hermanas de cromosomas
se produce el crossing homólogos,
over que esgenerando los quias-
el intercambio de segmentos
el nucléolo se desorganizan, los centríolos migran a polos mas. Dicho evento puede provocar la recombinación de la
cromosómicos entre cromátides no hermanas de cromosomas homólogos,
opuestos, duplicándose y se ordena el huso acromático. información genética, la que se denomina recombinación
generando los quiasmas. Dicho evento puede provocar la recombinación de la
Esta fase se divide en 5 etapas en las cuales suceden los Intracromosómica, la cual será explicada más detalladamente
información genética, la que se denomina recombinación Intracromosómica, la
siguientes cambios: en el punto 2.3.
Leptonema: los cromosomas comienzan a condensarse.
cual será explicada más detalladamente en el punto 2.3.
Diplonema: los homólogos se repelen y quedan unidos por
Cigonema: los cromosomas homólogos se aparean yDiplonema:
se for- losquiasmas.
los homólogos En selasrepelen y quedan unidos
células germinales por los
de los fetos ma-quiasmas. En
las células
man los bivalentes mediante el complejo sinaptonémico. Dicho germinales
míferos hembra la división se detiene en esta etapa hastase detiene en
de los fetos mamíferos hembra la división
esta
complejo está formado por dos elementos laterales (cada unoetapa hasta la pubertad.
la pubertad. Durante Durante
ese períodoeseseperíodo se acumularán
acumularán todos los todos los
nutrientes
asociado a las cromátides de cada cromosoma homólogo) y un de reservadedel
nutrientes ovocito
reserva que serán
del ovocito utilizados
que serán porpor
utilizados el elcigoto recién
formado.
elemento central que une ambos homólogos, permitiendo que cigoto recién formado.
Diacinesis: continúa la condensación de la cromatina.
121
Metafase I (MI): los cromosomas homólogos apareados (formando bivalentes)
se alinean en el plano ecuatorial y se unen por medio del centrómero a las
fibras del huso acromático. El bivalente alosómico (XY) forma un bivalente
abierto ya que la región de homología es muy pequeña (Fig. 2). Cada bivalente
 células hijas que serán diferentes a la célula que inició la meiosis en cantidad y
calidad de información genética, debido a que en AI hubo reducción de número
Motter, Mariana y Huguet, Miguel
cromosómico y en PI y MI recombinación genética.
Diacinesis: continúa la condensación de la cromatina.

Metafase I (MI): los cromosomas homólogos apareados (for-

mando bivalentes) se alinean en el plano ecuatorial y se unen
por medio del centrómero a las fibras del huso acromático.
El bivalente alosómico (XY) forma un bivalente abierto ya
que la región de homología es muy pequeña (Fig. 2). Cada
bivalente se ubica al azar en la placa ecuatorial (coorientación
centromérica al azar), es decir que se disponen de modo tal
que no quedan todos los cromosomas paternos de un lado
del plano ecuatorial y los maternos del otro. Debido a que
en cada meiosis esta disposición es siempre azarosa, cada
individuo podrá generar gametas con diferente composición
de cromosomas paternos y maternos. Este evento también
causa recombinación genética y recibe el nombre de re-
Figura. 2. En el macho
combinación Intercromosomica, la cual será explicada más
XYel macho
Figura. 2. En durante PI sePI forma
XY durante unbivalente
se forma un bivalente
abiertoabierto porque
detalladamente en el punto 2.2. sólo se pueden unir por
porque homología
sólo se pueden en
unir la
por región
homologíahomóloga.
en la región homóloga.

Anafase I (AI): en esta etapa, estando los cromosomas MEIOSIS II

MEIOSIS
homólogos unidos a las fibras del huso, se produce la sepa-II
ración o segregación de los cromosomas homólogos a polos
opuestos. Esta separación provoca la reducción del número
Profase II (PII):Profase
etapa IImuy
(PII): etapa
cortamuyen corta en la no
la cual cualocurren
no ocurreneventos
eventos importantes
cromosómico, el cual pasará de 2n (diploide) a desde
n (haploide). importantes desde
el punto de vista genético. el punto de vista genético.

Telofase I (TI): Los cromosomas homólogos separados Metafase II (MII): los cromosomas se alinean en la placa
llegan a los polos. Metafase II (MII): los cromosomas se alinean en la placa ecuatorial, y cada
ecuatorial, y cada cromátide de cada cromosoma se une a
cromátide de cada unacromosoma
fibra del huso se une a una fibra del huso acromático.
acromático.
Citocinesis: se produce la separación física del citoplasma
Anafase
para generar dos células hijas que serán diferentes II (AII):Anafase
a la célula se produce
II (AII):laseseparación de cromátidas
produce la separación hermanas de cada
de cromátidas
que inició la meiosis en cantidad y calidad decromosoma
información a polos opuestos.
hermanas de cada cromosoma a polos opuestos.
genética, debido a que en AI hubo reducción de número
cromosómico y en PI y MI recombinación gené[Link] II (TII): Telofase II (TII): los cromosomas
los cromosomas llegan a llegan a los polos,
los polos, el huso
el huso acromático se
acromático se desorganiza, se reorganizan la envoltura
desorganiza, se reorganizan la envoltura nuclear y el nucleolo, se dispersan los
nuclear y el nucleolo, se dispersan los cromosomas y se
cromosomas y se descondensan.
descondensan.

122 Citocinesis: se produce la separación del citoplasma y se generan las células

hijas, las cuales tendrán un complemento cromosómico n pero cada
cromosoma tendrá una sola cromátide.
 Ciclo Celular y División Celular: Aspectos genéticos

Citocinesis: se produce la separación del citoplasma y se 2. Separación de la información genética materna y paterna
generan las células hijas, las cuales tendrán un comple- al azar entre las células hijas de la 1° división meiótica.
mento cromosómico n, pero cada cromosoma tendrá una 3. Recombinación de la información genética en las célu-
sola cromátide. las producto de la meiosis, tanto la situada en distintos
cromosomas (recombinación intercromosómica) por la
ubicación al azar de los cromosomas homólogos en MI,
Resumiendo: los eventos más importantes de la meiosis son: como la situada en cromosomas homólogos por efecto del
entrecruzamiento en PI (recombinación intracromosómica).
1. Apareamiento de cromosomas homólogos durante ci-
gonema (previa formación del complejo sinaptonémico),
para formar bivalentes. 2. Genes, Cromosomas y Herencia
2. Intercambio de material genético entre cromátides no
hermanas de cromosomas homólogos (crossing over) Durante la meiosis ocurren tres eventos que son importantes
durante Paquinema por intermedio de los nódulos de re- desde el punto de vista genético, los mismos se detallan a
combinación. Este proceso puede originar recombinación continuación:
genética entre cromosomas homólogos. 2.1 Segregación de los alelos de un gen
3. Presencia de quiasmas en los bivalentes, los cuales se
observan durante diplonema. Al menos un quiasma por De acuerdo a lo que postula la teoría cromosómica de la
bivalente es necesario para que exista una segregación herencia (ver capítulo 8 , Ligamiento y mapas genéticos) los
normal de cromosomas homólogos en AI. genes están ubicados en forma lineal en los cromosomas y el
4. Recombinación intercromosómica debido a la coorienta- lugar físico que ocupa un determinado gen en un cromosoma
ción centromérica al azar de cromosomas no homólogos se denomina locus (plural: loci).
durante la MI En los organismos diploides cada gen está representado
5. Segregación de cromosomas homólogos durante AI, lo dos veces en cada genoma (uno en el cromosoma materno
que determina la reducción del número cromosómico (2n y otro en el paterno) y ambos genes codifican para la misma
pasa a n) por este motivo la Meiosis I recibe el nombre característica. Estas dos copias pueden estar en el mismo
de etapa reduccional. estado alélico o no. Se considera alelo a las distintas alter-
6. Segregación de cromátides hermanas de cada cromoso- nativas de expresión de un gen.
ma durante AII (División ecuacional). La localización cromosómica de cada locus varía con las
especies, por ejemplo: el gen TYR (codifica para la enzima
tirosinasa) tiene su locus en el cromosoma 4 en el gato pero
1.5. Consecuencias Genéticas de la Meiosis en el 21 en el perro.
El gen TYR del gato presenta varias alternativas alélicas, dos
1. Reducción del número de cromosomas del estado diploide
de las cuales son el alelo dominante C y el alelo recesivo c.
(2n) al haploide (n).
El alelo C codifica para el color uniforme del manto y el alelo

123
 Motter, Mariana y Huguet, Miguel

Tabla 2. Nieles de condensación de la cromatina y contenido de información genética en cada etapa del ciclo celular en el bovino (2n=60)

Interfase M (mitosis)

G1 S G2 P M A T

Condensado
Fibra de Al final de
30nm, al esta etapa
Morfología Fibra de 30nm
final del 1400 Mayor se
condensado
cromosomica periodo nm condensación descondensa
comienza a y se organiza
condensarse la membrana
nuclear

Nº
60
Cromosomas

Cromátides
por 1 1 2 2 2 1 1
cromosoma

M (MEIOSIS)

PI MI AI TI PII MII AII TII

Idem
Morfología 1400 Mayor
Condensado telofase
cromosomica nm condensación
mitótica

60
Nº
60 (30 30
Cromosomas
bivalentes)

Cromátides
por 2 1 a cada polo
cromosoma

recesivo determina ausencia de color o albinismo. Los gatos recesivo oculto que se expresa fenotípicamente). Durante
para este locus pueden ser homocigotas o heterocigotas. la meiosis se produce la segregación de los alelos de un
Un animal será homocigota cuanto posee dos alelos en el gen, dicha separación ocurrirá en AI o en AII dependiendo
mismo estado (dominante [Link])
Genes, Cromosomas y Herencia
y cuando posee uno si dicho locus recombina o no durante paquinema, esto va
de cada tipo será heterocigota
Durante la meiosis ocurren tres eventos quea son
o portador (se denomina así depender de la
importantes posición
desde deldequiasma respecto del locus.
el punto
porque presenta un fenotipovista
dominante
genético,pero poseese
los mismos undetallan
alelo a continuación:
Esta es la explicación genética de la Segunda Ley de Men-
124 2.1 Segregación de los alelos de un gen
De acuerdo a lo que postula la teoría cromosómica de la herencia (ver capítulo
8) los genes están ubicados en forma lineal en los cromosomas y el lugar físico
que ocupa un determinado gen en un cromosoma se denomina locus (plural:
loci).
 Ciclo Celular y División Celular: Aspectos genéticos

del (principio de segregación), que se cumple para todos los características color del manto (gen TYR con sus alelos C y
genes independientemente de la condición de homocigota o c) y largo del pelo (gen Fgf5, con los alelos: L que determina
heterocigota de cada loci. pelo corto y l pelo largo) cuyos loci se encuentran en distintos
cromosomas, un individuo heterocigota para ambos genes
2.2 Recombinación Intercromosómica (dihíbrido), formará cuatro clases de gametas (CL, cl, Cl y cL)
Como la ubicación de los distintos cromosomas, maternos por la coorientación centromérica al azar durante MI. En la
y paternos, en la placa ecuatorial es totalmente al azar para Figura 3 se presentan las dos coorientaciones posibles de los
cada par de cromosomas (coorientación centromérica), un cromosomas de un gato diheterocigota (CcLl) durante MI. En
individuo heterocigota para dos genes localizados en distintos la parte 1 de la Fig. 3, los cromosomas paternos que portan
cromosomas formará distintas clases de gametas, las cua- los alelos dominantes para los genes considerados se ubican
les se diferencias en la combinación de alelos de cada gen por encima de la placa ecuatorial, y los maternos que portan
que las mismas portan. Por ejemplo, teniendo en cuenta las los recesivos (c y l) por debajo de la misma, esto provocará

Figura 3. Recombinación Intercromosómica determinada por

Figura 3. Recombinación la coorientación centromérica
Intercromosómica determinada de por
los cromosomas en la placa ecuatorial (Principio de la
la coorientación
Transmisión
centromérica de los cromosomas en independiente)
la placa ecuatorial (Principio de la
Transmisión independiente)
125

2.3 Recombinación Intracromosómica

Cuando dos genes se ubican en el mismo cromosoma (genes ligados) la
recombinación ocurrirá solamente en diheterocigotas y sólo cuando exista
 Motter, Mariana y Huguet, Miguel

que en AI la migración de C con L a un polo y de los dos rece- cromosomas, este evento se relaciona con la Tercera Ley de
sivos al otro. Por el contrario en la parte 2 de la misma figura, Mendel (o de la transmisión independiente)
los cromosomas paternos y maternos se ubican alternados, es
decir, el cromosoma que porta C se ubica del mismo lado que
el que porta l y el que porta c del mismo que L. Esta orientación 2.3 Recombinación Intracromosómica
en el plano ecuatorial generará gametas cL y Cl. Cuando dos genes se ubican en el mismo cromosoma (genes
Ambas orientaciones en el plano ecuatorial son igualmente ligados) la recombinación ocurrirá solamente en diheteroci-
probables, por lo tanto un individuo dihibrido (CcLl) podrá gotas y sólo cuando exista entrecruzamiento o crossing-over
formar cuatro tipos de gametas igualmente probables (25% durante paquinema entre los dos genes considerados (Fig.
cada una). Para que este tipo de recombinación pueda ocurrir 4). Por ejemplo, en el cromosoma 5 del canino se ubican el
los genes (TYR y Fgf5) deben estar localizados en distintos gen MC1R (que codifica para color del manto siendo E color

Figura 4. Recombinación Intracromosómica determinada por el entrecruzamiento y recombinación entre los loci considerados (2º caso). En los casos 1
y 2 no se observa recombinación porque el crossing over no se produce entre los loci E y H
Figura 4. Recombinación Intracromosómica determinada por el
entrecruzamiento y recombinación entre los loci considerados (2º caso). En los
126 casos 1 y 2 no se observa recombinación porque el crossing over no se
produce entre los loci E y H

3. Disyunción y No disyunción
Se denomina disyunción a la segregación que sufren los cromosomas
 3.1 No disyunción en Mitosis
Durante el periodo S las cromátides hermanas quedan unidas por un complejo
proteico
Ciclo Celularde cuatro
y División proteínas
Celular: Aspectos genéticos denominadas cohesinas, las cuales forman un

anillo
negro y e color marrón) y el HSF4 (involucrado alrededor
en la presencia dedellas cromátides
centrómero a lodelargo
el encargado inactivardel
a lascromosoma
cohesinas es y el cinetocoro
de cataratas hereditarias en ciertas razas caninas,
(Fig. 5). siendo H el Complejo Promotor de la Anafase (APC).
visión normal y h cataratas).
Como producto de esta recombinación se podrán generar
cuatro clases de gametas (EH, Eh, eH, eh) pero la proporción
de cada una de ellas dependerá de la frecuencia con que
ocurren los quiasmas lo cual va a depender de la distancia
que existe entre dicho genes (tema que será tratado en el
capítulo 8).

3. Disyunción y No disyunción
Se denomina disyunción a la segregación que sufren los cro-
mosomas homólogos o las cromátides hermanas durante la
división celular (mitosis o meiosis). Cuando esta segregación
no ocurre se habla de no-disyunción.
La migración correcta de los cromosomas en mitosis y en
meiosis depende de varios pasos en los cuales están invo-
lucrados los cromosomas, las fibras del huso y el correcto
apareamiento de cromátides hermanas y/u homólogos.
La no-disyunción puede ocurrir en mitosis o meiosis y las
consecuencias son diferentes.
3.1 No disyunción en Mitosis
Durante el periodo S las cromátides hermanas quedan unidas Figura 5 Cromátides hermanas unidas por cohesinas y cinetocoros
Figura 5 Cromátides
por un complejo proteico de cuatro proteínas denominadas hermanas
orientados unidas
hacia los polos porde cohesinas
(Adaptado Holt, J. and Keith, y cinetocoros orientados
J, 2009).
hacia los
cohesinas, las cuales forman un anillo alrededor polos
de las cro- (Adaptado de Holt, J. and Keith, J, 2009).
mátides a lo largo del cromosoma y el cinetocoro (Fig. 5). El 90% de los tumores sólidos y el 50% de los hematopoyé-
La cohesión entre cromátides hermanas persiste hasta el ticos se presentan por células con distinto número de cromo-
comienzo de la Anafase, aunque la unión entre las cromátides somas a causa de las no disyunciones mitóticas.
La cohesión
hermanas se pierde paulatinamente desde Profase a medida entre cromátides
Estas fallas se puedenhermanas
deber a: persiste hasta el comienzo de la
que progresa la mitosis. En Profase el Anafase, aunque • laIncorrecta
Complejo Promotor uniónunión entre
de las las cromátides
cromátides al huso: durante hermanas
la se pierde
de la Mitosis (MPF) es el que inactiva a las cohesinas, prin- profase y metafase se chequea la unión de las fibras
paulatinamente desdedelProfase
cipalmente las que no están próximas al centrómero. A nivel
a medida que progresa la mitosis. En Profase el
huso a los cinetocoros, cuando falla este control, las
Complejo Promotor de la Mitosis (MPF) es el que inactiva a las cohesinas,
principalmente las que no están próximas al centrómero. A 127
nivel del centrómero
el encargado de inactivar a las cohesinas es el Complejo Promotor de la
Anafase (APC).
El 90% de los tumores sólidos y el 50% de los hematopoyéticos se presentan
 Motter, Mariana y Huguet, Miguel

cromátides hermanas podrían migrar asimétricamente a mas de dos se produce un desbalance en la segregación
los polos (Fig. 6A). (Fig. 6C).
• Prematura perdida de cohesión entre cromátides: en
este caso las cromátides hermanas migran al mismo 3.2 No disyunción durante la Meiosis
polo (Fig. 6B). Durante las primeras etapas de la meiosis las cromátides
• Mas de dos centrosomas: solo hay dos centrosomas (uno hermanas y los cromosomas homólogos se encuentran uni-
en cada polo) en cada célula en división, pero cuando hay das. Varias cohesinas mantienen unidas a las cromátides

Figura 6 Causas de no disyunciones mitóticas.

Figura 6 Causas de no disyunciones mitóticas.
128

3.2 No disyunción durante la Meiosis

Durante las primeras etapas de la meiosis las cromátides hermanas y los
cromosomas homólogos se encuentran unidas. Varias cohesinas mantienen
 Ciclo Celular y División Celular: Aspectos genéticos

hermanas (un número mayor que las mitóticas) y al par de No disyunción en Anafase I
cromosomas homólogos los une el complejo sinaptonémico. La falta de separación de cromosomas homólogos puede
Los cromosomas homólogos permanecen unidos hasta el ocurrir por una falla en la disposición de los cromosomas en
comienzo de la anafase I por intermedio de los quiasmas, a el plano ecuatorial o una falla en el control de la unión de los
partir de allí se separan porque comienza la migración de cinetocoros a las fibras del huso. La no disyunción en AI ori-
los cromosomas hacia polos opuestos. ginará un 50% de gametas n+1 y otro 50% de gametas n-1.
El APC durante la AI solo rompe las uniones existentes entre La correcta unión de los cinetocoros al huso depende de
homólogos. Las cromátides hermanas permanecen unidas una correcta disposición del bivalente en el plano ecuato-
por un complejo de cinco cohesinas (Fig. 7). rial. Es decir que dicha unión sucede siempre y cuando las
Las no disyunciones meióticas pueden ocurrir en Anafase I cromátides hermanas se encuentren uno al lado de la otra
o en Anafase II. y los de cromosomas homólogos enfrentados (Fig. 7). Si la

Figura 7. Durante la meiosis I puede observarse las cohesinas y los cinetocoros dispuestos uno al lado del otro. En meiosis II puede apreciarse que los
Figura cinetocoros
7. Durante la meiosis
están orientados I puede
hacia polos observarse
opuestos. (Adaptado de Holt,las
J. andcohesinas
Keith, J, 2009) y los
cinetocoros dispuestos uno al lado del otro. En meiosis II puede apreciarse que 129
los cinetocoros están orientados hacia polos opuestos. (Adaptado de Holt, J.
and Keith, J, 2009)
 Motter, Mariana y Huguet, Miguel

orientación no es la correcta los cromosomas homólogos 4.1 Regulación del ciclo celular
migran al mismo polo.
También puede ocurrir una no disyunción de los cromosomas El control interno del ciclo celular está a cargo de proteínas,
homólogos por una falla en el punto que controla la unión algunas permiten el progreso del ciclo y otras lo frenan. Las
correcta de los husos a los cinetocoros. proteínas que permiten el progreso del ciclo actúan como
Otra causa de no disyunción en anafase I es la ausencia de complejos ciclina-kinasa y los complejos de cada punto de
entrecruzamiento entre los homólogos. En este caso la falta control están formados por diferentes ciclinas y diferentes
de al menos un quiasma por bivalente provocará la migra- kinasas. Las proteínas que frenan el ciclo son principalmente
ción de ambos cromosomas homólogos al mismo polo. Por inhibidoras de los complejos ciclina-kinasa, y deben el nombre
azar podría haber una migración correcta a polos opuestos, a su peso molecular (ej. p21 o p53).
generándose mayoritariamente gametas n+1 y n-1 y ocasio- El control del ciclo celular, ocurre en cuatro puntos: un punto
nalmente algunas gametas n por azar. de restricción y tres puntos de control (Fig. 8).

No disyunción en Anafase II Punto de restricción: Este punto se encuentra próximo al

En este periodo las no disyunciones son provocadas gene- final de G1. Está principalmente controlado por el medio extra-
ralmente por errores en la unión de las fibras del huso a los celular y depende de la presencia de factores de crecimiento,
cinetocoros. Como resultado de una incorrecta separación de mitógenos y todos los nutrientes necesarios para que la célula
cromátides hermanas se formarán: 50% de gametas normales pueda ingresar al ciclo celular. En presencia de mitógenos se
(n) y 50% desbalanceadas (25 % n+1 y 25% n-1) porque la incrementa la concentración de complejo ciclina–kinasa que
no disyunción ocurrirá sólo en uno de los dos meiocitos I. promueve la continuidad hacia S. Contrariamente, si en el
medio extracelular no hay suficientes nutrientes, factores de
crecimiento o mitógenos, la proteína p16 inhibe el complejo
4. Control del Ciclo Celular ciclina-kinasa y la célula no progresa hacia la siguiente etapa.

El ciclo celular comprende una serie de eventos que deben Primer punto de control: se encuentra también en G1,
ocurrir en un orden particular. La iniciación de cada evento inmediatamente después del punto de restricción. En este
o fase del ciclo celular depende de que el evento anterior se punto otro complejo ciclina-kinasa controla las condiciones
haya completado exitosamente. La secuencia correcta de del medio, que la célula haya crecido lo suficiente y que el
eventos es controlada por una serie de mecanismos a los material genético esté intacto. Si estas condiciones no son
cuales la célula se debe someter y superar exitosamente óptimas o si existiera una lesión en el ADN se activa p53 quien
durante cada fase del ciclo celular. Esta regulación se pro- junto con p21 detendrán el ciclo en este punto.
duce a nivel extracelular e intracelular. La existencia de estos Al gen p53 se lo considera un supresor de tumores porque es
mecanismos de control permite que cada fase del ciclo celular capaz de detectar daños en el ADN, activar el proceso de re-
ocurra cuando la célula está preparada para hacerlo. paración del ADN y si los daños son irreparables promueve la

130
 Ciclo Celular y División Celular: Aspectos genéticos

apoptosis celular. La proteína p53 es un factor de trascripción ción de estas separasas esta dada por el Complejo Promotor
para p21, que se encarga de inhibir complejos ciclina-kinasa. de la Anafase (APC). Dicho complejo se encuentra activado
Cuando existe una mutación en el gen p53, las células afec- cuando todos los cinetocoros se hallan unidos a las fibras del
tadas por dicha mutación pierden la capacidad de controlar huso, si esto no sucede la anafase no progresa
y/o reparar los daños en su ADN, así que el ciclo celular no A medida que la anafase transcurre normalmente se inactiva
será detenido. Los daños que portan serán transmitidos por el FPM y puede comenzar la telofase, etapa en la que los
sucesivas divisiones celulares en forma descontrolada acu- cromosomas terminan la migración, se reconstituye la envol-
mulándose hasta culminar en la formación de un tumor. Las tura nuclear y comienza la citocinesis.
mutaciones en p53 se encuentran en aproximadamente el
50% de los procesos carcinogénicos.

Segundo punto de control: Dicho punto de control se en-

cuentra al final de G2 y está a cargo del complejo MPF (Factor
Promotor de la Mitosis), el cual controla principalmente la co-
rrecta y completa replicación del ADN, que este no contenga
errores y que el medio sea el adecuado.
El MPF se encarga de:
• Inducir el ensamble del huso y promover que los cromo-
somas se unan a él.
• Iniciar la condensación del material genético, activando
un grupo de proteínas denominadas condensinas que
fosforilan la histona H1.
• Desensamblar la envoltura nuclear por fosforilación de
las láminas nucleares.
• Reorganizar el aparato de Golgi y el retículo endoplas-
mático.
• En este punto actúa también la p53, la cual detecta alte-
raciones en el ADN y junto con p21 inhiben el MPF. Figura 8. Puntos de control del ciclo celular

Figura 8. Puntos de control del ciclo celular

Tercer punto de control: Durante la metafase todos los cro-
mosomas se ubican en la placa ecuatorial y cada centrómero,
4.2 Ciclo Celular y Oncogenes
a través de los cinetocoros, se une a las fibras del huso. Si no se pierde el control del ciclo celular, las células y teji-
Las cromátides que forman cada cromosoma se encuentran dos mantienen su funcionalidad, forma y crecimiento. Pero
unidas por cohesinas, para que se separen las cohesinas en ciertas ocasiones este mecanismo se altera por causas
deben ser degradadas por las separasas. La señal de activa- genéticas (mutaciones) o epigenéticas.

131
 Motter, Mariana y Huguet, Miguel
Tabla 3. Principales eventos que ocurren en los cuatro puntos de control del
ciclo
Tablacelular
3. Principales eventos que ocurren en los cuatro puntos de control del ciclo celular

Complejo Complejo

activador inhibidor Eventos

En presencia de mitógenos se
transcriben las ciclinas y kinasas
Punto de necesarias para la progresión del
restricción (G1) CDK4/6 ciclo.
p16
ciclina D
Cuando el medio no es favorable se
activa P16 para inhibir al complejo
ciclina kinasa

Síntesis de enzimas necesarias para

entrar en el periodo S.
Primer punto de CDK 2
p53-p21 Si hay daño en el ADN se activa P53
control (Final de ciclina E
G1) y P 21para impedir la progresión del
ciclo

Cuando se ha terminado
exitosamente la replicación del ADN
el complejo MPF se activao y fosforila
las histonas H1, la membrana nuclear,
Segundo punto MPF: CDK1 etc.
p53- p21
de control (G2) ciclina A/B
Si hay daños en el ADN se activa P53
y en consecuencia [Link] la
replicación no se ha completado no se
activa MPF.

Si todos los cromosomas se han

Tercer punto de
APC unido a las fibras del huso se activa el
control (Anafase)
APC y progresa la anafase.

132 4.2 Ciclo Celular y Oncogenes

Si no se pierde el control del ciclo celular, las células y tejidos mantienen su
funcionalidad, forma y crecimiento. Pero en ciertas ocasiones este mecanismo
se altera por causas genéticas (mutaciones) o epigenéticas.
Se han identificado más de 40 genes cuya función está relacionada
 Ciclo Celular y División Celular: Aspectos genéticos

Se han identificado más de 40 genes cuya función está rela- Mecanismos de activación de los proto-oncogenes
cionada directamente con los complejos sistemas de señales Virus: Los retrovirus son virus que se insertan en el genoma
que regulan el crecimiento, la proliferación y la división celular. y pueden causar la activación de un proto-oncogen mediante
Estos genes reciben el nombre de proto-oncogenes, debido los siguientes eventos:
de proto-oncogenes,
a que bajo ciertas debido a que bajo
condiciones, ciertas
pueden condiciones,
funcionar comopueden
onco- funcionar
• Transducción retroviral: un retrovirus se inserta cerca del
comogenes,
oncogenes, es decir,
es decir, comocomo secuencias
secuencias de ADNde ADN que dirigen
que dirigen mecanismos proto-oncogen, de modo se transcriben en forma conjunta
meca-
que llevan a la formación de una neoplasia.
nismos que llevan a la formación de una neoplasia (Tabla 4). la secuencia viral y la del proto-oncogen. El proto-oncogén
Para convertirse en oncogenes, los proto-oncogenes deben ser “activados”, es
Para convertirse en
decir deben ser [Link], los proto-oncogenes deben al ser transcripto con el genoma viral, pasa a formar parte
ser “activados”, es decir deben ser modificados.
Los agentes responsables de este cambio pueden ser: de él y cuando es infectada otra célula el v-oncogen (v
 Los agentes
virus responsables de este cambio pueden ser:
oncogénicos de viral) actúa como un oncogen activado.
 • mutaciones
virus oncogénicos
espontáneas • Inserción en promotores o enhancers: La célula es in-
 • perdida
mutaciones espontáneas
de la regulación fectada por un virus que se inserta en el promotor de un
 • carcinógenos químicos
perdida de la regulación proto-oncogen o en un enhancer del mismo, pasando a
 • radiaciones
carcinógenos químicos sobre-expresarse por acción del promotor viral.
• radiaciones
Mutaciones espontáneas: se han descubierto mutaciones
Tabla 4. Algunos oncogenes conocidos y neoplasias asociadas
Tabla 4. Algunos oncogenes conocidos y neoplasias asociadas puntuales en proto-oncogenes que los transforman en onco-
genes, por ejemplo: el H-Ras donde una mutación puntual
Oncogen Neoplasia de G por T cambia el aminoácido Glicina por Valina en la
posición 12 del polipéptido. Esta mutación es frecuente en
EGFR Carcinoma espinocelular distintos tipos de cáncer en diferentes especies.
También es posible que las mutaciones espontáneas se pre-
H-RAS Cáncer de colon, pulmón y páncreas senten en proteínas antiapoptóticas o supresoras de tumores
Leucemia mieloide aguda, cáncer de tiroides,
como p53. Por ejemplo, el Osteosarcoma apendicular es
K-RAS uno de los tumores más agresivos encontrados en el perro
melanoma
y representan el 80% de los canceres de huesos. Johnson y
L-MYC Cáncer de pulmón col en 1998 encontraron que distintas mutaciones de punto,
tanto sustituciones de sentido erróneo como sin sentido,
NEU Neuroblastoma, cáncer de mama en los exones 6, 7 y 8 del gen que codifica la p53 son res-
ponsables de la desregulación de los osteocitos y posterior
N-MYC Neuroblastoma
formación del sarcoma.
RET Cáncer de tiroides
fic c Aumento en la expresión de algunos proto-
SRC Cáncer de colon oncogenes. La proteína myc actúa normalmente en el núcleo
como señal de proliferación, ante la presencia de factores

133
Mecanismos de activación de los proto-oncogenes
Virus: Los retrovirus son virus que se insertan en el genoma y pueden causar
la activación de un proto-oncogen mediante los siguientes eventos:
 Motter, Mariana y Huguet, Miguel

de crecimiento aumenta su expresión, mutaciones en el gen Hirose Y, Suzuki R, Ohba T, Hinohara Y, Matsuhara H, et al. Chiasmata Promote Monopolar
Attachment of Sister Chromatids and Their Co-Segregation toward the Proper Pole during
myc provocan la sobre expresión del mismo provocando una
Meiosis I. 2011. PLoS Genet 7(3).
proliferación descontrolada (en el 40% de los neuroblastomas Holland, Andrew, and Cleveland, Don. E ploring aneuploidy: the significance of chromosomal
en niños se observa la amplificación de c-myc) imbalance. 2012. EMBO Report Review. published on line.
Johnson, A.S., Couto. C.G., Weghorst, C.M. Mutation of the p53 tumor suppressor gene
in spontaneously occurring osteosarcomas of the dog. Carcinogenesis. 1998. vol.19
Reordenamiento cromosómico: Una translocación es un (1) pp.213–217.
evento en el cual un segmento de un cromosoma cambia Li Yuan, Jian-Guo Liu, Jian Zhao,Eva Brundell, Bertil Daneholt, and Christer Hoog. The Murine
de lugar para localizarse en otro cromosoma, este evento SCP3 Gene Is Required for Synaptonemal Complex Assembly, Chromosome Synapsis,
and Male Fertility Molecular. 2000. Cell, Vol. 5, 73–83.
obviamente puede involucrar genes. Por ejemplo, en el lin-
foma de Burkitt el gen c-myc localizado en el cromosoma 8,
se transloca al cromosoma 14, cerca del locus que codifica
para la cadena pesada de inmunoglobulina. Este hecho
ocasiona la expresión excesiva del gen c-myc convirtiéndolo
en un oncogen.

Agentes físico-químicos: Muchos agentes físicos y quími-

cos actúan directamente sobre el ADN, dañándolo y ocasio-
nando la expresión de oncogenes.

Bibliografía
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and checkpoints. 2005. EMBO Rep. 6(9):821-825.
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elements and recombination during yeast meiosis. 1999. Cell. vol 98 (91-103).

134
Genética Mendeliana

CAPÍTULO 6

Genética Mendeliana

135
 Genética Mendeliana

Genética Mendeliana
Martínez, Marcela y Pinto, Gabriel

Introducción
La rama de la Genética que estudia la herencia de caracteres que en su época no se sabía que estas unidades eran los
simples, codificados por un único gen, es conocida como Ge- cromosomas. Los postulados de Mendel, publicados como un
nética Mendeliana. Su importancia radica en que numerosos conjunto de observaciones en 1865, recién fueron interpretados
caracteres de interés en medicina veterinaria (ej. color o largo en términos de la moderna teoría de la herencia por el grupo
del pelaje, defectos genéticos, etc.) son interpretados por las de Morgan, a principios del siglo XX. Aunque Morgan realizó
leyes formuladas inicialmente por Mendel. todos sus ensayos con una variedad de la mosca Drosophila,
Gregorio Mendel (1822-1884) fue un monje, que realizó es- una especie muy diferente a la empleada por Mendel, pudo
tudios botánicos trabajando con una especie de arvejilla de explicar la herencia de diversos caracteres observados en ella
jardín (Pisum sativum). Mendel efectuó numerosas cruzas a partir de los enunciados realizados por Mendel. Esto extendió
programadas, registrando el resultado cuantitativo de las cru- la validez de los postulados mendelianos, convirtiéndolos en
zas en términos de la aparición o desaparición de uno o varios leyes que hoy describimos como Genética Mendeliana.
caracteres morfológicos (ej. color y/o aspecto de las semillas,
color y/o posición de las ores en el tallo, etc.). Interpretó, en Glosario
términos de “leyes cuantitativas”, siete caracteres, aunque en la Alelo: Variante de un gen (ej. A y a). En especies diploides, tiene
práctica, estudió un número mayor, que no pudieron ser expli- origen materno o paterno.
cados por estas leyes. La generalización de sus observaciones, Locus: El espacio físico que ocupa el alelo de un gen en el cro-
mosoma.
en términos de leyes o postulados, fue posible gracias a varios Loci: Plural de Locus.
factores: en primer término trabajó con variantes puras de se- Genotipo: Complemento de alelos paterno y materno de un gen,
millas para cada carácter en estudio, la progenie resultante de cuya expresión es el fenotipo.
las cruzas fue muy abundante, lo que validó estadísticamente Fenotipo: La expresión física observable de un carácter (ej. color,
textura, etc.). Es determinado por el genotipo del individuo, en
sus observaciones y realizó una recopilación meticulosa de los función del efecto de un determinado ambiente.
resultados de estas cruzas, sin descartar ninguna observación. Homocigota: Genotipo, en el que los alelos paterno y materno son
Mendel explicó la aparición o desaparición de un carácter en idénticos (ej. AA o aa).
términos de factores unitarios (unidades de herencia), que Heterocigota o Portador: Genotipo, en el que los alelos paterno
eran transmitidos durante las cruzas. Es importante recordar y materno son diferentes (ej. Aa).

137
 Martínez, Marcela y Pinto, Gabriel

1. Leyes de Mendel las ores púrpuras fueron removidas y el polen procedente

de las ores blancas fue incorporado en ellas de forma
artificial. El resultado de este cruzamiento fue una descen-
1.1 Primera Ley de Mendel o Principio de la dencia (F1 o primera filial) de plantas con ores púrpuras,
Uniformidad desapareciendo de la filial las plantas de ores blancas.
Los términos empleados en este capítulo aparecen detallados Es decir que toda la F1 presentó un fenotipo uniforme e
en el Glosario. idéntico al de uno de sus progenitores. Mendel observó
Mendel siguió los fenotipos contrastantes de 7 caracteres que el mismo resultado se obtenía en una cruza recíproca
(Tabla 1), realizando cruzas de líneas puras (homocigotas) de en la que el polen de las ores púrpuras se usaba para
Pisum sativum para cada una de los caracteres bajo estudio.
1. Leyes de Mendel fecundar a las plantas de ores blancas.
1.1 Primera Ley de Mendel o Principio de la Uniformidad
Resumiendo, el postulado que describe la 1º ley es:
Los términos empleados en este capítulo aparecen detallados en el Glosario.
Mendel siguió los fenotipos contrastantes de 7 caracteres (Tabla 1), realizando cruzas de
Tabla
líneas 1. Resultados
puras para
(homocigotas) de las
Pisum filiales
sativum F1cada
para y F2
unade
de las cruzas efectuados
los caracteres bajo estudio.

por Mendel, estudiando 7 caracteres de fenotipos contrastantes. Cuando se aparean dos líneas puras (homocigo-
Tabla 1. Resultados para las filiales F1 y F2 de las cruzas efectuados por Mendel, estudiando
7 caracteres de fenotipos contrastantes. tas)
toda la progenie presentará el mis-
Fenotipos
Ensayados
Resultados de F1 Resultados de F2
Proporción
F2
mo fenotipo, independientemente de la dirección
Semilla
del cruzamiento y este fenotipo coincidirá con el
Lisa/Rugosa Todas lisas 5474 lisas
Forma
1850 rugosas
2,96:1 manifestado por una de las líneas parentales. Al
Amarilla/Verde Todas amarillas 6022 amarillas
carácter expresado se lo denomina Dominante y al
Color 3,01:1
2001 verdes enmascarado, carácter Recesivo.
Vainas
Lisa/Estriada Todas Lisas 822 lisas
2,95:1
299 estriadas
Forma

Color
Verde/Amarilla Todas Verdes 428 verdes
2,82:1
Para el cruzamiento antes descripto, el carácter Dominan-
152 amarillas
Flores te es el color púrpura en tanto que el Recesivo es el color
705 púrpuras 3,15:1
Color
Púrpura/Blanca Todas Púrpura
224 blancas
blanco, que resultó enmascarado durante el cruzamiento.
Posición 651 axiales 3,14:1
En el caso de un alelo que enmascara por completo a otro
Axial/Terminal Todas Axiales
en el Tallo 207 terminales alelo, se habla de Dominancia Completa, de ésta forma
Altura del
Tallo
Alto/Enano Todos altos
787 altos
277 enanos
2,84:1 el alelo recesivo sólo puede expresarse fenotípicamente
cuando está en homocigosis, de lo contrario si estuviera
En la Figura 1 se observa el resultado de uno de estos cruzamientos, consistente en el
apareamiento de plantas de flores púrpuras con plantas de flores blancas. A fin de dirigir los
en estado heterocigota quedaría oculto por el alelo domi-
cruzamientos y evitar la autopolinización, las anteras de las flores púrpuras fueron removidas
y el polen procedente de las flores blancas fue incorporado en ellas de forma artificial. El
nante (ver cuadro con la explicación molecular de estas
En la Figura 1 se observa el resultado de uno de estos cru-
resultado de este cruzamiento fue una descendencia (F1 o primera filial) de plantas con observaciones).
flores púrpuras, desapareciendo de la filial las plantas de flores blancas. Es decir que toda la
zamientos, consistente en el apareamiento de plantas de
F1 presentó un fenotipo uniforme e idéntico al de uno de sus progenitores. Mendel Aunque Mendel no pudo dar una explicación en términos
observó que el mismo resultado se obtenía en una cruza recíproca en la que el polen de las
ores púrpuras con plantas de ores blancas. A fin de dirigir
flores púrpuras se usaba para fecundar a las plantas de flores blancas. de genes, hoy sabemos que el carácter observado en
Resumiendo, el postulado que describe la 1º ley es:
los cruzamientos y evitar la autopolinización, las anteras de este cruzamiento es codificado por los alelos P y p de un
Cuando se aparean dos líneas puras omocigotas , que difieren en una determinada
138
característica,
toda la progenie (F1) o filial 1, presentar el mismo fenotipo,
independientemente de la dirección del cruzamiento y este fenotipo coincidir con el
manifestado por una de las líneas parentales. Al carácter e presado se lo denomina
Dominante y al enmascarado, carácter Recesivo

Para el cruzamiento antes descripto, el carácter Dominante es el color púrpura en tanto que
el Recesivo es el color blanco, que resultó enmascarado durante el cruzamiento.
 está en homocigosis, de lo contrario si estuviera en estado heterocigota quedaría oculto por
el alelo dominante (ver cuadro con la explicación molecular de estas observaciones).
Aunque Mendel no pudo dar una explicación en términos de genes, hoy sabemos que el
carácter observado en este cruzamiento es codificado por los alelos P y p de un mismo gen.
Genética
Siguiendo con la Figura 1, las líneas Mendeliana
puras de fenotipos púrpura y blanco, se corresponden a
la expresión de los genotipos PP y pp, respectivamente, en tanto que toda la filial recibirá
mismo gen. Siguiendo conun la Figura
alelo 1, las
de cada líneas
línea purassiendo
parental, de siendo uniformemente
uniformemente heterocigota heterocigota
Pp. TratándosePp.
de Tratándose
un de
fenotipos púrpura y blanco, se corresponden
carácter con Dominanciaa completa,
la expre- la filial un expresa
carácterelcon Dominancia
fenotipo completa,al laalelo
correspondiente filial expresa el
sión de los genotipos PPparental
y pp, respectivamente,
P, siendo todas las en tanto
flores pú[Link] correspondiente al alelo parental P, siendo todas
que toda la filial recibirá un alelo de cada línea parental, las flores púrpuras.

Remoción de Transferencia
anteras de polén

Generación Parental (P)

PP pp

Filial 1 o F1 Pp

Genotipo de las Líneas Parentales: PP x pp

Gametas de cada progenitor P p

Genotipo de Filial 1 o F1: Pp (100% heterocigotas)

Proporción Genotípica (PG): 100% Pp (Genotipo heterocigota)

Proporción Fenotípica (PF): 100% P_ (Flores Púrpuras)

Figura 1. Cruzamiento diseñado por 1.

Figura Mendel, con 2 líneas
Cruzamiento parentales
diseñado porpuras distinguibles
Mendel, por el color
con 2 líneas de sus puras
parentales ores. La F1 muestra la
distinguibles uniformidad del
por
el color de susfenotipo,
flores. de
La acuerdo a lo predicho
F1 muestra por la 1º ley
la uniformidad defenotipo,
del Mendel. de acuerdo a lo predicho
por la 1º ley de Mendel.
139
 expresa en la vaina externa de la raíz del pelo, en la base del folículo piloso. En algunas
razas caninas (ej. Collie, Border Collie o Dachshund) una sustitución de sentido erróneo en el
exón 1 del gen FGF5 (GT) provoca el cambio de Cisteína por Fenilalanina en la proteína;
este cambio produce una fase de crecimiento más larga, lo que resulta en pelo largo. Los
perros con pelo largo tienen genotipo TT (ll) y los que tienen pelo corto pueden ser GG o GT
(LL o Ll).
El apareamiento de perros de pelo corto heterocigotas entre sí generará teóricamente un 25
% de descendientes de pelo largo, como se observa en la figura.
Martínez, Marcela y Pinto, Gabriel

Ejemplos de Dominancia Completa en Animales paso de la ruta biosintética de los pigmentos eumelánicos
(negro, marrón) y feomelánicos (rojo, amarillo) (ver vía
Como vimos previamente, en la dominancia completa metabólica).
un alelo domina o enmascara completamente a otro. La mutación en TYR responsable del albinismo en las
Un ejemplo de este mecanismo es el rasgo largo del distintas especies no es la misma. Por ejemplo, en felinos
pelo en caninos. Esta característica está bajo el control el albinismo se produce por una deleción de 2 pb que
del Factor 5 de Crecimiento de los Fibroblastos (FGF5, provoca un corrimiento del marco de lectura y un codón
Fibroblast Growth Factor 5) y se han encontrado en este de stop prematuro en cambio en bovinos la adición de
gen diferentes mutaciones asociadas con pelo largo en una citosina
Otro ejemplo determina
de Dominancia también
completa la aparición
está representado porde un codón
algunos tipos de albinismo, un
ratones, gatos, perros y también en cabras y conejos. rasgo autosómico recesivo, resultante de una mutación en el gen que codifica la enzima
de stop prematuro.
tirosinasa (gen TYR), que cataliza el primer paso de la ruta biosintética de los pigmentos
FGF5 se expresa en la vaina externa de la raíz del pelo, Los individuos
eumelánicos homocigotas
(negro, marrón) dominantes
y feomelánicos y los(ver
(rojo, amarillo) heterocigo-
vía metabólica).
en la base del folículo piloso. En algunas razas caninas La mutación
tas en TYR pigmentación,
tienen responsable del albinismo
porque en lascopia
una distintas especies del
funcional no es la misma. Por
(ej. Collie, Border Collie o Dachshund) una sustitución ejemplo, en felinos el albinismo se produce por una deleción de 2 pb que provoca un
Ejemplos de Dominancia Completa en Animales gen del
corrimiento es marco
suficiente parayproducir
de lectura un codón melanina en cambio
de stop prematuro; los en bovinos la
en cambio
Como vimos de previamente,
sentido erróneo en la en el exón completa
dominancia 1 del gen un FGF5 (G→T)o enmascara
alelo domina adición homocigotas
de una citosina determina
recesivos, también
al no la aparición
tener ningúnde un
alelocodón de stop prematuro.
funcional,
completamente a [Link]
provoca ejemplo de
deeste mecanismo
Cisteína poresFenilalanina
el rasgo largo del
en pelo
la en caninos.
Los individuos homocigotas dominantes y los heterocigotas tienen pigmentación, porque una
Esta característica está bajo el control del Factor 5 de Crecimiento de los Fibroblastos (FGF5, no producen
copia funcional del gentirosinasa y como
es suficiente para consecuencia
producir melanina; la síntesis
en cambiode los homocigotas
Fibroblast proteína;
Growth Factor este5)cambio
y se hanproduce una fase
encontrado de gen
en este crecimiento recesivos,
diferentes mutaciones al no tener
melanina ningún alelo
se bloquea, porfuncional,
lo que losno producen
individuos tirosinasa y como consecuencia la
son albinos.
más
asociadas con larga,
pelo largo loenque resulta
ratones, gatos,enperros
peloylargo.
también Los perrosy con
en cabras conejos. FGF5síntesis
se de melanina se bloquea, por lo que los individuos son albinos.
expresa en la vaina externa de la raíz del pelo, en la base del folículo piloso. En algunas
pelo largo tienen genotipo TT (ll) y los que tienen pelo
razas caninas (ej. Collie, Border Collie o Dachshund) una sustitución de sentido erróneo en el Resumen de la ruta biosintética de los pigmentos en
exón 1 del corto pueden
gen FGF5 (GT)ser GG oel GT
provoca (LLde
cambio o Ll).
Cisteína por Fenilalanina en la proteína; Resumen de la ruta biosintética de los pigmentos en mamíferos superiores.
este cambio produce una fase de crecimiento más larga, lo que resulta en pelo largo. Los
mamíferos superiores.
El apareamiento de perros de pelo corto heterocigotas
perros con pelo largo tienen genotipo TT (ll) y los que tienen pelo corto pueden ser GG o GT tirosina
(LL o Ll). entre sí generará teóricamente un 25 % de descendientes
El apareamiento
de pelode perros
largo,decomo
pelo corto heterocigotas
se observa en laentre sí generará teóricamente un 25
figura. tirosinasa
% de descendientes de pelo largo, como se observa en la figura.

Dopacromo dopaquinona
tautomerasa + Cisteina

dopacromo cisteinildopa

Eumelanina Feomelanina

Otro
1.2 Segunda Ley de Mendel o Principio de
Otro ejemplo de ejemplo
Dominancia decompleta
Dominancia completa está
está representado representado
por algunos tipos de albinismo, un
por algunos
rasgo autosómico tipos
recesivo, de albinismo,
resultante un rasgo
de una mutación en autosómico re- la enzima
el gen que codifica Segregación
tirosinasa (gen TYR), que cataliza el primer paso de la ruta biosintética de los pigmentos
cesivo, resultante de una mutación en el gen que codifica
eumelánicos (negro, marrón) y feomelánicos (rojo, amarillo) (ver vía metabólica). Continuando con sus experimentos, Mendel realizó luego
La mutación laenenzima tirosinasa
TYR responsable del (gen TYR),
albinismo que
en las cataliza
distintas el primer
especies no es la misma. Por
cruzamientos entre individuos de la F1, analizando que
ejemplo, en felinos el albinismo se produce por una deleción de 2 pb que provoca un
corrimiento del marco de lectura y un codón de stop prematuro; en cambio en bovinos la
140
adición de una citosina determina también la aparición de un codón de stop prematuro.
Los individuos homocigotas dominantes y los heterocigotas tienen pigmentación, porque una
copia funcional del gen es suficiente para producir melanina; en cambio los homocigotas
recesivos, al no tener ningún alelo funcional, no producen tirosinasa y como consecuencia la
síntesis de melanina se bloquea, por lo que los individuos son albinos.
 Genética Mendeliana

ocurría con el fenotipo que había desaparecido en la 1º filial. Los individuos homocigotas (PP) son fenotípicamente indis-
Como se observa en la Figura 2, en la 2º filial o F2, observó tinguibles de los individuos heterocigotas (Pp) debido a la do-
la reaparición de este fenotipo en una proporción, que se minancia completa del alelo P sobre el recesivo p, de allí que
describe en la siguiente forma: de la progenie exprese el fenotipo dominante y el fenotipo
recesivo sólo se observe en los individuos de genotipo pp.
Cuando se aparean individuos de la F1 entre sí, se El nombre de principio de segregación proviene de que las
observa en la F2, una proporción fenotípica de 3 a gametas al formarse portan el alelo paterno o materno, se-
1 del carácter Dominante respecto del Recesivo. gregados durante la anafase I o la anafase II de la meiosis.
Esto se debe a que los alelos se segregan uno de
1.2 Segundaotro
Ley de Mendel o Principio de Segregación
Continuandoheterocigota formaMendel
con sus experimentos, gametas.
realizó luego cruzamientos entre individuos de la ¿Cuál es la explicación molecular detrás de las
F1, analizando que ocurría con el fenotipo que había desaparecido en la 1º filial. Como se
observa en la Figura 2, en la 2º filial o F2, observó la reaparición de este fenotipo en una
leyes de Mendel?
Esteque
proporción, postulado
se describe se conoce
en la siguientecomo
forma: 2º ley de Mendel o Principio
Detrás de la 1º y 2º ley de Mendel existe una explicación
de Segregación, e implica que en promedio, 3 de cada 4 indi- molecular. Ejemplo de lo anterior es el fenotipo liso versus
Cuandoviduos en laindividuos
se aparean descendencia
de la F1 presentarán el fenotipo
entre sí, se observa Dominante
en la F2, una proporción
fenotípica de 3 a 1 del carácter Dominante respecto del Recesivo. Esto se debe a que rugoso observado en las semillas de Pisum sativum. El
y else
los alelos restante
segreganexpresará
uno de otro, el sin
fenotipo Recesivo.
sufrir modificación Es cuando
alguna importante
un individuo fenotipo liso es producido por el alelo salvaje (wild type)
destacar
heterocigota forma que, estas proporciones se cumplen en progenies
gametas.
de un gen, que codifica para una enzima ramificadora del
formadas por gran número de individuos, como se observa almidón. El fenotipo rugoso aparece por una mutación
en la F2 de los cruzamientos efectuados por Mendel (Tabla en el gen, que produce una variante no funcional de la
Este postulado se conoce como 2º ley de Mendel o Principio de Segregación, e implica que en
1). 3Yderaramente
promedio, se puede
cada 4 individuos observarpresentarán
en la descendencia en veterinaria,
el fenotipodado el y el
Dominante enzima. El almidón se almacena sin ramificaciones y el
número acotado de crías resultantes de un mismo aparea- se
restante expresará el fenotipo Recesivo. Es importante destacar que, estas proporciones
exceso de sacarosa resultante produce un aumento en
cumplen en progenies formadas por gran número de individuos, como se observa en la F2 de
miento. Por
los cruzamientos lo tanto,
efectuados por en este(Tabla
Mendel tipo 1).
de Yapareamientos,
raramente se puede resulta
observar en la presión osmótica, que deriva en la pérdida de agua
veterinaria,
másdado el número
preciso deciracotado
que deexiste
crías resultantes de un mismo del
una probabilidad apareamiento.
75% dePor lo
tanto, en este tipo de apareamientos, resulta más preciso decir que existe una probabilidad
y en la aparición del aspecto rugoso de la semilla. Una
del 75%observar
de observarel el
fenotipo dominante
fenotipo dominante respecto
respecto a la probabilidad
a la probabilidad del 25% dedelobservar planta heterocigota para el alelo normal, exhibirá semillas
individuos
25% de de
fenotipo [Link] de fenotipo recesivo.
observar lisas, ya que existe al menos 1 alelo wild type del gen,
capaz de producir en cada célula suficiente enzima para
F1 x F1 Pp x Pp
generar el fenotipo liso. Sólo se manifestará el carácter
rugoso en las semillas que sean homocigotas para la
Gametas ½ P ½ p ½ P ½ p mutación ya que entonces no habrá enzima con capaci-
dad [Link] fenotipo dominante o recesivo puede
ser así interpretado en términos de la funcionalidad de
Proporción Genotípica: ¼ PP ( ¼+¼) = ½ Pp ¼ pp las proteínas generadas por los alelos de un gen. Todos
los ejemplos descriptos en este capítulo o abarcados por
Proporción Fenotípica: 3/4 Flores Púrpura (P -) : 1/4 Flores Blancas (pp)
las leyes de Mendel poseen explicaciones moleculares
Figura 2. Cruzamiento de individuos de la filial F1. En F2, se observa la reaparición del equivalentes, aunque no todos hayan sido plenamente
fenotipoFigura [Link]
recesivo Cruzamiento de de
una proporción individuos
1:3. de la filial F1. En F2, se observa la
reaparición del fenotipo recesivo en una proporción de 1:3. dilucidados.
Los individuos homocigotas (PP) son fenotípicamente indistinguibles de los individuos
heterocigotas (Pp) debido a la dominancia completa del alelo P sobre el recesivo p, de allí 141
que ¾ de la progenie exprese el fenotipo dominante y el fenotipo recesivo sólo se observe en
los individuos de genotipo pp.
El nombre de principio de segregación proviene de que las gametas al formarse portan el
alelo paterno o materno, segregados durante la anafase I o la anafase II de la meiosis.
 Pp Ppx ppx pp

Gametas: Gametas:
½ P ½ ½ p P ½ p1 p 1 p

PG de la F2:
PG de la F2: 1/2 Pp 1/2
: Pp 1/2 pp
: 1/2 pp
PF de la F2:
PF de la F2: 50% P- 50%: P- 50% pp
: 50% pp

Martínez, Marcela y Pinto,

Retrocruza 2)Gabriel
Retrocruza
F1: 2) F1:
Pp x Pp PP x PP
1.2.1 Retrocruza cuyo genotipo se quiere testar, y que manifiesta el fenotipo
Gametas: p½ P ½de 1p genotipo 1 P
dominante,
Gametas: con ½ unP ½ individuo P recesivo (pp). Como
La retrocruza es el apareamiento de un individuo de la F1
1.2.1 Retrocruza se
PG de la F2: PG observa
de la F2: en la Fig.
1/2 PP 4a, si
1/2
: el
PP individuo
1/2 Pp : 1/2tiene
Pp un genotipo PP,
(heterocigota)
La retrocruzaconescualquiera de susdeprogenitores
el apareamiento un individuo(Fig.
de la3).
F1PF(heterocigota) conel cualquiera deP-recesivo
laPFcruza
de la F2: de la F2:
con homocigota 100% 100% P-
pp, produce una progenie
Cuando la retrocruza(Fig.
sus progenitores se realiza
3). con el progenitor homocigota
Cuando la retrocruza se realizadecon
100% heterocigota Pp, que exhibirá el fenotipo dominante, de
el progenitor homocigota recesivo se denomina
recesivo se denomina Cruzamiento Prueba. Figura 3. a Retrocruza entre porindividuos de lade
filial F1una
conde cada
Cruzamiento de Prueba. Figura [Link]
Retrocruza lo predicho
entre individuos de lala 1ºF1
filial leycon Mendel.
cada Si una
las deparentales.
la cruza
líneas las líneas
se parentales.
produce entre un individuo heterocigota con el homocigota re-
1.2.2 Cruzamiento
1.2.2 Cruzamiento de prueba de prueba
Generación Parental PP x pp cesivo (Fig. 4b),en enlapromedio, la mitad de la progenie tendrá el
Como se observa enobserva
Como se la Figura 2, ¾Figura
de los 2, individuos
¾ de los individuos
generados generados
en F2 poseen en F2el poseen
fenotipoel fenotipo
fenotipo
Dominante dominante
(P-), y
resultando la otra
los mitad,
genotipos el
Dominante (P-), resultando los genotipos PP indistinguibles de los Pp. Mendel ideófenotipo
PP recesivo.
indistinguibles deResulta
los Pp. Mendel
un ideó un
Gametas: 1 P 1 p procedimiento, que se aún hoy separa emplea, para entre
distinguir entreEl ambos. El cruzamiento de
claro
procedimiento,
prueba,
que
que aúnel éxito
hoy de este
emplea, procedimiento
distinguir dependerá
ambos. de que
cruzamiento de
prueba, consiste enconsiste
la cruzaen dellaindividuo,
cruza del cuyo individuo,
genotipo cuyosegenotipo se quiere
quiere testar, y quetestar, y que manifiesta
manifiesta el el
PG de la F1: 100% Pp lafenotipo
progenie
fenotipo dominante, con sea
dominante, muycon un
un individuo númerosa.
individuo
de genotipo deDe otra(pp).
genotipo
recesivo manera,
recesivo
Como la
se ausencia
(pp). Como se
observa enobserva
la Fig. en la Fig.
PF de la F1: 100% P- 4a, fenotipo
del
4a, si el individuosi eltiene
individuo tiene unPP,
unrecesivo
genotipo genotipo
en lacruza
la PP,
progenie,
con la el
cruza con el ser
puede
homocigota homocigota recesivo
interpretada
recesivo pp, produce pp, produce una
una
progenie 100%progenie 100% heterocigota
heterocigota Pp, que exhibirá Pp, queelexhibirá fenotipoel dominante,
fenotipo dominante,
de acuerdo dea acuerdo
lo a lo
como
predicho por predicho prueba
la 1º ley porde deleyque
la Mendel.
1º de se tratasede
Si Mendel.
la cruza Si
un genotipo
laproduce
cruza se produce
entre
PP,
entrecuando
un individuo
en heterocigota
unheterocigota
individuo con con
Retrocruza 1) F1: realidad
el homocigotael homocigota podría
recesivo (Fig. ser
4b),Pp
recesivo en ypromedio,
(Fig. no
4b), haber lagenerado
en promedio,mitad de la lagametas
mitad portando
de latendrá
progenie progenie tendrá el fenotipo
el fenotipo
Pp x pp dominante dominante
y la otra ymitad, la otra el mitad,
fenotipoel recesivo.
fenotipo [Link] claro
el éxito que de el este
éxito de este
elprocedimiento
procedimiento
alelo recesivo.
dependerá dependerá
En
de que lade
la mayoríaque lade
progenie
lasmuy
progenie
sea
especies
sea muy
númerosa.
animales,
númerosa. cuya
De otra manera,De otra lamanera, la
Gametas: ½ P ½ p 1 p progenie
ausencia del ausencia
fenotipo deles reducida,
fenotipo
recesivo enrecesivo seen
la progenie, trata
la puedede compensar
progenie, este
comoproblema
puede ser interpretada
ser interpretada prueba comode prueba
que se de que se
trata de un trata de unPP,
genotipo genotipo
cuando PP, en cuando
realidadenpodría realidad ser podría
Pp y no serhaber
Pp y generado
no haber gametas
generado gametas
realizando varios cruzamientos de prueba.
portando el alelo recesivo. En la mayoría de las especies animales, cuya progenie es
portando el alelo recesivo. En la mayoría de las especies animales, cuya progenie es
PG de la F2: 1/2 Pp : 1/2 pp reducida,
reducida, se trata dese trata de compensar
compensar esterealizando
este problema problema realizando varios cruzamientos
varios cruzamientos de [Link] prueba.
PF de la F2: 50% P- : 50% pp
a) a) b) b)
PP x PPpp x pp Pp x Pp x
pp pp

Retrocruza 2) F1:
Pp x PP
P p p p
½ P ½½ p ½
Gametas: ½ P ½ p 1 P Gametas Gametas
P P
p p

PG de la F2: 1/2 PP : 1/2 Pp

PF de la F2: 100% P-
P.G.: P.G.: 100% Pp 100% Pp 50% Pp 50%
50% Pp
pp 50% pp
Figura 3. Retrocruza entre individuos de la filial F1 con cada una de las
líneas parentales. P.F.: P.F.: 100 P- 100 P- 50% P- 50%
50% P-
pp 50% pp
Figura 3. Retrocruza entre individuos de la filial F1 con cada una de las líneas parentales.

1.2.2 Cruzamiento de prueba

1.2.2 Cruzamiento de prueba Figura 4. a) Cruzamiento entre un individuo en prueba homocigota
Como se observa
Como en la
se observa enFigura 2, 2,de¾los
la Figura deindividuos generados endominante
genera-
los individuos F2 poseen conel
unfenotipo
homocigota recesivo. b) Cruzamiento entre un
dos en F2 poseen el fenotipo Dominante (P-), resultando los
Dominante (P-), resultando los genotipos PP indistinguibles de individuo
los Pp. en prueba
Mendel heterocigota
ideó un (con fenotipo Dominante) con el
procedimiento, que aún dehoylossePp.
emplea, individuo homocigota recesivo. El análisis fenotípico de la progenie
genotipos PP indistinguibles Mendelpara
ideódistinguir
un proce-entre ambos. Elpermite
cruzamiento de
inferir el genotipo del individuo en prueba.
prueba, consiste en la cruza del individuo, cuyo genotipo se quiere testar, y que manifiesta el
dimiento, que aún hoy se emplea, para distinguir entre ambos.
fenotipo dominante, con un individuo de genotipo recesivo (pp). Como se observa en la Fig.
El cruzamiento de prueba,
4a, si el individuo consiste
tiene un genotipoen PP,
la cruza del con
la cruza individuo,
el homocigota recesivo pp, produce una
142progenie 100% heterocigota Pp, que exhibirá el fenotipo dominante, de acuerdo a lo
predicho por la 1º ley de Mendel. Si la cruza se produce entre un individuo heterocigota con
el homocigota recesivo (Fig. 4b), en promedio, la mitad de la progenie tendrá el fenotipo
dominante y la otra mitad, el fenotipo recesivo. Resulta claro que el éxito de este
procedimiento dependerá de que la progenie sea muy númerosa. De otra manera, la
ausencia del fenotipo recesivo en la progenie, puede ser interpretada como prueba de que se
 recesivos responsables de enfermedades genéticas, cuando no existen test genéticos
disponibles, que permitan identificar los alelos responsables.

1.3 Tercera Ley de Mendel o Principio de la Transmisión Independiente.

La herencia de dos caracteres diferentes en un dihíbrido, puede interpretarse considerando la
transmisión de cada uno de los caracteres monohíbridos por separado. De allí que el
enunciado de la segregación de dos caracteres independientes se conozca como Principio de
Genética Mendeliana
la Trasmisión independiente.
Uno de los dihíbridos analizados por Mendel provino de la cruza de semillas lisas y amarillas
Los cruzamientos de prueba se emplean para detectar Por- por separado.
por semillas Luego
verdes la cruza
y rugosas, siendode F1 xlíneas
ambas F1 (AaBb x AaBb) para los caracteres
puras y homocigotas
tadores de alelos, que por su carácter recesivo, permanecen produce
en estudiouna F2 consistente
(fenotipos de 9 individuos
liso y amarillo dominantes A-B-
sobre (semillas
los fenotipos rugoso y verde,
respectivamente).
enmascarados en el fenotipo de un individuo. Esto puede lisas y amarillas), 3 individuos A-bb (semillas lisas y verdes),
Si los alelos de la cruza se representan como AABB x aabb, del apareamiento resultaron
ocurrir por ejemplo en un criadero de gatos persas, donde 3diheterocigotas
individuos aaB- (semillas
(AaBb) rugosas
en la F1, y amarillas)
cuyo fenotipo y 1 individuo liso y amarillo, de
es homogéneamente
se busca fijar el color chocolate, producto de una mutación acuerdo
aabb a lo previsto
(semillas por lay1º
rugosas ley de Mendel
verdes), es decirpara cada carácter por separado. Luego la
fenotipícamente
cruza de F1 x F1 (AaBb x AaBb) produce una F2 consistente de 9 individuos A-B- (semillas
en el gen TYRP1, relativamente infrecuente en la población. en la proporción 9:3:3:1 (Fig. 5).
lisas y amarillas), 3 individuos A-bb (semillas lisas y verdes), 3 individuos aaB- (semillas
El alelo que codifica para este color, es dominante sobre rugosas y amarillas) y 1 individuo aabb (semillas rugosas y verdes), es decir
otros colores, entre ellos el albino. El alelo albino, resultado Por lo tanto, elenpostulado
fenotipícamente de9:3:3:1
la proporción la 3º ley de5).
(Fig. Mendel indica que:
de una mutación en un gen diferente, produce un fenotipo Por lo tanto, el postulado de la 3º ley de Mendel indica que:
de animales blancos, con extrema sensibilidad a la luz. A fin Los miembros de parejas alélicas distintas (A, a y
de evitarlo, este alelo debe ser detectado en los animales B, b) se transmiten independientemente unos de
Los miembros de pare as al licas distintas (A, a y B, b) se transmiten
portadores, donde puede resultar enmascarado por otro co- otros, cuando un individuo dihíbrido forma sus game-
independientemente unos de otros, cuando un individuo dihíbrido forma sus gametas
lor dominante. Este procedimiento también se emplea para tas observándose
observándose en la F2 unaen la F2 una 3proporción
proporción 9:3:3:1
3 1 de fenotipos distintos
detectar portadores de alelos recesivos responsables de de fenotipos distintos.
enfermedades genéticas, cuando no existen test genéticos
disponibles, que permitan identificar los alelos responsables. a)

1.3 Tercera Ley de Mendel o Principio de la

Transmisión Independiente.
La herencia de dos caracteres diferentes en un dihíbrido,
puede interpretarse considerando la transmisión de cada
uno de los caracteres monohíbridos por separado. De allí
que el enunciado de la segregación de dos caracteres in-
dependientes se conozca como Principio de la Trasmisión
Independiente. Generación Parental (GP) AABB x aabb
Uno de los dihíbridos analizados por Mendel provino de la
Gametas: 100% AB x 100% ab
cruza de semillas lisas y amarillas por semillas verdes y ru-
gosas, siendo ambas líneas puras y homocigotas para los PG de la F1: 100% AaBb
PF de la F1: 100% A-B-
caracteres en estudio (fenotipos liso y amarillo dominantes
sobre los fenotipos rugoso y verde, respectivamente).
Figura 5. a) Cruzamiento de 2 dihíbridos, puros para cada carácter en
Si los alelos de la cruza se representan como AABB x aabb, estudio. La F1, compuesta por heterocigotas para ambos caracteres,
del apareamiento resultaron diheterocigotas (AaBb) en la F1, muestra la uniformidad del fenotipo, de acuerdo a lo predicho por la 1º
cuyo fenotipo es homogéneamente liso y amarillo, de acuer- ley de Mendel.
do a lo previsto por la 1º ley de Mendel para cada carácter

143
 Martínez, Marcela y Pinto, Gabriel

b) lo tanto, como se observa en la Figura 6, los alelos A y B

pueden quedar dispuestos sobre el mismo lado en la placa
ecuatorial, migrando hacia el mismo polo y dando gametas
AB y ab. En tanto que en otra meiosis, puede ser al revés y
quedar dispuestos los cromosomas que portan los alelos A y
b en el mismo lado de la placa, migrando hacia el mismo polo,
estando del otro lado a y B, generando gametas Ab y aB.
Por lo tanto, considerando el total de meiocitos que forma-
rán gametas, probabilísticamente se podrán formar 4 tipos
de gametas (AB, Ab, aB y ab) en una proporción de 1/4 de
cada tipo.

Gametas: 1/4 AB : 1/4 Ab : 1/4 aB : 1/4 ab para ambos progenitores.

PG de la F1: 1/16 AABB : 2/16 AABb : 1/16 AAbb : 2/16 AaBB : 4/16 AaBb : 2/16 Aabb :
1/16 aaBB : 2/16 aaBb : 1/16 aabb.
PF de la F1: 9/16 A-B- : 3/16 A-bb : 3/16 aaB- : 1/16 aabb.

Figura 5. a) Cruzamiento de 2 dihíbridos, puros para cada carácter en estudio. La F1, Figura
Figura 6. 6. Los
Los cromosomas
cromosomas paternos
paternos y maternos
y maternos se distribuyen
se distribuyen al azar sobrealelazar
plano
Figura [Link]
compuesta b) heterocigotas
Cruzamiento deambos
para la F1caracteres,
x F1, Mendel predice
muestra la formación
la uniformidad de de
del fenotipo, ecuatorial de la célula
sobre el plano durante
ecuatorial deMI, generando
la célula variabilidad
durante genética envariabilidad
MI, generando las gametas
acuerdo a lo predicho
16 genotipos por la 1º ley
diferentes, condeproporciones
Mendel. b) Cruzamiento de la de
fenotípicas F1 x9:3:3:1
F1, Mendel predice
en la resultantes.
la formación de 16 genotipos diferentes, con proporciones fenotípicas de 9:3:3:1 en la genética en las gametas resultantes.
progenie resultante. progenie resultante.
Asimismo al aparearse dos individuos entre sí debemos considerar todas las posibilidades de
Esta ley se cumple para caracteres, codificados por genes: Asimismo
fecundación entreal cada
aparearse
una de las dos
gametasindividuos entre síExisten
de ambos individuos. debemos con-
por lo tanto 16
Esta ley se cumple
1. Con Dominancia [Link] caracteres, codificados por genes: siderar todas las posibilidades de fecundación entre cada
posibles combinaciones en éste apareamiento, determinando la presencia de 9 genotipos
una
2. Situados en autosomas, no en los cromosomas sexuales. diferentes.
1. Con Dominancia Completa.
3. Situados en cromosomas distintos. de las gametas de ambos individuos. Existen por lo tanto 16
2. Situados en autosomas, no en los cromosomas sexuales.
Como se observa en la Figura 5b, las gametas producidas por la filial F2 podrán contener posibles combinaciones en éste apareamiento, determinando
1.3.1 Diagrama de Punnet o método del tablero de ajedrez
El diagrama de Punnet permite visualizar todas las posibles combinaciones en genotipo y
3. Situados
todas en cromosomas
las combinaciones distintos.
de los alelos A, a, B y b, explicadas por la Recombinación
la presencia
fenotipo resultantesde
de 9la genotipos
combinación dediferentes.
gametas, en la cruza entre monohíbridos o
Intercrosómica. Es decir que la distribución en la placa ecuatorial durante MI del par
dihíbridos.
cromosómico que porta los alelos A/a es independiente de como se ubica el otro par de En la Figura 7, se observa el diagrama de Punnet para la cruza entre individuos de la filial 1,
Como se observa en la Figura 5b, las gametas producidas
cromosomas con los alelos B/b (coorientación centromérica, al azar). Por lo tanto, como se
observa en la Figura 6, los alelos A y B pueden quedar dispuestos sobre el mismo lado en la
1.3.1 Diagrama de Punnet o método del tablero de
resultantes del apareamiento entre plantas de flores púrpura y plantas de flores blancas.

por la filial F2 podrán contener todas las combinaciones de

placa ecuatorial, migrando hacia el mismo polo y dando gametas AB y ab. En tanto que en ajedrez
otra meiosis, puede ser al revés y quedar dispuestos los cromosomas que portan los alelos A Pp x Pp
los alelos A, a, B y b, explicadas por la Recombinación Inter-
y b en el mismo lado de la placa, migrando hacia el mismo polo, estando del otro lado a y B,
generando gametas Ab y aB. El diagrama de Punnet permite visualizar todas las posibles
crosómica. Es decir que la distribución en la placa ecuatorial Gametas: ½ P, ½ p x ½ P, ½ p
Por lo tanto, considerando el total de meiocitos que formarán gametas, probabilísticamente
combinaciones
PG: en genotipo y
1/4 PP 1/2 fenotipo
Pp 1/4 pp resultantes de la
durante MI del par cromosómico que porta los alelos A/a es
se podrán formar 4 tipos de gametas (AB, Ab, aB y ab) en una proporción de 1/4 de cada PF: 3/4 (P -) Púrpuras : 1/4 Blancas (pp)
tipo. combinación de gametas, en la cruza entre monohíbridos o
independiente de como se ubica el otro par de cromosomas
dihíbridos.
con los alelos B/b (coorientación centromérica, al azar). Por
DIAGRAMA DE PUNNET O TABLERO DE AJEDREZ

144
MACHOS /HEMBRAS ½ P ½p

PP
Pp
1/4 Homocigotas
½P 1/4 Heterocigotas.
Dominantes
Flores Púrpuras.
Figura 6. Los cromosomas paternos y maternos se distribuyen al azar sobre el plano 1.3.2 Método de la ramificación
ecuatorial de la célula durante MI, generando variabilidad genética en las gametas
resultantes. El método de ramificación en un sistema alternativo al anterior, que permite plantear todos
los posibles genotipos resultantes en la F2. Resulta especialmente útil cuando aumenta la
cantidad de combinaciones, como ocurre en el apareamiento de dihíbridos entre sí.
Asimismo al aparearse dos individuos entre sí debemos considerar todas las posibilidades de
fecundación entre cada una de las gametas de ambos individuos. Existen por lo tanto 16 Si consideramos el cruzamiento entre dos híbridos, mostrado en la Figura 5 como diagrama
posibles combinaciones en éste apareamiento, determinando la presencia de 9 genotipos de Punnet, el método de ramificación plantea las combinaciones entre todos los genotipos
diferentes.
del primer monohíbrido con cada uno de los genotipos del segundo monohíbrido. Esto es
Genética Mendeliana
1.3.1 Diagrama de Punnet o método del tablero de ajedrez
posible porque las gametas generadas por cada uno, segregan sus alelos en forma
independiente, de acuerdo a lo enunciado por el 3º ley de Mendel.
En la Figura 7, se observa el diagrama de Punnet para la cruza
El diagrama de Punnet permite visualizar todas las posibles combinaciones en genotipo y
fenotipo resultantes de la combinación de gametas, en la cruza entre monohíbridos o
entre individuos de la filial 1, resultantes del apareamiento
dihíbridos. ¼ AA ¼ BB = AABB (¼ x ¼= 1/16)
En la Figura 7, se observa el diagrama de Punnet para la cruza entre individuos de la filial 1,
entre plantas
resultantes de ores
del apareamiento púrpura
entre plantas y plantas
de flores de de
púrpura y plantas ores
floresblancas.
blancas. ½ Bb = AABb (¼ x ½=1/8 ó 2/16)
¼ bb = AAbb (¼ x ¼=1/16)
Pp x Pp
½ Aa ¼ BB = AaBB (½ x ¼=1/8 ó 2/16)
Gametas: ½ P, ½ p x ½ P, ½ p
PG: 1/4 PP 1/2 Pp 1/4 pp ½ Bb = AaBb (½ x ½=1/4 ó 4/16)
PF: 3/4 (P -) Púrpuras : 1/4 Blancas (pp) ¼ bb = Aabb (½ x ¼=1/8 ó 2/16)

¼ aa ¼ BB = aaBB (¼ x ¼=1/16)
DIAGRAMA DE PUNNET O TABLERO DE AJEDREZ ½ Bb = aaBb (¼ x ½=1/8 ó 2/16)
¼ bb = aabb (¼ x ¼=1/16)
MACHOS /HEMBRAS ½ P ½p
Para determinar la frecuencia de cada genotipo, se debe multiplicar las frecuencias
genotípicas de uno de los monohíbridos por las frecuencias genotípicas del otro y sumar
PP
1/4 Homocigotas
Pp Para
luego determinar la fenotipos
aquellas cuyos frecuencia de cada
resulten genotipo,
idénticos se debe las frecuencias de los
para determinar
½P 1/4 Heterocigotas.
Dominantes
Flores Púrpuras. multiplicar las frecuencias
fenotipos resultantes. genotípicas
En este caso, los de uno deserán
fenotipos los monohí-
A-B- (1/16 + 2/16 + 2/16 +
Flores Púrpuras.
4/16=9/16),
bridos A-bb
por las (2/16 + 1/16=3/16),
frecuencias genotípicas aaB-
del (1/16+ 2/16=3/16)
otro y sumar luegoy aabb (1/16), y la suma
pp
Pp
1/4 Homocigotas de todas las frecuencias será igual a 1.
½p 1/4 Heterocigotas.
Recesivos.
aquellas cuyos fenotipos resulten idénticos para determinar
Flores Púrpuras
Flores blancas. las frecuencias de los fenotipos resultantes. En este caso, los
Figura 7. Diagrama de Punnet, mostrando todos los posible genotipos y fenotipos 2. Caracteres
fenotipos serán Fenotípicos
A-B- (1/16 + y2/16
Enfermedades genéticas.
+ 2/16 + 4/16=9/16), A-bbPatrones de Herencia
resultantes de la cruza de F1 x F1, como se planteó en el texto. Mendeliana.
Figura 7. Diagrama de Punnet, mostrando todos los posible genotipos y (2/16 + 1/16=3/16), aaB- (1/16+ 2/16=3/16) y aabb (1/16), y
El patrón de herencia de muchos caracteres cualitativos (en los que el medio ambiente
fenotipos resultantes de la cruza de F1 x F1, como se planteó en el texto. la suma de sobre
todaslalas frecuencias será igual a [Link] las enfermedades de base genética,
influye poco expresión fenotípica), así como
puede ser explicado por la primer/segunda ley de Mendel.
Así por ejemplo, enfermedades como la poliquistosis renal, que afecta a ciertas razas de
1.3.2 Método de la ramificación felinos, tienen una herencia dominante. Esto significa que la presencia de una sola copia del
El método de ramificación en un sistema alternativo al
2. Árboles Genealógicos o Pedrigrís
alelo mutado del gen PKD1, es suficiente para la manifestación de la enfermedad. Cuando el
patrón es recesivo, como ocurre en algunas formas de atrofia retinal caninas, se requiere
anterior, que permite plantear todos los posibles genotipos Una de laselformas
que tanto de establecer
alelo materno como el el patrón
paternodeestén
herencia de una
mutados para que se manifieste la
resultantes en la F2. Resulta especialmente útil cuando enfermedad.
nueva enfermedad genética es estudiar el árbol genealógico
aumenta la cantidad de combinaciones, como ocurre en el oEn la Tabla 2, se describen algunas enfermedades genéticas que afectan a distintas especies.
pedigrí de los individuos afectados.
Se describe también el patrón de herencia de las mismas. Es importante notar que diferentes
apareamiento de dihíbridos entre sí. El árbol genealógico
mutaciones en un gen o en es diferentes
una representación
genes, pueden gráfica
producir que
un cuadro clínico similar. La
Si consideramos el cruzamiento entre dos híbridos, mos- muestra
OMIA (Online los antepasados y descendientes
Mendelian Inheritance in Animals, [Link] [Link]/)
individuo, es una base de
trado en la Figura 5 como diagrama de Punnet, el método datos, que reúne información sobre caracteres y enfermedades
ordenados en un esquema ramificado (Fig. 8). Los individuos de herencia mendeliana para
de ramificación plantea las combinaciones entre todos los gran número de especies animales.
se anotan siguiendo
Determinando el patrónunde conjunto
herencia dedeunreglas estandarizadas:
carácter, es posible programar los apareamientos
genotipos del primer monohíbrido con cada uno de los ge- de modo de reducir paulatinamente la proporción de animales afectados o portadores en la
notipos del segundo monohíbrido. Esto es posible porque 1. Cada generación
progenie. En enfermedadesse registra con números
de herencia romanos
recesiva, donde (I,el II,
alelo mutado permanece
las gametas generadas por cada uno, segregan sus alelos enmascarado, resulta esencial detectar a los
III, etc.), siendo I la generación más antigua. portadores. Esto puede realizarse a través de
un test genético (ver recuadro de Test Genéticos), que identifica la presencia de la mutación.
en forma independiente, de acuerdo a lo enunciado por el 2. Los individuos
En ocasiones de las
la proporción deprimeras
portadoresgeneraciones se anotan
es tan alta (superior al 30%) dentro de la raza, que
3º ley de Mendel. no esenposible
la parte superior
su rápida del árbol.a través por ejemplo de la castración de los ejemplares
erradicación,
portadores, pues de otra manera se reduciría la variabilidad genética de la raza. En estos
casos, se plantea mantener a los ejemplares más valiosos en programas 145 de cría, cruzándolos
siempre con animales negativos y analizando la progenie, de manera de ir eliminando
paulatinamente a los portadores y afectados, e incrementando la proporción de animales
libres de la enfermedad.
 Martínez, Marcela y Pinto, Gabriel

3. Los individuos pertenecientes a la misma generación se se trata de progenies con gran número de descendientes, lo que
anotan en la misma línea. es muy difícil en bovinos o equinos. Algo similar ocurre con la
4. El individuo se representa con un cuadrado si es macho, probabilidad de tener un descendiente hembra o macho, que
con un círculo si es hembra y con un rombo, si el sexo en cualquier nacimiento es siempre de 0,5. Sin embargo en na-
es desconocido. cimientos múltiples (como en cerdos, caninos, etc.), no siempre
5. Dentro de la misma generación, los individuos se anotan se observan un 50% de cada sexo en la camada. Aunque los
con números arábigos (1, 2, 3, etc.), de izquierda a dere- resultados esperados y observados no coincidan en un caso
cha, siguiendo su orden de nacimiento. particular se cumplirán para la población en general, dónde la
6. Los progenitores se unen por una línea de apareamiento y mitad de los descendientes serán machos y la mitad hembras.
su progenie (una generación abajo) se une por una línea
de hermandad como si fuera un corchete o llave.
7. Para gemelos, se dibuja primero una línea que desciende
de los padres, que luego se divide en dos (obviamente
son del mismo sexo y genotipo). Si se trata de mellizos
se divide la línea directamente en dos pudiendo o no ser
del mismo sexo.
8. Si ocurrió un aborto se representa como un pequeño
símbolo circular sombreado.

Los árboles genealógicos se emplean para registrar la genea-

logía de animales valiosos, para realizar análisis de consagui-
nidad y como se mencionó antes, para estudiar la herencia de
un carácter, en general una enfermedad genética. Es decir,
que el pedigrí permite establecer si el carácter estudiado se Figura 8. Pedigrí o árbol genealógico, representado 4 generaciones
hereda siguiendo un patrón dominante o recesivo. Para que de individuos. Los individuos sombreados son los afectados por una
Figura 8. Pedigrí o árbol genealógico, representado 4 generaciones de individuos. Los
el análisis resulte confiable es necesario analizar el pedigrí de patología de herencia dominante.
individuos sombreados son los afectados por una patología de herencia dominante.
varias familias, y el patrón de herencia hallado debe ser con-
sistente en todas ellas. En el mismo sentido, los árboles deben Bibliografía
contar con un número grande de individuos, y con información
registrada en forma confiable durante varias generaciones. BIBLIOGRAFIA
André, C. et al. Hereditary retinopathies in the dog: Genetic fundamentals and genetic tests.
Como se observa en la Figura 8, en un pedigrí, los individuos Pratique médicine et chirurgicale de l’animal de compagnie. Elsevier. 43, 75-84. 2008.
afectados aparecen sombreados.  André, C. et al., Hereditary
Lacadena J. R. Genética. retinopathies in A.G.E.S.A.
1988. 4E Ed. Talleres the dog: Genetic fundamentals and genetic
tests. Pratique médicine
Goodenough, U. et Ed.
Genética. chirurgicale
OMEGA. de l’animal
Barcelona .1981. de compagnie. Elsevier. 43, 75-84.
Si se estudia el pedigrí de la figura, se observará que éste re-2008. Rozen, Felisa M.B. Mendelismo. Guía de Lectura. Curso de Genética Básica. Area de
presenta hechos ya producidos y no los esperados, de acuerdo Lacadena Mejoramiento
, J. R. Genética.
Genético.1988.
1992. 4E Ed. Talleres A.G.E.S.A.
a las proporciones predichas por las leyes de Mendel. Como  Lyons, Strickberger,
Leslie. Feline Genetics;
M. Genética. Clinical:
Ed. OMEGA. Applications
Barcelona. 1978. and Genetic Testing. Topics in
mencionamos antes, las leyes de Mendel se cumplen cuando Companion Animal
Wrigth, Medicine.
M; Walters, Elsevier.
S. El Gato. Ed. Blume.25 (4), 203-212.
Barcelona. 1982. 2004.
 Goodenough, U. Genética. Ed. OMEGA. Barcelona .1981.
146  Rozen, Felisa M.B. Mendelismo. Guía de Lectura. Curso de Genética Básica. Area de
Mejoramiento Genético. 1992.
 Strickberger, M. Genética. Ed. OMEGA. Barcelona. 1978.
 Wrigth, M; Walters, S. El Gato. Ed. Blume. Barcelona. 1982.
 Herencia no Mendeliana

Herencia no Mendeliana
Soria, Liliana A. y Motter, Mariana M.

Introducción 1. Interacciones entre alelos de un gen

Mendel en sus experimentos utilizó siete características de Los organismos diploides tienen cada cromosoma repetido
Pisum sativum, las cuales están codificadas por genes que dos veces, un cromosoma es de origen paterno y el otro de
se ubican en distintos cromosomas y el mecanismo de acción origen materno. Por lo tanto, aunque en la población podrían
que las determina es la dominancia completa. A principios existir muchos alelos de un gen, el genotipo de cada indivi-
del 1900 cuando se reanalizaron dichos experimentos, se duo resulta de la combinación de solo dos alelos de cada
observó que las proporciones fenotípicas observadas en gen. Las interacciones entre alelos de un gen del tipo no
ciertas características no se ajustaban a las mendelianas. mendeliano son:
Las causas que provocan esas desviaciones en las propor- • Dominancia Incompleta
ciones fenotípicas pueden ser varias, una de ellas es el tipo • Codominancia
de interacción génica. Se conoce que existen distintos tipos • Sobredominancia
de interacciones entre alelos, las cuales pueden ser: intraalé-
licas (entre alelos de un mismo gen) o interalélicas (alelos de 1.2 Dominancia Incompleta
genes distintos). Las proporciones mendelianas también se Existen algunos casos donde el cruzamiento de líneas paren-
alteran por otras causas, por ejemplo algunos rasgos no se tales que tienen fenotipos contrastantes produce un fenotipo
expresan fenotípicamente en el 100% de los individuos que intermedio. Por ejemplo, un tipo de planta tropical de América
tienen la información genética necesaria (penetrancia varia- que se caracteriza por abrir sus pétalos a media tarde, pre-
ble) o se manifiestan en distinta magnitud en cada individuo senta ores de colores: rojo, blanco o rosa. Cuando se cruzan
(expresividad variable), o porque existen alelos que causan la líneas puras de pétalos rojos con líneas puras de pétalos
muerte del individuo que porta determinado genotipo (alelos blancos se obtienen plantas de pétalos rosas. El cruzamiento
letales). Además, otra razón es que el fenotipo no es la sim- de plantas de pétalos rosas entre sí produce una F2 con una
ple expresión del genotipo sino que involucra interacciones proporción genotípica mendeliana típica del cruzamiento de
genético-ambientales. heterocigotas entre sí (1:2:1), sin embargo como ninguno de
149
 Soria, Liliana A. y Motter, Mariana M.

los alelos es dominante completo, la proporción fenotípica de la 1.4 Sobredominancia

F2 es: rojas: rosas: blancas. Este tipo de interacción es
conocida como dominancia parcial o incompleta. Este tipo de interacción se presenta entre alelos de genes
Como ninguno de los alelos es completamente dominante, no que codifican atributos productivos, características que se
se utilizan símbolos en mayúscula y minúscula para distinguir denominan cuantitativas (ej. peso al destete en bovinos para
a cada alelo, sino por ejemplo R1 para rojo y R2 para blanco. carne). Este mecanismo de acción es una de las causas
El producto de la expresión del alelo R1 es una enzima que ca- que explica la superioridad de las cruzas entre razas puras
taliza la síntesis del pigmento rojo y el mutante R2 produce una diferentes. Un ejemplo bien conocido en bovinos es el caso
enzima que ha perdido su función. Como resultado los heteroci- de la F1 obtenida a partir del cruzamiento entre Angus y He-
gotas producen la mitad del pigmento rojo que los homocigotas reford. El peso de la F1 (1/2 Angus:1/2 Hereford) es superior
R1R1, por eso su fenotipo es rosa. Por lo tanto, a nivel molecular al promedio de las razas parentales, una de las causas de
la dominancia incompleta se puede explicar por un efecto cuan- esa superioridad es la sobredominancia.
titativo del número de copias de alelos funcionales (R1). No es el objetivo de este capítulo profundizar este tema, por-
que el alumno debe tener conceptos de genética cuantitativa
1.3 Codominancia para poder comprenderlo.
Es un mecanismo de acción donde el heterocigota expresa
fenotípicamente a ambos alelos del gen de la característica
en cuestión. El ejemplo clásico es el del sistema de grupos 2. Alelos Múltiples
sanguíneos ABO en los humanos, el cual está controlado por Los alelos de un gen se generan a partir de mutaciones pun-
el gen I (que refiere al antígeno de superficie o isoaglutinó- tuales que ocurren, en forma azarosa, en la región codificante
geno) que tiene tres alelos: IA, IB e i. Entre dichos alelos se de su secuencia. Debido a esto, el número de alelos de un gen
presentan distintos tipos de interacciones y producen cuatro en una población puede ser superior a dos. Cuando existen
fenotipos posibles o grupos sanguíneos: A, B, AB o O. El tres o más alelos de un gen en una población se habla de
heterocigota IAIB presenta fenotipo AB porque expresa ambos alelos múltiples, pero todo individuo diploide portará sólo dos
tipos de antígenos (A y B). alelos de dicho gen.
En animales un ejemplo de codominancia es el color rosillo En ocasiones los alelos múltiples de un gen tienen un orden
del pelaje en equinos y bovinos, donde el genotipo hetero- de dominancia entre ellos, en estos casos se habla de serie
cigota es rosillo porque presenta pelos blancos y rojos. La alélica.
nomenclatura que se utiliza para indicar a los alelos codomi- El gen C en los mamíferos es responsable de la expresión
nantes en general, está compuesta por letras y números ya del color del pelo. En el gato dicho gen tiene cuatro alelos
que no existe grado de dominancia entre ellos (ej. R1= rojo; que conforman la siguiente serie alélica: C>Cb=Cs >c, donde
R2=blanco). el alelo “C” es dominante sobre el “Cs”, y sobre “Cb”, y estos
Las características codominantes se caracterizan porque en a su vez sobre “c”.
los heterocigotas existe expresión de ambos alelos, los cuales El alelo C es el alelo silvestre o wild type del gen TYR, que
son claramente detectables. como se mencionó anteriormente, codifica la enzima tirosina-
150
 Herencia no Mendeliana

sa. Un genotipo con al menos un alelo C produce la coloración se pueden tolerar en heterocigosis, pero no en homocigosis.
uniforme del manto. En los heterocigotas el alelo silvestre puede producir cantidad
Dos mutaciones en el alelo silvestre son las que originan los suficiente de producto para asegurar la vida del individuo.
fenotipos Siamés y Burmese. Una sustitución en el exón 2 En homocigosis, tal mutación se comporta como alelo letal
genera el alelo Cs el cual codifica para una enzima que pre- recesivo y los individuos homocigotas mueren. El momento
senta una Arginina en posición 301 en lugar de Glicina y es la de la muerte puede ser durante el desarrollo embrionario, al
responsable del fenotipo Siamés. El alelo Cb (Burmese) pre- poco tiempo de nacer o incluso a edad adulta.
senta una sustitución en el exón 1 que cambia una Glicina por 3.
En Alelos
los Letales
ratones el locus A controla la distribución del color a lo
Triptofano en la posición 227. Ambas mutaciones determinan Muchas
largoproteínas
del pelo. son esenciales
El alelopara la supervivencia
salvaje es el A de y
un produce
organismo. Las mutaciones
color agutícon
pérdida de función a veces se pueden tolerar en heterocigosis, pero no en homocigosis. En
que la enzima sea termosensible. (bandas
los de pigmento
heterocigotas negro
el alelo silvestre puedeyproducir
amarillo alternado
cantidad suficiente adelos largopara
producto
El heterocigota CbCs presentará fenotipo Tonquines, el cual es de cada
asegurar pelo).
la vida Una mutación
del individuo. genera
En homocigosis, el alelo
tal mutación Ay, que
se comporta origina
como alelo letal
recesivo y los individuos homocigotas mueren. El momento de la muerte puede ser durante
una mezcla de Siamés y Burmese, porque existe codominancia el color amarillo del manto, siendo un claro ejemplo
el desarrollo embrionario, al poco tiempo de nacer o incluso a edad adulta.
de una
entre dichos alelos. mutación
En los ratones elcon
locus “ganancia de función”
A controla la distribución del color aporque
lo largo delelpelo.
mismo se
El alelo salvaje
La serie alélica presenta los siguientes fenotipos según el comporta
es el A y producecomo dominante
color agutí para
(bandas de pigmento el color
negro del
y amarillo manto
alternado aylos
rece-
largo de
cada pelo). Una mutación genera el alelo Ay, que origina el color amarillo del manto, siendo
genotipo: sivo para el desarrollo embrionario debido a que es letal en
un claro ejemplo de una mutación con “ganancia de función” porque el mismo se comporta
homocigosis.
como dominante paraLos ratones
el color del mantodey color
recesivoamarillo son heterocigotas
para el desarrollo embrionario debido a
y y
C-: Distribución de Color uniforme (CC, CCs, CCb o Cc) que
(AAesy),letal
losenaguties
homocigosis.
sonLos ratones de color
homocigotas AA amarillo
y los son heterocigotas (AA
homocigotas AyA ), los
aguties son homocigotas AA y los homocigotas AyAy mueren en el útero. Cuando se cruzan
Cs-: Distribución de color siamés (CsCs o Csc) mueren en el útero. Cuando se cruzan ratones amarillos
ratones amarillos entre si, la progenie presenta una proporción de 2:1 en lugar de la entre
Cb-: Distribución de color burmese (CbCb o Cbc) si, la progenie
mendeliana 3:1 (Tablapresenta
1). una proporción de 2:1 en lugar de la
cc : Albino (cc). mendeliana 3:1 (Tabla 1).
CsCb : Tonquinés. Tabla 1. Resultado del apareamiento de heterocigotas entre sí.
Tabla 1. Resultado del apareamiento de heterocigotas entre sí.

En los conejos el gen C también tiene cuatro alelos que son:

C (color uniforme), cCH (chinchilla, color grisáceo), cH (hima-
laya, blanco con extremidades negras) y c (albino) y forman
la siguiente serie alélica: C>CCH> CH>c.
Otro ejemplo de serie alélica bien conocido corresponde al
sistema de grupos sanguíneos ABO en humanos, en este
caso el antígeno de superficie de los glóbulos rojos está Al no nacer el genotipo AyAy las proporciones fenotípicas
codificado por la serie alélica: (IA=IB) >i. mendelianas
Al no nacer el genotipode laAyAF2
y
lasno se cumplen,
proporciones debido
fenotípicas a que
mendelianas de laseF2ob-
no se
cumplen,
tienen debido
2/3 de a que se obtienen
ratones de2/3 de ratones
color de color
amarillo amarillo
: 1/3 de :ratones
1/3 de ratones
concon
color agutí o salvaje.
Elcolor
análisisagutí o salvaje.
molecular del alelo Ay reveló que el efecto letal del mismo se debe una extensa
3. Alelos Letales El análisis molecular
deleción que se extiende delregión
a una aleloadyacente
Ay reveló al que
mismoely efecto
que afectaletal delgen
a un
imprescindible para el desarrollo embrionario (gen Merc).
mismo se debe una extensa deleción que se extiende a una
No siempre la mutación que genera el alelo letal determina una “ganancia de función”, es el
Muchas proteínas son esenciales para la supervivencia de un región
caso de la adyacente al mismocony efecto
mayoría de las mutaciones que afecta a un gen
letal que existen en las imprescin-
distintas especies
organismo. Las mutaciones con pérdida de función a veces dible para
domésticas el desarrollo
(OMIA-Online Mendelianembrionario (gen Merc).
Inheritance in Animals).
Un ejemplo en bovinos es la Osteopetrosis (Enfermedad de los huesos de mármol),
caracterizada por una deficiente actividad de los osteoclastos, lo que determina151 huesos
densos y frágiles, e insuficiencia medular con anemias y hemorragias. La causa es una
deleción de 2.781 pb localizada entre el intrón 1 y el exón 3 del gen SLC4A2, dicha mutación
genera un alelo que se comporta como alelo recesivo. Dicho defecto genético se ha descripto
en las razas Angus, Holstein, Simmental y Hereford. Los terneros nacen prematuros y
muertos. El apareamiento entre bovinos portadores producirá una única clase fenotípica
 Soria, Liliana A. y Motter, Mariana M.

No siempre la mutación que genera el alelo letal determina 4.1 Epístasis

una “ganancia de función”, es el caso de la mayoría de las
mutaciones con efecto letal que existen en las distintas Con este término se designa a la interacción entre genes
especies domésticas (OMIA-Online Mendelian Inheritance donde la expresión de uno de ellos enmascara o modifica la
in Animals). expresión del otro. El gen que inhibe la expresión de otro se lo
Un ejemplo en bovinos es la Osteopetrosis (Enfermedad llama epistático y al que es inhibido se lo denomina hipostático.
de los huesos de mármol), caracterizada por una deficiente Las epístasis pueden ser dominante o recesiva, dependiendo
actividad de los osteoclastos, lo que determina huesos de si el gen epistático ejerce su acción en estado dominante
densos y frágiles, e insuficiencia medular con anemias y o recesivo respectivamente.
hemorragias. La causa es una deleción de 2.781 pb loca- Un ejemplo de epístasis dominante es el del gen en el gato,
lizada entre el intrón 1 y el exón 3 del gen SLC4A2, dicha este gen es epistático sobre el color de base, el que puede ser
mutación genera un alelo que se comporta como alelo negro o pardo. Cuando existe por lo menos un alelo dominante
Las epístasis pueden ser dominante o recesiva, dependiendo de si el gen epistático ejerce su
recesivo. Dicho defecto genético se ha descriptoacción
en las de el animal es blanco, en tanto que animales homocigotas
en estado dominante o recesivo respectivamente.
razas Angus, Holstein, Simmental y Hereford. Los terne-
Un ejemplo de recesivos ( ) son de
epístasis dominante es color
el del negro
gen Woenpardo según
el gato, estesugen
genotipo
es epistático sobre el
color
ros nacen prematuros y muertos. El apareamiento entre de base,( el B-:
quenegro
puede bb:
ser pardo).
negro o pardo. Cuando existe por lo menos un alelo
dominante de W Las el proporciones
animal es blanco, en tantomendelianas
fenotípicas que animalestípicas
homocigotas
de la F2recesivos
de (ww) son
bovinos portadores producirá una única clase fenotípica
de color negro uno pardo según su genotipo (wwB-: negro; estarán
wwbb: pardo).
(normales), pero habrá un menor número de descendien- cruzamiento entre dihíbridos (9:3:3:1) modificadas,
Las proporciones fenotípicas mendelianas típicas de la F2 de un cruzamiento entre dihíbridos
tes vivos debido a que los homocigotas recesivos(9:3:3:1)
nacen estarán como se demuestra
modificadas, comoa se
continuación:
demuestra a continuación:
muertos.
Algunas mutaciones generan alelos que presentan porcen-
tajes de mortalidad inferiores al 100 %, a estos alelos se
los denomina subletales. Otros producen una disminución
de la adaptabilidad al medio ambiente como la hemofilia
y la polidactilia, en ese caso se denominan deletéreos.

4. Mecanismos de Interacción entre genes

no alelos
La in uencia de los genes sobre el fenotipo es más com-
pleja que las características analizadas por Mendel en las
arvejillas de jardín porque no todos los fenotipos están
controlados por un único gen, sino que resultan de la inte-
racción entre varios.

152
En el caso de la epístasis simple recesiva, un ejemplo es el del color del pelaje en las razas
caninas Labrador Retriever y Golden Retriever donde el genotipo homocigota recesivo para el
alelo “e” produce la dilución del color que está controlada por otro gen (B/b), donde B
produce color negro y b el chocolate. Entonces los animales de color negro serán E-BB o E-
 Herencia no Mendeliana

En el caso de la epístasis simple recesiva, un ejemplo es el orejas y pecho) típica de la raza Dobermann. Una sustitu-
del color del pelaje en las razas caninas Labrador Retriever y ción de sentido erróneo en el codon 264 (M264V) origina el
Golden Retriever donde el genotipo homocigota recesivo para alelo E, el cual determina una distribución uniforme del color
el alelo “e” produce la dilución del color que está controlada negro y el alelo e es producto de una sustitución sin sentido
por otro gen (B/b), donde B produce color negro y btípica de la raza(R306ter)
el cho- Dobermann. queUna sustitución
produce de sentido
un receptor erróneo y
no funcional endetermina
el codon 264 (M264V)
colate. Entonces los animales de color negro serán origina
E-BBelo alelo E, el cualamarillo
el color determina una distribución uniforme del color negro y el alelo e es
uniforme.
En el caso de la E-Bb,
epístasis simple producto de una
ensustitución
las razas sin sentido (R306ter) que produce un receptor no funcional y
los de colorrecesiva,
chocolateun ejemplo
E-bb es color
y los de el delamarillo
color del pelaje
ee--,
determina el color
caninas Labrador(eeB-
Retriever
son y Golden Retriever
amarillos pigmentadosdonde el genotipo
y los eebb sonhomocigota
amarillos recesivo 4.2amarillo
Genes uniforme.
para el complementarios
alelo “e” produce la dilución del color que está controlada por otro gen (B/b), donde B
despigmentados). Cuando dos genes interactúan entre sí para producir una
produce color negro y b el chocolate. Entonces los animales de color negro serán E-BB o E-
Si se aparean entre sí perros negros diheterocigotas 4.2(EeBb
Genes complementarios
determinada característica, se denominan complementarios y
Bb, los de color chocolate E-bb y los de color amarillo ee--, (eeB- son amarillos pigmentados
x EeBb) las proporciones
y los eebb son amarillos despigmentados). fenotípicas mendelianas de
Cuandola F2 en este
dos genes caso los entre
interactúan productos de ambos
sí para producirgenes interactúan para
una determinada característica, se
también estarán modificadas, pero en este caso denominan
por ser el complementarios
desarrollar uny fenotipo.
en este caso
Un los productos
ejemplo de de ambos
genes genes interactúan para
complementa-
Si se aparean entre sí perros negros diheterocigotas (EeBb x EeBb) las proporciones
desarrollar un fenotipo. Un ejemplo de genes complementarios fue descubierto en plantas
alelo recesivo
fenotípicas mendelianas de la (e)
F2 el epistático,
también las mismas
estarán serán: 9/16
modificadas, peroNegros
en este caso rios
porfue descubierto
ser el en plantas donde un alelo dominante de
donde un alelo dominante de cada gen es necesario para que se produzca pigmento color
alelo recesivo (e)(E-B-): 3/16 Chocolate
el epistático, (E-bb)
las mismas y 4/16
serán: 9/16Amarillos
Negros(eeB- +
(E-B-): eebb)
3/16 cada
Chocolate gen
(E-bb)es necesario
púrpura en los pétalos, porque la interacción para entre
que se produzca
genes pigmento color
es la siguiente:
y 4/16 Amarillos como
(eeB- se
+ eebb)
muestracomo se muestra a continuación:
a continuación: púrpura en los pétalos, porque la interacción entre genes es
la siguiente:

El genotipo cc no produce el producto intermediario porque

la enzima que cataliza dicha reacción no es funcional, por
El genotipo cc no produce el producto intermediario porque la enzima que cataliza dicha
lo tanto las ores serán blancas porque no se obtiene el
reacción no es funcional, por lo tanto las flores serán blancas porque no se obtiene el
producto final. Una producto final. Una
consecuencia consecuencia
semejante semejante
se observa se observa
en el genotipo pp. en
el genotipo pp.
A este tipo de interacción no epistática se la denomina acción de genes complementarios,
A este tipo
donde las proporciones de interacción
fenotípicas noserán:
de la F2 epistática
9/16se la denomina
púrpuras (C-P-)acción
: 7/16 blancas (C-
pp + ccP- + ccpp). de genes complementarios, donde las proporciones fenotípi-
El gen E o MC1R (Melanocortin 1 Receptor) codifica una cas de la F2 serán: 9/16 púrpuras (C-P-) : 7/16 blancas (C-pp
El gen E o MC1R (Melanocortin 1 Receptor) codifica una proteína de transmembrana
proteína de transmembrana (receptor) que afecta
(receptor) que afecta la extensión de la eumelanina. Dicho gen4.3 la extensión
Otras
tiene
+ ccP- + ccpp).
interacciones
tres alelos con entre
el genes
de la eumelanina. mDicho+gen tiene tres alelos con el siguiente
siguiente orden de dominancia: E > E > e. El alelo dominante EOtro m
permite la expresión de
4.3 Otras
tipom de interacción interacciones
génica entre
no epistática son genes
los genes duplicados, donde cualquiera de
color (codificadoorden de gen
por el dominancia: > Ees
TYRP1 oEmB), +
une. El alelo
alelo dominante
dominante y Eresponsable
los alelos dominantesdedelacada gen determinan la misma alternativa fenotípica de una
distribución del color negro
permite conocido de
la expresión como “máscara”
color (color
(codificado por elnegro en hocio,
gen TYRP1 o orejas
característica. Otro
Para tipo
yelpecho)
casodedeinteracción génica
los genes A/a no siempre
y B/b, epistática
se son los genes
producirá el mismo fenotipo
B), es un alelo dominante y responsable de la distribucióncuandodel duplicados,
el genotipo porte al donde
menos cualquiera de los alelos
un alelo dominante de cadadominantes
gen (A-.. o de..B-). El único
color negro conocido como “máscara” (color negro en genotipo
hocio,que presenta
cada gen un determinan
fenotipo diferente es el
la misma homocigota
alternativa recesivo de
fenotípica (aabb).
una En este tipo
de interacción entre genes las proporciones fenotípicas de la F2 serán 15:1.
153
Algunas interacciones entre genes generan fenotipos nuevos, este es el caso de la forma de
la cresta en las gallinas. A principios del 1900 Bateson y Pannet postulan que el origen de
cierto tipo de forma de la cresta en las gallinas se debe a la interacción de dos genes. Estos
investigadores observaron que en distintas razas la forma de la cresta es distinta, la raza
Wynadotte posee la cresta en forma de roseta, Brahma en forma de guisante y Leghorn en
El genotipo cc no produce el producto intermediario porque la enzima que cataliza dicha
reacción no es funcional, por lo tanto las flores serán blancasSoria, Figura
porque
Liliana [Link]
noA. yResultado
obtiene
Motter, del
el apareamiento
Mariana M. de Wyanotte (roseta) con Brahma (guisante).
producto final. Una consecuencia semejante se observa en el genotipo pp.
A este tipo de característica.
interacción no Para el caso
epistática dedenomina
se la los genesacción
A/a y B/b, siempre
de genes Sobre la base de estos resultados se concluye que la forma
complementarios,
donde las proporciones fenotípicas
se producirá de la
el mismo F2 serán:
fenotipo 9/16 el
cuando púrpuras Sobre
(C-P-)
genotipo porte la
al base
: 7/16 de estos
blancas
de la(C- resultados
cresta se concluye por
esta determinada quedos
la forma
genesde(Rlay cresta esta determinada
P) y que
pp + ccP- + ccpp). por dos genes (R y P) y que es posible observar cuatro fenotipos (Fig. 4).
menos un alelo dominante de cada gen (A-.. o ..B-). El único es posible observar cuatro fenotipos (Fig. 4).
genotipo que presenta un fenotipo diferente es el homocigota
recesivo (aabb).
4.3 Otras interacciones entre En este tipo de interacción entre genes las
genes
proporciones fenotípicas de la F2 serán 15:1.
Otro tipo de interacción génica no epistática son los genes duplicados, donde cualquiera de
Algunas interacciones
los alelos dominantes de cada gen entre genes generan
determinan la misma fenotipos nuevos,
alternativa fenotípica de una
característica. este escaso
Para el el caso
de losdegenes
la formaA/a yde la cresta
B/b, siempreenselas gallinas.
producirá el A
mismo fenotipo
principios
cuando el genotipo portedel 1900 Bateson
al menos un aleloydominante
Pannet postulan
de cadaquegenel(A-..
origeno ..B-). El único
genotipo que presenta
de ciertoun fenotipo
tipo de formadiferente es el homocigota
de la cresta recesivo
en las gallinas (aabb).
se debe a En este tipo
de interacción entre genes las proporciones fenotípicas de la F2 serán 15:1.
la interacción de dos genes. Estos investigadores observaron
Algunas interacciones
que en entre genes
distintas generan
razas fenotipos
la forma nuevos,
de la cresta eseste es ellacaso
distinta, razade la forma de
la cresta en lasWynadotte
gallinas. Aposee
principios del 1900 Bateson y Pannet
la cresta en forma de roseta, Brahma enpostulan que el origen de
cierto tipo de forma de la cresta en las gallinas se debe a la interacción de dos genes. Estos
forma de guisante y Leghorn en forma simple.
investigadores observaron que en distintas razas la forma de la cresta es distinta, la raza
Wynadotte posee Cuando se cruza
la cresta Wyanotte
en forma con Brahma
de roseta, Brahma en se forma
observade en la F1 y Leghorn en
guisante
forma simple. un fenotipo único pero distinto al de ambos progenitores y se
lo denomina cresta en forma de nuez (Fig. 3), al aparear F1
Cuando se cruza Wyanotte con Brahma se observa en la F1 un fenotipo único pero distinto al
entre si layproporción
de ambos progenitores fenotípica
se lo denomina crestadeenla forma
F2 es:de
9 cresta nuez:3),3 al aparear F1
nuez (Fig.
cresta roseta:
entre si la proporción 3 cresta
fenotípica de laguisante:
F2 es: 9 1cresta
crestanuez
simple.
: 3 cresta roseta : 3 cresta
guisante : 1 cresta simple.
Figura
Figura 4. Forma de las 4. Forma
crestas de las crestas
en gallinas en gallinas (nice [Link]).
([Link]).

La cresta guisante se observa en animales sometidos a climas

La cresta guisante
fríos,seprobablemente
observa en animales
resultasometidos a climas fríos,
de una adaptación probablemente
al medio diri- resulta
de una adaptación
gidaala medio dirigida
evitar la a evitar
pérdida la pérdida
de calor que se de calor que
produce se cresta
en la produce en la cresta
simple. Estudios moleculares realizados recientemente en el gen SOX5 permitieron hallar
simple. Estudios moleculares realizados recientemente en el
diferencias entre los animales con cresta simple y en guisante, mostrando estos últimos una
genenSOX5
duplicación (CNV) permitieron
el intrón 1 de dichohallar
gen. diferencias entre los animales
con cresta simple y en guisante, mostrando estos últimos una
duplicación (CNV) en el intrón 1 de dicho gen.
5. Efecto aditivo de los genes
Las características cuantitativas (ej. producción de leche, peso del vellón o ganancia de peso
corporal) están codificadas por varios genes y cada uno contribuye en parte al fenotipo final.
5. Efecto aditivo de los genes
Cada alelo tiene un valor específico y el fenotipo es el resultado de la sumatoria del efecto de
Figura 3. Resultado del apareamiento de Wyanotte (roseta) con Brahma
(guisante). todos alelos deLastodos los genes. Porcuantitativas
características ejemplo si una característica
(ej. producciónestá determinada por dos
de leche,
genes (A y B) y si a cada alelo se le asignara un valor métrico, de modo que A=4 unidades,
a=2 unidades, peso del vellón
B=2 unidades o ganancia
y b=1 unidad, de peso 9corporal)
existirán están
genotipos cadacodifi-
uno con un fenotipo
particular. En la tabla 2 se observan los genotipos posibles de una F2 parte
cadas por varios genes y cada uno contribuye en y los al
valores métricos
asociados a cadafenotipo
uno yfinal. Cada alelo(otiene
la distribución un valor
curva) de losespecífico y el fenotipo
valores métricos se aproxima a una
curva de valores continuos (Gráfico 1).
154
Gráfico 1. Genotipos y fenotipos posibles
Tabla 2. Genotipos y fenotipos posibles de (valores métricos) de la F2 para un rasgo
una F2 de un rasgo cuantitativo. cuantitativo.
 La cresta guisante se observa en animales sometidos a climas fríos, probablemente resulta
de una adaptación al medio dirigida a evitar la pérdida de calor que se produce en la cresta
simple. Estudios moleculares realizados recientemente en el gen SOX5 permitieron hallar
diferencias entre los animales con cresta simple y en guisante, mostrando estos últimos una
duplicación (CNV) en el intrón 1 de dicho gen.
Herencia no Mendeliana
a de las crestas en gallinas ([Link]).
es el resultado de la sumatoria
5. Efecto aditivo de del
losefecto
genes de todos alelos de 6. Pleiotropía
todos los genes. Por ejemplo si
Las características una característica
cuantitativas está deter-
(ej. producción de leche, peso del vellón o ganancia de peso
minada por corporal)
dos genes están
(A y codificadas
B) y si a cadapor alelo
variossegenes y cada uno contribuye
le asignara En seccionesen parte al fenotipo
previas de estefinal.
capítulo se han tratado ejem-
nte se observa en animales sometidos Cada a climas
alelo fríos,
tienequeprobablemente
un valor específicoresulta
ya=2
el fenotipo es el resultado de la sumatoria del efectocontrolan
de
un valor métrico,
ón al medio dirigida a evitar la pérdidatodos de
de calor modo A=4 unidades, unidades, plos donde uno o dos genes la expresión de una
alelosque se produce
de todos los [Link] laPorcresta
ejemplo si una característica está determinada por dos
B=2 unidades
s moleculares realizados recientementegenes y b=1
en el unidad,
(A gen
y B) y SOX5 existirán 9
permitieron
si a cada
genotipos
alelo se lehallar
cada uno característica, contrariamente
asignara un valor métrico, de modo que A=4 unidades, la pleiotropía es el fenómeno
con un fenotipo
e los animales con cresta simple y en guisante, particular.
mostrando
a=2 unidades, En la tabla 2 se
estos últimos
B=2 unidades observan los ge-
una existirán
y b=1 unidad, en el cualcada
9 genotipos
6. Pleiotropía
una uno
mutación
con unafecta
fenotipoa dos o más características.
notipos posibles
V) en el intrón 1 de dicho gen. de una
particular. EnF2 y los 2valores
la tabla métricos
se observan los asociados
genotipos posibles En la
de Figura
una F2 5yse
lospresentan dos
valores métricos posibles modelos que podrían
En secciones previas de este capítulo se han tratado ejemplos donde uno o dos genes
a cada uno yasociados a cada(o
la distribución uno y la de
curva) distribución
los valores (o métricos
curva) de loslavalores
controlan explicarmétricos
expresión una se
eldemodo enaproxima
el que unamismo
característica, una gen puede
contrariamente controlar es
la pleiotropía dos
el fenómeno en
se aproximacurva
a una decurva
valores decontinuos (Gráfico 1).
valores continuos (Gráficoel1). rasgos fenotípicos
cual una mutación afecta a dossimultáneamente.
o más caracterí[Link] a) se postula que dos
En la Figura alelos
5 se presentan
diferentesdos(A/a)
posibles modelos que podrían explicar el modo en el que un
afectan
vo de los genes Gráfico 1. Genotipos y fenotipos posibles independiente dos caracterís-
mismo gen puede
(valores controlar
métricos) dos
de la F2en rasgos
para un fenotípicos simultáneamente. En a) se postula que
as cuantitativas (ej. producción Tabla
Tabla 2. y
2. Genotipos
de leche,
Genotipos
peso del fenotipos
vellón
y posibles
fenotipos de
posibles
o ganancia una F2de
dede un rasgo
peso dos alelos ticas, en (A/a)
diferentes cambio unrasgo
afectanb)independiente
alelo controla una característica
dos características, y
en cambio en b) un
una F2 de un rasgo cuantitativo.
cuantitativo. cuantitativo.
esta condiciona la expresión de
codificadas por varios genes y cada uno contribuye en parte al fenotipo final. alelo controla una característica y esta condiciona la expresión de la [Link] segunda.
un valor específico y el fenotipo es el resultado de la sumatoria del efecto de
Genotipo Proporción Fenotipo
todos los genes. Por ejemplo si una característica está determinada por dos
AABB 1 12
si a cada alelo se le asignara un valor métrico,
AABb de modo2 que A=411unidades,
B=2 unidades y b=1 unidad, existirán 9 genotiposAAbb cada 1uno con un
10 fenotipo
tabla 2 se observan los genotipos posibles AaBB
de una F2 y2los valores
10 métricos
a uno y la distribución (o curva) de los valoresAaBb métricos
4 se aproxima
9 a una
continuos (Gráfico 1). Aabb 2 8
aaBB 1 8
Gráfico 1. Genotipos y2fenotipos posibles
aaBb 7
os y fenotipos posibles de (valores métricos) de la F2 para un rasgo
aabb 1 6
o cuantitativo. cuantitativo.
Gráfico 1. Genotipos y fenotipos posibles (valores métricos) de la F2
roporción Fenotipo para un rasgo cuantitativo.
1 12
2 11 Figura 5. Dos modelos posibles que explican el efecto pleiotrópico de
Figura 5. Dos modelosunposibles que explican
gen (Adaptado de Paadyel and
efecto pleiotrópico
Rockman, 2013).de un gen (Adaptado de
1 10 Paady and Rockman, 2013).
2 10
4 9 En varias razas caninas (Collie, Border Collie, Dachshund,
2 8 Gran
En varias razas Danés,
caninas etc) Border
(Collie, se presenta el fenotipo Gran
Collie, Dachshund, MerleDanés,
(Mirlo),
etc)else presenta el
fenotipo Merle
cual(Mirlo), el cual es
es originado pororiginado por la
la inserción deinserción de aproximadamente
aproximadamente 253 253 pb
1 8 (secuencia SINE) en el límite entre el exón 10 y el intrón 11 del gen SILV (también
2 7 pb (secuencia SINE) en el límite entre el exón 10 y el intrón
denominado locus M), que tiene un rol central en la melanogénesis. El alelo Merle (M1) es
1 6 codominante11 y del gen SILV Los
autosómico. (también
perrosdenominado
homocigotas locus
para M), que
dicho tiene
alelo un blancos y los
son
heterocigotasrol central
tienen en la melanogénesis.
manchas El alelo
oscuras sobre un fondo Merle
gris, (M1) los
en tanto es que
codo-
no lo portan son
negros. Los perros
minante quey tienen el alelo Merle
autosómico. también
Los perros presentan ojos
homocigotas azules
para y anormalidades
dicho
auditivas (causantes de hipoacusia) y oculares (microftalmia) y a veces esterilidad.
Otro caso de efecto pleiotrópico de un gen es el alelo W del gato el cual produce pelaje
blanco, porque es epistático sobre los genes que codifican para el color del 155
manto, asociado
a ojos azules y sordera. Esto ocurre porque los animales que portan dicho alelo producen
melanocitos anormales, como ciertos melanocitos ubicados en la base de la cóclea del oído
interno también son disfuncionales, el animal puede ser sordo.
En equinos existen muchos locus que contribuyen en la variedad de color observada en dicha
especie, sin embargo muchas mutaciones en esos locus tienen efecto pleiotrópico sobre
 Soria, Liliana A. y Motter, Mariana M.

alelo son blancos y los heterocigotas tienen manchas oscuras interacción entre el genotipo particular de un individuo y el
sobre un fondo gris, en tanto los que no lo portan son negros. medio ambiente.
Los perros que tienen el alelo Merle también presentan ojos
azules y anormalidades auditivas (causantes de hipoacusia) 7.1 Penetrancia
y oculares (microftalmia) y a veces esterilidad. Se define como penetrancia a la probabilidad de que los
Otro caso de efecto pleiotrópico de un gen es el alelo del individuos que tienen un determinado genotipo lo expresen
gato el cual produce pelaje blanco, porque es epistático sobre fenotípicamente. Cuando la penetrancia es del 100% todos
los genes que codifican para el color del manto, asociado a los individuos con determinado genotipo expresan el fenotipo
ojos azules y sordera. Esto ocurre porque los animales que esperado, cuando la penetrancia es menor al 100% habrá
portan dicho alelo producen melanocitos anormales, como individuos que no presentan el fenotipo esperado. Por ejem-
ciertos melanocitos ubicados en la base de la cóclea del oído plo: si existen 8 individuos con un genotipo particular (A ) y
interno también son disfuncionales, el animal puede ser sordo. 6 de ellos presentan o expresan el fenotipo correspondiente,
En equinos existen muchos locus que contribuyen en la el nivel de penetrancia del gen es de 6/8=0,75 o lo que es lo
variedad de color observada en dicha especie, sin embargo mismo, se manifiesta en el 75 % de la población.
muchas mutaciones en esos locus tienen efecto pleiotrópico Las causas que determinan que algunos genes presentan
sobre otros sistemas, causando defectos neurológicos u una penetrancia incompleta (menor al 100%) son: mosai-
oculares, trastornos en el desarrollo del pelo o predisposición cismo, genes limitados al sexo, imprinting o in uencias del
a melanomas. Por ejemplo, la sustitución de sentido erróneo ambiente, entre otros.
en el gen EDNRB (endothelin receptor type B) que provoca
un cambio en el aminoácido 118 (isoleucina por lisina) de- 7.2 Expresividad variable
termina el color overo (caracterizado por manchas blancas
La expresividad de un gen es variable cuando el nivel de
longitudinales principalmente en ancos y desde ventral),
expresión del mismo difiere entre individuos. Por ejemplo
el cual tiene herencia autosómica dominante. Los caballos
en el caso de una mutación responsable de causar una
overos son heterocigotas porque los homocigotas mueren.
enfermedad, puede en algunos individuos ocasionar sín-
Estos carecen de inervación en los intestinos lo que determina
tomas graves, en otros leves y en otros ningún síntoma.
severas obstrucciones que causan la muerte generalmente
En equinos los cuatro fenotipos despigmentados (sabino,
a las 24 hs de vida.
ruano, tobiano y blanco) han sido atribuidos a diferentes
mutaciones del gen KIT (receptor de tirosinasa), el cual
codifica para un receptor de membrana y esta involucrado
7. Expresión fenotípica en la diferenciación, proliferación y motilidad de melano-
No se puede considerar que los genes operan en un “sis- blastos, espermatogonias y células intestinales de Cajal.
tema cerrado” de modo tal que únicamente un conjunto de La completa pérdida de función del gen causa muerte pre
proteínas funcionales o no, determinan el fenotipo completo y perinatal.
de un individuo. Por el contrario, la expresión de los genes El gen KIT, también denominado , muestra expresividad
y el fenotipo resultante generalmente es consecuencia de la variable produciendo distintos grados de despigmentación,
156
La expresividad
Las causasde queundeterminan
gen es variable cuando
que algunos el nivel
genes de expresión
presentan del mismo
una penetrancia difiere entre
incompleta
(menor
individuos. Poral ejemplo
100%) son: en elmosaicismo,
caso de una genes limitadosresponsable
mutación al sexo, imprinting
de acusaro influencias del
una enfermedad,
puede ambiente,
en algunos entre otros.
individuos ocasionar síntomas graves, en otros leves y en otros ningún
síntoma.
7.2 Expresividad variable
En equinos los cuatro
La expresividad defenotipos
un gen es despigmentados (sabino,
variable cuando el nivel ruano, del
de expresión tobiano
mismoy difiere
blanco) han sido
entre
atribuidos a diferentes
individuos. mutaciones
Por ejemplo en el casodelde gen KIT (receptor
una mutación de tirosinasa),
responsable de acusar una el enfermedad,
cual codifica para
puede de
un receptor en algunos
membrana individuos
y estaocasionar síntomas
involucrado en graves, en otros leves
la diferenciación, y Herencia
en otros no
proliferación ningún
yMendeliana
motilidad
síntoma.
de melanoblastos, espermatogonias y células intestinales de Cajal. La completa pérdida de
En equinos los cuatro fenotipos despigmentados (sabino, ruano, tobiano y blanco) han sido
función del gen causa muerte
algunos animalespre ysonperinatal.
atribuidos a diferentes mutaciones delcompletamente
gen KIT (receptor deblancos,
tirosinasa),otros
el cual pre-
codifica paraOtras alteraciones del mismo gen producen otros fenotipos.
El gen unKIT, también denominado W, muestraenexpresividad variable produciendo distintos
gradosde
receptor de
sentan
demelanoblastos,
membrana
despigmentación,
manchas y esta involucrado
grandes
algunos animales
y otros lamanchas
diferenciación,
son completamente
proliferación
pequeñas. y motilidad Tal es el caso de una inversión en la región regulatoria de
espermatogonias y células intestinales de Cajal. La blancos,
completa
Otras otros presentan
pérdida de
alteraciones del mismo gen producen otros(manchas
fenotipos. en
Talforma
es el vertical
caso de una inversión
manchas Estos
grandes
función fenotipos
y otros
del gen manchas
causa muerte están determinados
pre pequeñas.
y perinatal. por diferentes mutacio- KIT que produce el pelaje tobiano
en la región regulatoria de KIT que produce el pelaje tobiano (manchas en forma vertical
Estos fenotipos nesestán
El gen KIT, en KIT.
también Por ejemplo
denominado
determinados W, una
por deleción
muestra de una
expresividad
diferentes baseen
variable
mutaciones enKIT.
el exón
produciendo Pordistintos
abarcando
ejemploabarcando
una grandes áreas del cuerpo). Los homocigotas y los
grandes áreas del cuerpo). Los homocigotas y los heterocigotas son
grados
deleción de una de despigmentación,
base en elunexón algunos animales
15 producedel son completamente blancos,
un corrimiento del marco decodón otros presentan
lectura y unheterocigotas
codón
manchas15 produce
grandes corrimiento
y otros manchas pequeñas. marco de lectura y un fenotípicamente son fenotípicamente iguales (Fig. 8).
iguales (Fig. 8).
de stopEstos
prematuro, los animales heterocigotas muestran una marcada decoloración en patas,
y cuerpo,
de stop prematuro,
fenotipos están
los dehomocigotas
los animales heterocigotas
determinados por diferentes mutaciones muestransin
en KIT. Por unamanchas esta
ejemplo una
deleción una base en elson exóncompletamente blancos;delen
15 produce un corrimiento animales
marco de lectura y un codón
mutación no marcada
aparece decoloración
(Fig. 6). en patas y cuerpo, los homocigotas
de stop prematuro, los animales heterocigotas muestran una marcada decoloración en patas,
sonloscompletamente
y cuerpo, blancos; en animales
homocigotas son completamente blancos; ensin manchas
animales esta esta
sin manchas
mutación no aparece (Fig. 6).
mutación no aparece (Fig. 6).

Figura 8. Fenotipos Figura 8. Fenotipos

producidos porproducidos por unaen
una inversión inversión en la región
la región regulatoria del gen KIT
(Haase et al, 2008). regulatoria del gen KIT (Haase et al, 2008).
Figura 6. Distintos fenotipos producidos por una deleción en el exón 15
FiguraFigura
6. Distintos gen fenotipos
[Link] producidos
[Link]
Los dos por
producidostienen
primeros por unauna deleción
deleción
genotipo en en el exón
el exón
heterocigota 15gen
y15el del delKIT.
tercero genLos Cabe
KIT. Losaclarar que la aparición de manchas blancas no esta
dos primeros tienen genotipo
dos primeros tienen genotipo esheterocigota
heterocigota
homocigota yy (Haase
el tercero
el et es
tercero es
al,homocigota
homocigota
2009). (Haase et al, aclarar
(Haase
Cabe 2009).
et al, 2009).
que la aparición
producido de manchas
por el mismo mecanismoblancasen notodasesta
lasproducido
especies,por el mismo
mecanismo en ytodas tampoco es el mismo gen el que esta involucradoesta
las especies, y tampoco es el mismo gen el que en involucrado
la en la
Otra mutación que se presenta en dicho gen es una deleción determinación
de de este rasgo.
Otra mutación que se presenta en dicho gen es una deleción de 4 pb enEn el algunos
determinación de este rasgo.
casos un gen puede tener expresividad variable según la edad del individuo como
exón 7, dicha
4 pb
queen seelelexón 7, dicha mutación
gen es modifica el marco 4 de lectura
Otra mutación
mutación modifica presenta
marco deen dicho
lectura y produce una
un deleción
codón de stopde pbla diabetes en En
prematuro,en el
los exón
animales7, algunosy casos
dicha
humanos un gen
animales, que puede tener expresividad
normalmente se presenta en variable
la juventud, pero a
mutación y produce
modifica
heterocigotas el marco
pueden un
ser codón
de
totalmentedeblancos
lectura stop prematuro,
y produce un codón
o manchados losde
(Fig. animales hetero-
7).stop prematuro,
veces los presentarse
puede animales
según la edad
a edaddelmedia
individuo
o en como la diabetes en humanos y
la vejez.
heterocigotas cigotas
pueden pueden
ser totalmente blancos o blancos
ser totalmente manchados (Fig. 7).
o manchados ([Link]
Las 7). de animales,
la expresividad variable pueden ser: distintas
que normalmente se presenta en lamutaciones
juventud, peroen el mismo gen,
influencia del aambiente, mosaicismo somático, influencia
veces puede presentarse a edad media o en la vejez. de otros genes, características
limitadas al sexo, etc.
Las causas de la expresividad variable pueden ser: distintas
mutaciones en el mismo gen, in uencia del ambiente, mo-
7.3 Efectos desaicismo
la temperatura
somático, in uencia de otros genes, características
Los gatos siameses presentan
limitadas al sexo, una
etc. distribución característica del pelaje oscuro en las
extremidades, orejas y parte de la cara, donde la temperatura es ligeramente más fría que
en el resto del7.3 cuerpo. Como de
Efectos se explico anteriormente (punto 2), este fenotipo se produce
la temperatura
poretuna
Figura 7. Fenotipos producidos por deleción en el exón 7 del gen KIT (Haase sustitución en el exón 2 (G/A) del gen TYR, la cual determina el cambio de Glicina
al, 2009).
por Arginina en Losel gatos siameses
aminoácido 301presentan una distribución
de la enzima, característica
dicha sustitución modifica la estructura
Figura 7. Fenotipos producidos por deleción en el exón 7 del gen KIT
secundaria de la delproteína
pelaje y afecta en
oscuro su eficiencia
las enzimática.
extremidades, orejas y parte de la
(Haase et
Figura 7. Fenotipos producidos por deleción enal,
el2009).
exón 7 del gen KIT La (Haase et al, 2009).
expresión fenotípica
cara, donde de la
dicho alelo estáesinfluida
temperatura por elmás
ligeramente ambiente,
fría quedeenmanera que la
tirosinasa tiene efecto completo en las zonas frías del cuerpo pero no en las partes de mayor
el resto del cuerpo. Como se explico anteriormente (punto
temperatura, donde disminuye su acción, y la falta de pigmento determina coloración clara.
Por este mismo2), este fenotipo
motivo esta razase produce
cambia por una
el color sustitución
de su en elenexón
pelaje, siendo 2 más oscuro
invierno
que en verano.
157

8. Herencia relacionada con el sexo

 Soria, Liliana A. y Motter, Mariana M.

(G/A) del gen TYR, la cual determina el cambio de Glicina por génica para los caracteres totalmente ligados al sexo, tanto
Arginina en el aminoácido 301 de la enzima,totalmente ligados alligadas
dicha sustitución sexo, al
tanto ligadas
X como al Y. al X como al Y.
modifica la estructura secundaria de la proteína y afecta su
eficiencia enzimática.
La expresión fenotípica de dicho alelo está in uida por el
ambiente, de manera que la tirosinasa tiene efecto completo
en las zonas frías del cuerpo pero no en las partes de mayor
temperatura, donde disminuye su acción, y la falta de pig-
mento determina coloración clara. Por este mismo motivo
esta raza cambia el color de su pelaje, siendo en invierno
más oscuro que en verano.

8. Herencia relacionada con el sexo

La herencia relacionada con el sexo se refiere aFigura
la transmisión Figura 9. Denominación de las características ligadas al sexo según su
9. Denominación de las características ligadas al sexo según su ubicación en los
ubicación en los alosomas.
y expresión de rasgos que por estar codificados por genes alosomas.
localizados en las regiones diferenciales de los alosomas o
por tener un condicionamiento o limitaciónEn en su En las hembras mamíferas, en el caso de las características
lasexpresión
hembras mamíferas, en el caso de las características que genéricamente se las
fenotípica debida al sexo, no cumplen con denomina
la herencia men- que genéricamente se las denomina “ligadas al sexo” (ligadas
"ligadas al sexo" (ligadas al cromosoma X) la herencia es de tipo mendeliana ya
deliana. al cromosoma X) la herencia es de tipo mendeliana ya que
que al ser 2n, XX, ambos alosomas presentan homología total, por lo tanto dichos rasgos se
al ser 2n, XX, ambos alosomas presentan homología total,
8.1 Ligamiento al sexo comportan de modo similar a cualquier rasgo autosómico. En cambio, en los machos, al
por lo tanto dichos rasgos se comportan de modo similar a
poseer cromosomas sexuales morfológicamente diferentes, los loci que se ubican en la
Cuando una característica posee su locus sobre un cro- cualquier rasgo autosómico. En cambio, en los machos, al
región diferencial de ambos alosomas se expresan en hemicigosis. Además, su transmisión
mosoma sexual, tanto en el X como en el dependerá
Y, se dice que poseer cromosomas sexuales morfológicamente diferentes,
dela su ubicación, a descendientes hembras o machos dependiendo de que se
característica está ligada al sexo. En las hembras los loci que se ubican en la región diferencial de ambos
localicenmamífe-
en el X o el Y respectivamente.
ras, al poseer dos cromosomas X, estas características se alosomas se expresan en hemicigosis. Además, su transmi-
denominan ligadas al cromosoma X. En cambio, en el macho sión dependerá de su ubicación, a descendientes hembras
existe “heterosis estructural”, es decir al ser XY presentan o machos dependiendo de que se localicen en el X o el Y
8.1.1 Ligamiento total al X o ligamiento al sexo
respectivamente.
una región homóloga y otra diferencial dentro de los cromo-
somas sexuales. Los loci de características Las características
ubicadas en la que poseen su locus en la zona no apareante del cromosoma X se
denominan
región homólogas se denominan ligadas parcialmente al sexo totalmente8.1.1 Ligamiento
ligadas al [Link]
Por allo X o ligamiento
tanto, para unaal sexo
característica con dos alelos, el
A a
sexo heterogamético
y aquellas que se ubican en la región diferencial se denomi- estructural tendrá dos
Las características queAposeen genotipos
su locus posibles (X Y
en la zona no apa- / X Y), en cambio el
A A a a a
homogamético
nan ligadas totalmente al cromosoma X o al Y dependiendo estructural tendrá tres (X X / X X / X X ).
reante del cromosoma X se denominan totalmente ligadas
de su ubicación en uno u otro cromosoma Un ejemplo
sexual. (Fig. 9).de característica
al sexo. Por loligada al sexo
tanto, para es el color
una característica conanaranjado
dos alelos, en el gato. Esta
característica
El sexo heterogamético estructural (XY) posee una sola dosis es además
el sexo heterogamético estructural tendrá dos El
es epistática sobre el color de base. color de base es un rasgo
genotipos
autosómico y puede ser negro o azul. El alelo que determina color anaranjado es dominante
158
(XO), y modifica la expresión del color de base, por lo tanto un individuo que tiene al menos
un alelo XO presentará un fenotipo anaranjado (XO-). En cambio el alelo recesivo permite la
expresión del color de base, ya sea negro o azul.
Teniendo en cuenta los genotipos posibles para rasgos ligados al sexo en las hembras, estas
O O
totalmente ligados al sexo, tanto ligadas al X como al Y.

Herencia no Mendeliana

posibles (XAY / XaY), en cambio el homogamético estructural Hay que señalar que en la población felina pueden encontrar-
tendrá tres (XAXA / XAXa / XaXa). se individuos machos “carey”. Esto se debe a una alteración
Un ejemplo de característica ligada al sexo es el color anaran- del número de cromosomas sexuales, ya que su cariotipo
jado en el gato. Esta característica es además es epistática puede ser 2n+1= 39, XXY. La causa de dicha alteración
sobre el color de base. El color de base es un rasgo autosó- aneuploide podría ser una no-disyunción meiótica durante
Figura 9. Denominación de las características ligadas al sexo según su ubicación en los
mico y puede ser negro o azul. El
alosomas. alelo que determina color la gametogénesis de alguno de sus progenitores. En conse-
anaranjado es dominante (X ), y modifica la expresión del
O
En las hembras mamíferas, en el caso de las características que genéricamente se las
cuencia el fenotipo de estos individuos es similar al de las
color
denominade"ligadas
base,alpor lo (ligadas
sexo" tanto un individuoX)que
al cromosoma tiene es
la herencia al de
menos un
tipo mendeliana ya hembras heterocigotas, y también tendrán corpúsculo de Barr.
que al serO2n, XX, ambos alosomas presentan homología total, por O lo tanto dichos rasgos se
alelo
comportanX de presentará
modo similarun fenotiporasgo
a cualquier anaranjado
autosómico. (X -). En en
En cambio, cambio
los machos, al Otro ejemplo de característica ligada al sexo es la hemofilia.
el alelo recesivo permite la expresión del colorloci
poseer cromosomas sexuales morfológicamente diferentes, los deque base, ya en la Tanto la hemofilia A como la B son enfermedades hemo-
se ubican
región diferencial de ambos alosomas se expresan en hemicigosis. Además, su transmisión
sea negro
dependerá de o su azul.
ubicación, a descendientes hembras o machos dependiendo de que se rrágicas hereditarias recesivas simples ligadas al sexo, la
localicen en el X o el Y respectivamente.
Teniendo en cuenta los genotipos posibles para rasgos liga- primera afecta al factor VIII de la coagulación y la segunda
dos al sexo en las hembras, estas podrán ser homocigotas al IX. Los individuos heterocigotas no muestran síntomas de
8.1.1 Ligamiento total O Oal X o ligamiento al sexo
dominantes (X X ) y expresarán color anaranjado,
Las características que poseen su locus en la zona no apareante del cromosoma X se
las homo- la enfermedad, aunque sí presentan una actividad reducida
cigotas
denominanrecesivas (XoXalo)sexo.
totalmente ligadas el color
Por lode base
tanto, para (negro D- o
una característica azul dd)
con dos alelos, el del factor de coagulación correspondiente. En las especies
estructural tendrá dos genotipos posibles (X AY / XaY), en cambio el
ysexo
lasheterogamético
heterocigotas
homogamético el fenotipo
estructural tendrá tres (XAXcarey
A
/ XAXa o/X calicó.
a a
X ). Este fenotipo se en las que se ha descripto esta enfermedad (hombre, perro,
produce
Un ejemploporque la inactivación
de característica ligada al sexo de un es cromosoma
el color anaranjadoX es en al azar
el gato. Esta gato, caballo), todos los portadores son hembras, debido a
característica es además es epistática sobre el color de base. El color de base es un rasgo
yautosómico
determinará
y puedeque se formen
ser negro zonas
o azul. El alelo que de colorcolor
determina naranja
anaranjadoy otras
es dominanteque no existe un genotipo heterocigota en machos.
(XO), y modifica la expresión del color de base, por lo tanto un individuo que tiene al menos
de color de base. Las zonas de color naranja se producen
un alelo XO presentará un fenotipo anaranjado (XO-). En cambio el alelo recesivo permite la
La reducida actividad de factor VIII o IX que se observa fre-
por la inactivación del X portador del alelo recesivo (X ), por
expresión del color de base, ya sea negro o azul.
o
cuentemente en heterocigotas es probablemente una conse-
Teniendo en cuenta los genotipos posiblesOpara rasgos ligados al sexo en las hembras, estas
lo tanto
podrán ser el alelo dominante
homocigotas dominantes (X (X
O O ) inhibe el color de base. Las
X ) y expresarán color anaranjado, las homocigotas cuencia de la inactivación al azar del cromosoma X, entonces
zonas
recesivasdel
(XoXcolor
o
dede
) el color base
base se producen
(negro D- o azul dd)pory ellasfenómeno
heterocigotas inverso,
el fenotipo carey odependiendo del número de células que posean inactivado
calicó. Este fenotipo se produce porque la inactivación de un cromosoma X es al azar y
el color de
determinará quebase puede
se formen zonasexpresarse
de color naranja gracias
y otras de a la inactivación
color de base. Las zonas de uno u otro de los cromosomas X, se podrá encontrar desde
color naranja se producen por la inactivación del X portador del alelo recesivo (Xo), por lo
del X portador del alelo
O epistático.
tanto el alelo dominante (X ) inhibe el color de base. Las zonas del color de base se
hembras normales hasta aquellas que son enfermas.
producen por el fenómeno inverso, el color de base puede expresarse gracias a la También son ejemplo de rasgos ligados al sexo: el color ana-
inactivación del X portador del alelo epistático.
XO = Naranja (gen epistático - inhibe la expresión del color ranjado en el hamster y el daltonismo en el hombre.
O
de
X base)
= Naranja (gen epistático - inhibe la expresión del color de base)
Xo = No naranja (permite la expresión del color de base)
Xo = No naranja (permite la expresión del color de base) 8.1.2 Ligamiento al cromosoma Y
Las características ligadas al cromosoma Y se expresan ex-
FENOTIPOS Naranja Carey Negro o Azul clusivamente en el sexo heterogamético estructural y tienen
GENOTIPOS EN HEMBRAS O O
X X -- O o
X X D-/dd o o
X X D-/dd
su locus en la región no homóloga o diferencial del Y. Cuando
el sexo masculino es el heterogamético, el carácter totalmente
GENOTIPOS EN MACHOS XO Y-- Xo Y D-/dd ligado al cromosoma Y se denomina “holándrico” (en mamí-
feros) en cambio si el sexo femenino es el heterogamético
estructural se llama carácter “hologínico” (en aves).

159
 Soria, Liliana A. y Motter, Mariana M.

Para poder considerar al carácter totalmente ligado al cromo- o ausencia de cuernos en los ovinos de la raza Dorset Horn.
soma Y se deben dar las siguientes condiciones: En este caso un mismo alelo (Ho+) de un gen autosómico
1) que sólo se exprese en el sexo heterogamético estructural, determina presencia de cuernos (astado) y se comporta como
2) que se transmita a los descendientes del mismo sexo y dominante en machos y recesivo en hembras. En cambio
3) que no se exprese en individuos de sexo homogamético el otro alelo (Hop) determina ausencia de cuernos (mocho).
estructural. El siguiente cuadro resume las distintas alternativas genotí-
Ejemplos de este tipo de rasgos son: hipertricosis de orejas picas y fenotípicas posibles en ovinos Dorset Horn:
en humanos, además de los genes involucrados en el normal
desarrollo del sexo masculino como por ej SRY y SLY. FENOTIPOS EN HEMBRAS GENOTIPOS EN FENOTIPOS EN MACHOS
HEMBRAS Y MACHOS
8.1.3 Ligamiento parcial al sexo ASTADO Ho+Ho+ ASTADO

Las características que tienen sus locus en la región homó- MOCHO +

Ho Ho p ASTADO
loga de los cromosomas sexuales se denominan ligados
MOCHO MOCHO
parcialmente al sexo y tienen un tipo de herencia semejante HopHop

a cualquier rasgo autosómico, es decir que tendrán herencia El plumaje en aves es otro ejemplo de características influenciadas por el sexo. La presencia
mendeliana. La distancia entre genes parcialmente ligadas El plumaje en aves es otro ejemplo de características in uen-
de estrógenos determina plumas mas redondeadas y descoloridas, por lo tanto en las razas
pigmentadas las hembras presentarán plumaje más claro que los machos, a su vez con
al sexo se estima de la misma manera que para autosomas ciadas por el sexo. La presencia de estrógenos determina
plumas más cortas en el cuello y sin plumas de cobertura en la cola.
(ver capítulo 8, Ligamiento y mapas genéticos). plumas mas redondeadas y descoloridas, por lo tanto en las
El límite entre las regiones homólogas y no homólogas se lo razas pigmentadas las hembras presentarán plumaje más
8.3 Expresión limitada por el sexo
considera como 0% de recombinación de cada cromosoma Hayclaro que los que
características machos, a su vez
sólo se expresan en con plumas
un sexo debido más cortas anatómicas,
a limitaciones en el
fisiológicas o de comportamiento, a pesar de que la información genética está presente en el
sexual. Por lo tanto, la probabilidad de transmisión de una cuello y sin plumas de cobertura en la cola.
genoma de ambos sexos, ya los genes que codifican dichos rasgos se ubican en autosomas.
característica ligada parcialmente al sexo conjuntamente Dentro de este grupo de características se clasifican algunos atributos de producción como
producción de leche, de huevos, etc. También caracteres que hacen a la fertilidad, como
con el cromosoma sexual que la porta, va a depender de la
8.3 Expresión limitada por el sexo
fecundidad, habilidad materna, potencia sexual, criptorquidismo, etc.
distancia, medida en porcentaje de recombinación, que existe
entre el locus considerado y el punto límite de recombinación. Hay características que sólo se expresan en un sexo debido
9. Genética del color del manto
El color del manto es un rasgo que tiene un control genético complejo en todas las especies
a limitaciones anatómicas, fisiológicas o de comportamiento,
domésticas debido a que participan en su determinación varios genes. Como ejemplo en la
8.2 Características influenciadas por el sexo o a pesar de que la información genética está presente en el
Tabla 3 se resume la información sobre los diferentes genes responsables de controlar dicho
rasgo en caninos y en la Figura 10 se ejemplifica, para tres genes, los fenotipos posibles de
variación de la dominancia genoma de ambos sexos, y los genes que codifican dichos
cada genotipo.
Mayor información sobre esta característica en las distintas especies domésticas se puede
rasgos se ubican en autosomas.
Se ha observado que algunas características monogénicas hallar en el sitio web de la OMIA o en las referencias bibliográficas citadas al final del
manifiestan diferencias en su expresión fenotípica de acuer- Dentro de este grupo de características se clasifican algu-
capítulo.

do al sexo, debido a una variación de la dominancia de los nos atributos de producción como producción de leche, de
alelos. Este cambio en la expresión de los alelos se debe al huevos, etc. También caracteres que hacen a la fertilidad,
efecto de hormonas sexuales. como fecundidad, habilidad materna, potencia sexual, crip-
Un ejemplo clásico de la variación de la dominancia de los torquidismo, etc.
alelos de un gen, se presenta en la característica presencia

160
 Protein 1)
Negro en hocio, orejas y pecho
Em en Doberman (conocido como
E (Extension) o MC1R “máscara”)
Extensión de la
(Melanocortin 1 E+ negro uniforme
eumelanina
Receptor) Amarillo (Labrador o Golden
e (epistático)
Retriever)
Serie: Em > E+ > e
Herencia no Mendeliana KB Negro
K (Kurokami) o CBD103 Distribución del kbr Atigrado

9. Genética del color del manto genes

(-defensin)responsables de controlar
pigmento K+ (o ky) dicho rasgo Amarillo en caninos y
Serie: KB > kbr > k+
en la que
Genes Figura 10 lase
determinan ejemplifica,
dilución del color para tres genes, los fenotipos
El color del manto es un rasgo que tiene un control genético posibles de cadaPermite genotipo.
o no la
C+ Color uniforme
cCh Chinchilla
complejo en todas las especies domésticas debido a que Mayor
C (Albino) información sobre
expresión del esta característica
ca (epistático) Albino
en las distintas
pigmento
participan en su determinación varios genes. Como ejemplo especies domésticas se puede hallar
+
Serie: C > c > c Ch
en a
el sitio web de la OMIA
+
en la Tabla 3 se resume la información sobre los diferentes D (Dilute) o MLPH Dilución de D
o en las referencias bibliográficas citadas al final del capítulo. No diluye
(melanophilin) eumelanina d Diluye
P Dilución de P No diluye
Tabla 3. Genes involucrados en la determinación del color del manto en caninos (Schmutz Tabla 3. Genes involucrados ambasenmelaninas
la determinación
p del color del manto en (no
Diluye caninos (Schmutz
completamente)
Tabla
and Berryere, 3. Christopher
2007; Genes involucrados
et al, 2013). en la determinación del color del manto en caninos
and Berryere,(Schmutz and
2007; Christopher Berryere,
Dilución I2007
deet al, 2013). 1 ChristopherNo et al, 2013).
diluye
I
feomelanina I2 (codominate) Diluye
Encanecimiento G Progresivo encanecimiento
G (Graying)
GEN EFECTO ALELOS FENOTIPO GEN (graying)
EFECTO g ALELOS No grayingFENOTIPO
Genes que determinan el color de base Genes que determinan manchas
el color de base
Ay Amarillo Ay
M Blanco
Amarillo
aw Agutí aw+
m Agutí
Coloreado
A (Agouti) o ASIP M (Merle) ooSILV
A (Agouti) ASIP Merle
Distribución del Black-and-tan (negro y fuego Distribución del Black-and-tan
Manchas oscuras(negro
sobrey un
fuego
(Agouti Signaling at (Agouti Signaling at + = Merle
Mm
pigmento típico del Ovejero) pigmento típico del
fondo grisOvejero)
Protein) Protein)
a Negro sólido a Arlequín cuando es además
Negro sólido
Serie: Ay > aw > at > a Serie: Ay > aw > at > a M1M1 o M1M2 (blanco con
H (letal recesivo)
B (Brown) o TYRP1 B Negro H (Harlequín)
B (Brown) o TYRP1 Arlequín B manchas
Negro negras del Gran
Color del Color del Danés)
(Tyrosinase Related (Tyrosinase Related
pigmento b (bs, bd y bc)1 Marrón pigmento s
b (b , b y b )d c 1
Marrón
Protein 1) Protein 1) h No Arlequín
Negro en hocio, orejas y pecho Color
Negrosólido con orejas
en hocio, algunasy pecho
+
Em en Doberman (conocido como SE m
manchas
en Dobermanen pecho o como
(conocido
E (Extension) o MC1R “máscara”) E (Extension) o MC1R extremidades
“máscara”)
Extensión de la Extensión de la
(Melanocortin 1 E+ negro uniforme (Melanocortin 1 E+ Irish
negrospotting:
uniformemanchas en
eumelanina S (Spotting) o MITF eumelanina
Receptor) Amarillo (Labrador o Golden Receptor) hocico,
Amarillofrente, pecho,
(Labrador o Golden
e (epistático) (microphthalmia- Manchas blancas sei (epistático)
Retriever) extremidades
Retriever) y cola (ej.
associated transcription (Spotting)
Serie: Em > E+ > e m
Serie: E > E > e + Border Collie)
factor)
KB Negro KB Piebald:
Negro amplias áreas
p
K (Kurokami) o CBD103 Distribución del kbr Atigrado K (Kurokami) o CBD103 Distribución del skbr despigmentadas
Atigrado (blancas) y
(-defensin) pigmento K+ (o ky) Amarillo (-defensin) pigmento K+ (o ky) zonas pigmentadas (negras)
Amarillo
w
Serie: KB > kbr > k+ sSerie: KB > kbr > k+ Blanco
Genes que determinan la dilución del color Genes que determinan la dilución del color “Ticking”: pelos de color sobre
C+ Color uniforme TC+ una
Colorbase de pelos blancos.
uniforme
Permite o no la T (Ticking) Ticking
Permite o no la
cCh Chinchilla cCh Típico color del Dálmata
Chinchilla
C (Albino) expresión del C (Albino) expresión del
ca (epistático) Albino ct a (epistático) No “Ticking”
Albino
pigmento 1
Tres mutaciones diferentespigmento
generaron losSerie: tres alelos
Serie: C+ > cCh > ca C+ > crecesivos
Ch
> ca que tienen el mismo efecto
D (Dilute) o MLPH Dilución de D+ No diluye (alelos
D nulos).
(Dilute) o MLPH Dilución de D+ No diluye
(melanophilin) eumelanina d Diluye (melanophilin) eumelanina d Diluye
P Dilución de P No diluye P Dilución de P No diluye
ambas melaninas p Diluye (no completamente) ambas melaninas p Diluye (no completamente)
Dilución de I1 No diluye Dilución de I1 No diluye
I I
feomelanina I2 (codominate) Diluye feomelanina I2 (codominate) Diluye
Encanecimiento G Progresivo encanecimiento Encanecimiento G Progresivo encanecimiento
G (Graying) G (Graying)
(graying) g No graying (graying) g No graying
Genes que determinan manchas Genes que determinan manchas
M Blanco M Blanco
m+ Coloreado m+ Coloreado
M (Merle) o SILV Merle M (Merle) o SILV Merle
Manchas oscuras sobre un Manchas oscuras sobre un161
Mm+ = Merle Mm+ = Merle
fondo gris fondo gris
Arlequín cuando es además Arlequín cuando es además
M1M1 o M1M2 (blanco con M1M1 o M1M2 (blanco con
H (letal recesivo) H (letal recesivo)
H (Harlequín) Arlequín manchas negras del Gran H (Harlequín) Arlequín manchas negras del Gran
Danés) Danés)
h No Arlequín h No Arlequín
 Soria, Liliana A. y Motter, Mariana M.

Figura 10. Fenotipos posibles de color del manto según genotipos de los genes E, A y K del
Figura 10. Fenotipos posibles de color del manto según genotipos de los genes E, A y K del canino (http://
.[Link]/en/test/locus-k/).
canino ([Link]

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163
 Ligamento y Mapeo Génico

Ligamento y Mapeo Génico

Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel

1. Introducción
Como ya hemos visto en el capítulo de Genética Mendelia- De esa manera, Sutton postula, al mismo tiempo que Theodor
na, los estudios realizado por Mendel en arvejilla de jardín Boveri en Alemania, la Teoría cromosómica de la herencia,
(Pisum sativum) demostraron la transmisión de los factores conocida como “Teoría Cromosómica de Sutton-Boveri” que
de la herencia (genes) en forma independiente uno de otro, plantea lo siguiente:
es decir, la transmisión de un factor o característica no in- 1) Los genes están situados en los cromosomas
uye en la transmisión de otra característica, obteniéndose 2) La ordenación de los mismos es lineal
combinaciones todas igualmente probables (Recombinación 3) Al fenómeno genético de la recombinación le corres-
Intercromosómica). Estas combinaciones de genes son posi- ponde un fenómeno citológico de intercambio de seg-
bles si los mismos se ubican en distintos cromosomas, dato mentos cromosómicos.
que Mendel desconocía.
Hacia principios de 1903, Walter Sutton demostró por medio Posteriormente, en el año 1910 Thomas Morgan, interesado
de sus trabajos en saltamontes (Brachystola magna) la rela- por la aplicación de las leyes de Mendel redescubiertas a
ción entre la segregación de los cromosomas y la transmisión principio de siglo, demuestra por sus trabajos hechos en la
independiente de los genes, confirmando las leyes de Mendel mosca de la fruta (Drosophila melanogaster) que existe una
mediante la determinación de los cromosomas como unida- tendencia en la transmisión de algunas características locali-
des de transmisión. Este planteo presentaba una dificultad: zadas en el cromosoma X. A partir de estos experimentos se
existían más características que se transmitían mendeliana- plantea el concepto de “genes ligados” como aquellos genes
mente (en forma independiente) que cromosomas, es decir, que se localizan en el mismo cromosoma y tienden a perma-
no hay una cantidad suficientes de cromosomas para que necer juntos y a no sufrir segregaciones y combinaciones al
porten cada uno una característica transmisible (un gen), azar en sucesivas generaciones. Se transmiten así como un
por lo tanto los cromosomas deberían contener más de un grupo, constituyendo un “grupo de ligamiento”.
gen cada uno y recombinarse para poder transmitirse de
generación en generación.

167
 Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel

2. Determinación de ligamiento observar este comportamiento de transmisión independiente

en varios de sus experimentos pero no en todos. Analicemos
Con el fin de determinar la herencia de distintas caracterís- ahora un ejemplo de la transmisión de otras dos caracterís-
ticas en Drosophila, Morgan realizó apareamientos entre ticas: desarrollo de alas y el color de los ojos. La caracterís-
individuos dihíbridos por cruzamiento de líneas puras (F1), tica desarrollo de las alas está determinada por el gen vg+,
con individuos homocigota recesivo para los distintos pares el cual es dominante sobre el alelo vg, que codifica para
génicos, es decir, realizó “cruzamientos de prueba” (ver ca- alas vestigiales. La característica color de ojos también está
pítulo Genética Mendeliana). codificada por dos alelos y fue descripta en el cruzamiento
anterior, donde: pr+, codifica para ojos rojos y es dominante
Analicemos el ejemplo de dos características localizadas en sobre pr, que codifica para color de ojos púrpura.
2. Determinación de ligamiento
cromosomas no homólogos de Drosophila: el gen del color Realizando un cruzamiento de prueba entre un macho di-
Con el fin de determinar la herencia de distintas características en Drosophila,
de cuerpo (e), ubicadoentre
Morgan realizó apareamientos en el cromosoma
individuos dihíbridos 3,
porycruzamiento
el gen dedepig- híbrido (pr+pr vg+vg) con una hembra homocigota recesiva
líneas puras
mentación (F1), con individuos homocigota recesivo
de ojos (pr) localizado en el cromosoma [Link] los distintos pares (prpr vgvg) se obtuvo una descendencia de 2839 individuos
génicos, es decir, realizó “cruzamientos de prueba” (ver capítulo Genética
Mendeliana). con la siguiente distribución:
Alelo e+: color de cuerpo marrón claro, dominante
Analicemos el ejemplo de dos características localizadas en cromosomas no
Alelo e:
homólogos de color de cuerpo
Drosophila: marrón
el gen del color deoscuro brillante
cuerpo (e), ubicado (ébano)
en el
CRU AMIENTO DE PRUEBA
cromosoma 3, y el gen de pigmentación de ojos (pr) localizado en el
cromosoma 2. MACHO X HEMBRA
Alelo pr+ +: pigmentación ojos rojos, dominante GENOTIPO + +
pr pr vg vg prpr vgvg
Alelo e : color de cuerpo marrón claro, dominante
Alelo
Alelo pr: ojos
e: color púrpuras
de cuerpo marrón oscuro brillante (ébano) GAMETAS: pr+vg+ pr+vg prvg+ prvg prvg
+
Alelo pr : pigmentación ojos rojos, dominante
Realizando cruzamientos
Alelo pr: ojos púrpuras de prueba con individuos dihíbridos
GAMETAS pr+vg+ Prvg pr+vg prvg+
(F1), se puede observar lo siguiente: GENOTIPOS pr+pr vg+vg prpr vgvg pr+pr vgvg prpr vg+vg
FENOTIPOS Ojos rojos, Ojos púrpuras, Ojos rojos, Ojos púrpura,
Realizando cruzamientos de prueba con individuos dihíbridos (F1), se puede alas normales alas vestigiales alas vestigiales alas normales
FENOTIPO marrón claro, ojos rojos X ébano, ojos púrpura
observar lo siguiente: PROPORCION 1339/2839 1195/2839 151/2839 154/2839
TIPOS PARENTALES: 89,3% RECOMBINANTES: 10,7%
GENOTIPO FENOTIPO marróne+e pr+pr
claro, ojos rojos X ébano,ee
ojosprpr
púrpura
FILIAL 2: GENOTIPO e+e pr+pr ee prpr
Como puede observarse los resultados no se ajustan a lo que se esperaría en
FILIAL 2:
un cruzamiento con transmisión independiente. La mayoría de la descendencia
Como puede
(89,3%) recibió observarse
combinaciones los resultados
parentales no
de alelos (pr+vg + se ajustan a lo
y prvg), mientras
GAMETAS e+pr+ e+pr epr+ epr
epr e+e pr+pr e+e prpr ee pr+pr ee prpr
que
que los serestantes
esperaría en recibieron
(10,7%) un cruzamiento connuevas,
combinaciones transmisión
que no se inde-
hallaban en los progenitores del dihíbrido, es decir en la generación parental.
FENOTIPO Marrón claro, Marrón claro, bano, bano, pendiente. La mayoría de la descendencia (89,3%)
Dicho de otra manera, los dos genes considerados en este cruzamiento tienden
recibió
ojos rojos ojos púrpuras ojos rojos ojos púrpuras
PROPORCIONES 25 % 25 % 25 % 25 % combinaciones
a transmitirse juntos, parentales de alelos
como cabría esperar si se(pr +
vg+ y prvg),
encuentran ligados mientras
en un
mismo cromosoma y los que se observan en menor proporción surgieron por
que los restantes (10,7%) recibieron combinaciones
una recombinación entre los genes dando origen a fenotipos recombinantes
nuevas,
Como existe transmisión independiente aparecen en la descendencia cuatro
Como existe transmisión independiente aparecen en la des-
fenotipos distintos en proporciones aproximadamente iguales (25% para cada
que no se hallaban
(Recombinación en los progenitores
Intracromosómica). Dado que Morgan delconocía
dihíbrido, es decir
el quiasma
como evento meiótico, determinó que dicho intercambio de segmentos durante
cendencia cuatro
uno), confirmándose la fenotipos distintos
3er Ley de Mendel. en proporciones
Morgan y sus colaboradores apro- en la generación parental. Dicho de otra manera, los dos ge-
paquitene en profase I, era el responsable de la aparición de los recombinantes
pudieron observar este comportamiento de transmisión independiente en varios
ximadamente iguales (25% para cada uno), confirmándose
de sus experimentos pero no en todos. Analicemos ahora un ejemplo de la
nes considerados
(entrecruzamiento en este cruzamiento tienden a transmitirse
o croosing-over).
la 3er Leydedeotras
transmisión Mendel. Morgan ydesarrollo
dos características: sus colaboradores
de alas y el colorpudieron
de los
+
juntos, como cabría esperar si se encuentran ligados en un
Si observamos los resultados del cruzamiento de prueba veremos que se
ojos. La característica desarrollo de las alas está determinada por el gen vg , el
puede calcular, estudiando la descendencia, las frecuencias en que se
cual
168es dominante sobre el alelo vg, que codifica para alas vestigiales. La presentan tanto los fenotipos parentales como los fenotipos recombinantes. De
característica color de ojos también está codificada por dos alelos y fue
esa observación se puede determinar la Frecuencia de Recombinación. La
descripta en el cruzamiento anterior, donde: pr+, codifica para ojos rojos y es
frecuencia de recombinación se calcula como el cociente entre los fenotipos
dominante sobre pr, que codifica para color de ojos púrpura.
recombinantes de un cruzamiento de prueba y el total de fenotipos
Realizando un cruzamiento de prueba entre un macho dihíbrido (pr +pr vg+vg)
con una hembra homocigota recesiva (prpr vgvg) se obtuvo una descendencia Fenotipos recombinantes 151 + 154
de 2839 individuos con la siguiente distribución: Frecuencia de recombinación (p)= ----------------------------------= ----------------= 10,7 %
 3. Fases de ligamiento
Los genes pueden estar ligados en los cromosomas en distintas “fases”,
Ligamentodependiendo
y Mapeo Génicodel tipo de alelos que se hallen ligados. Se dice que están ligados
en fase de repulsión (o en trans) cuando el alelo dominante de un par génico
mismo cromosoma y los que se observan en menor proporción(A) y dominante
el recesivo sobre
de otro par (b) se hallan
el cromosoma localizados
homólogo. Por otrosobre
lado,un
se mismo
surgieron por una recombinación entre los genes dando origen cromosoma, y los correspondientes alelos recesivo y dominante
define ligamiento en fase de acoplamiento (o cis) cuando los sobre el
cromosoma homólogo. Por otro lado, se define ligamiento en fase de
a fenotipos recombinantes (Recombinación Intracromosómica). alelos dominantes de los dos genes en estudio se localizan
acoplamiento (o cis) cuando los alelos dominantes de los dos genes en estudio
Dado que Morgan conocía el quiasma como evento meiótico,se localizanen el mismo cromosoma,
en el mismo mientras
cromosoma, que losque
mientras alelos
los recesivos de
alelos recesivos de
determinó que dicho intercambio de segmentos durante pa-dichos dichos genes se hayan ligados en el cromosoma
genes se hayan ligados en el cromosoma homólogo. homólogo.
quitene en profase I, era el responsable de la aparición de los 3. Fases de ligamiento
Los genes pueden estar ligados en los cromosomas en distintas “fases”,
recombinantes (entrecruzamiento o croosing-over). dependiendo del tipo de alelos que se hallen ligados. Se dice que están ligados
Si observamos los resultados del cruzamiento de prueba en fase de repulsión (o en trans) cuando el alelo dominante de un par génico
(A) y el recesivo de otro par (b) se hallan localizados sobre un mismo
veremos que se puede calcular, estudiando la descendencia, cromosoma, y los correspondientes alelos recesivo y dominante sobre el
cromosoma homólogo. Por otro lado, se define ligamiento en fase de
las frecuencias en que se presentan tanto los fenotipos paren- acoplamiento (o cis) cuando los alelos dominantes de los dos genes en estudio
tales como los fenotipos recombinantes. De esa observación se localizan en el mismo cromosoma, mientras que los alelos recesivos de
dichos genes se hayan ligados en el cromosoma homólogo.
se puede determinar la Frecuencia de Recombinación. La
frecuencia de recombinación se calcula como el cociente
entre los fenotipos recombinantes de un cruzamiento de
prueba y el total de fenotipos Las dos fases de ligamiento observadas en los experimentos
en Drosophila también se producen en mamíferos. Tomemos
Fenotipos recombinantes 151 + 154 Las dos fases de
a modo de ejemplo
ligamiento dos observadas
genes del en los experimentos
bovino ubicados en en Drosophila
el cro-
Frecuencia de recombinación (p)= ----------------------------------= --------------= 10,7 %también se producen en mamíferos. Tomemos a modo de ejemplo dos genes
Total de Fenotipos 2839 mosoma 23 (BTA23): el gen de la prolactina (PRL) y el gen
del bovino ubicados en el cromosoma 23 (BTA23): el gen de la prolactina (PRL)
de ladeMolécula
y el gen la Molécula de Histocompatibilidad
de Histocompatibilidad clase II (BoLA-D
clase B).
II (BoLA-DQB). Si
Lasconsideramos
Si dos fases de ligamiento
dos observadas
alelos para en
cadalos gen
experimentos
en una en Drosophila
población:
Expresado de otra manera, existe una probabilidad de que elconsideramos dos alelos para cada gen en una población:
también se producen en mamíferos. Tomemos a modo de ejemplo dos genes A y a para PRL y B
10% de la descendencia tenga una nueva combinación de alelosy b para Adelyelbovino
agen
para PRL en
BoLA-DQB,
ubicados y Bel ydependiendo
b para el23gen
cromosoma deBoLA-D
cómo
(BTA23): sonde
el gen B,ladependiendo
heredados
prolactina los
(PRL)alelos de
y el gen de de
la ligamiento)
Molécula de seráHistocompatibilidad clase de
II (BoLA-DQB). Si
ligados. Por convención, si denominamos "p" a la frecuencia deestos genes de (fase
cómo
consideramos sondosheredados losgen
alelos para cada
laen
determinación
alelos unade estos
población: genes
A
cuál(fase
y a para
combinación
PRL yde B
es
la parental y cuál la
gen recombinante.
ligamiento) será la determinación de cuál combinación es la
y b para el BoLA-DQB, dependiendo de cómo son heredados los alelos de
recombinación entre dos pares de genes ligados, las gametas estos genes (fase de ligamiento) será la determinación de cuál combinación es
formadas por los individuos diheterocigotas presentarán frecuen- parental
la parental yy cuál
cuál la recombinante.
la recombinante.

cias que dependerán de las combinaciones génicas originales. FASE DE ACOPLAMIENTO FASE DE REPULSION
FASE DE ACOPLAMIENTO FASE DE REPULSION

3. Fases de ligamiento
Los genes pueden estar ligados en los cromosomas en dis-
tintas “fases”, dependiendo del tipo de alelos que se hallen
ligados. Se dice que están ligados en fase de repulsión (o
BoLA-B/PRL-A = (1 - P) BoLA-B/PRL-a = (1 - p)
en trans) cuando el alelo dominante de un par génico (A) PARENTALES BoLA-b/PRL-a = (1 - p) BoLA-b/PRL-A = (1 - p)
y el recesivo de otro par (b) se hallan localizados sobre un BoLA-B/PRL-A
BoLA-B/PRL-a = p(1 - P) BoLA-B/PRL-a
BoLA-B/PRL-A = p= (1 - p)
mismo cromosoma, y los correspondientes alelos recesivo y PARENTALES
RECOMBINANTES BoLA-b/PRL-A =
BoLA-b/PRL-a = p(1 - p) BoLA-b/PRL-a = p
BoLA-b/PRL-A = (1 - p)

BoLA-B/PRL-a = p BoLA-B/PRL-A = 169

p
RECOMBINANTES BoLA-b/PRL-A = p BoLA-b/PRL-a = p4
 Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel

La distancia existente entre los loci de BoLA-D R y PRL permite y se observarán las 4 combinaciones gaméticas mencionadas,
la recombinación en el 9% de las meiosis. Cuando los genes dos parentales y dos recombinantes.
se transmiten en fase de acoplamiento se formarán un total de Por lo tanto, que entre dos pares génicos en estudio haya liga-
gametas recombinantes igual a p (frec. de recombinación), de miento total o parcial dependerá de la distancia física que los
las que la mitad ( p) son BoLA-B/PRL-a, y la otra mitad son de separa a mayor distancia es mayor entonces la probabilidad
BoLA-b/PRL-A. La frecuencia de gametas parentales se calcula que exista crossing-over y viceversa, a menor distancia mayor
como el complemento de la frecuencia de recombinación: 1-p es la probabilidad de que se transmitan juntos y pasen así a la
de forma tal que en acoplamiento esperaría una frecuencia de descendencia.
(1-p) para cada tipo de gameta parental (BoLA-B/PRL-A y Cuando la distancia entre los genes ligados parcialmente es
BoLA-b/PRL-a). Si consideramos la transmisión del par génico muy grande comienzan a aparecer eventos de dobles entre-
en fase de repulsión el concepto aplicado a las frecuencias es cruzamiento entre los genes durante la meiosis, lo que anula
el mismo, solo que se invierte que alelos portan las gametas la observación de gametas recombinantes. Durante la meiosis
parentales y recombinante, es decir: las parentales serán las muchos son los meiocitos en los cuales ocurre entrecruzamien-
gametas BoLA-B/PRL-a y BoLA-b/PRL-A, con una frecuencia to, en algunos dobles, en otros simples pero como resultado
de (1-p) cada una y las recombinantes, las que tengan la final siempre el porcentaje de recombinación entre dos genes
combinación BoLA-B/PRL-A y BoLA-b/PRL-a, ambas con una tomará como máximo el valor del 50% (p=0.5), no pudiendo
frecuencia de p. observarse mayor frecuencia de gametas recombinantes que
de parentales. En la figura 2 se esquematiza un caso de doble
entrecruzamiento que no genera recombinación entre los genes.
4. Tipos de ligamientos En la Figura 2 se muestra que sólo se obtendrán gametas re-
Puede ocurrir que entre dos pares de genes ligados que combinantes cuando ocurrió un entrecruzamiento simple, ya que
pertenecen a un mismo grupo de ligamiento no se produzca no se observa recombinación en las cromátides que sufrieron un
el fenómeno de crossing-over y como consecuencia no se doble entrecruzamiento. Cuando la distancia entre dos genes es
obtengan productos recombinantes. Esto ocurre cuando los grande, podemos suponer que en el 100 % de los meiocitos de
genes están localizados tan cerca en el cromosoma que casi un individuo se produjo al menos un entrecruzamiento entre los
siempre se transmiten juntos, existiendo entre ellos lo que loci considerados, pero debido a que el 50% de los crossing-over
se denomina ligamiento total, completo o absoluto, donde la no generan recombinación, se espera obtener igual proporción
frecuencia de recombinación (p) tiende a cero. Por lo tanto, de ambas clases de gametas:
existiendo ligamiento total entre los dos pares génicos, al
realizarse un cruzamiento de prueba, solo se obtendrán en la Tipo parental = 1/2 (1 - p) = 1/2 (1 - 0,5) = 0,25 = 25 %
descendencia dos clases fenotípicas, ambas combinaciones
en proporciones iguales y coincidentes con las combinaciones Tipo parental = 1/2 (1 - p) = 1/2 (1 - 0,5) = 0,25 = 25 %
parentales.
Cuando la distancia existente entre dos genes que se encuen- Tipo recombinante = 1/2 p = 1/2 x 0,5 = 0,25 = 25 %
tran ligados es la suficiente como para permitir la existencia de
crossing-over, se dice que entre los genes hay ligamiento parcial Tipo recombinante = 1/2 p = 1/2 x 0,5 = 0,25 = 25 %

170
 Ligamento y Mapeo Génico

Figura 1. Comparación entre ligamiento total y parcial.

Figura 1. Comparación entre ligamiento total y parcial.

Cuando la distancia entre los genes ligados parcialmente es muy grande

comienzan a aparecer eventos de dobles entrecruzamiento entre los genes
durante la meiosis, lo que anula la observación de gametas recombinantes.
Durante la meiosis muchos son los meiocitos en los cuales ocurre 171
entrecruzamiento, en algunos dobles, en otros simples pero como resultado
final siempre el porcentaje de recombinación entre dos genes tomará como
máximo el valor del 50% (p=0.5), no pudiendo observarse mayor frecuencia de
 Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel

Figura 2. Esquema del resultado del crossing-over en un par de cromosomas homólogos para dos genes (A,a y B,b) en la etapa de Profase I. Se
Figura 2. Esquema del resultado del crossing-over en un par de cromosomas
representan algunas de las alternativas posibles, ya que cuando la distancia es muy grande existen muchos eventos de recombinación entre los genes,
homólogos paraocurren
las cuales dos entre
genes (A,a ycromátides
las distintas B,b) endela etapa
ambos de Profase
cromosomas I. Se representan
homólogos.
algunas de las alternativas posibles, ya que cuando la distancia es muy grande
172
existen muchos eventos de recombinación entre los genes, las cuales ocurren
entre las distintas cromátides de ambos cromosomas homólogos.
 Ligamento y Mapeo Génico

Estas proporciones no difieren del postulado en la Ley de la poder identificar descendientes con fenotipos recombinantes.
Transmisión Independiente de los genes, esto nos indica que En organismos que generan menos descendencia y los
genes ubicados muy lejos cromosoma se comportan como intervalos generacionales son altos (bovinos, equinos, etc.)
aquellos genes que se ubican en cromosomas diferentes. y no siempre es posible la realización de apareamientos di-
rigidos (humanos), la construcción de mapas cromosómicos
se realiza por técnicas más modernas, por ejemplo en la
5. Mapa Génico o de Ligamiento secuenciación de fragmentos cromosómicos (ver capitulo
Tipos de Mapas, secuenciación del genoma).
El mapa génico o de ligamiento es la representación de las
distancias genéticas relativas que separan los locus en un
cromosoma. Un método muy utilizado inicialmente para es- 5.1. Elaboración de los Mapas de Ligamiento
tablecer el ligamiento ha consistido en medir las frecuencias
El entrecruzamiento entre determinados pares de genes liga-
de recombinación entre tres pares de genes que segregan
dos se produce con frecuencias constantes y características.
en un solo experimento.
El método más comúnmente utilizado para confeccionar ma- Este concepto nos lleva a concluir que cada gen tiene un locus
pas genéticos o de ligamiento en Drosophila y muchos otros determinado y bien definido en el cromosoma. Los valores de
organismos es la denominada "prueba de tres puntos". Esta recombinación se pueden utilizar para demostrar un orden
prueba consiste en medir las frecuencias de recombinación consecutivo determinado en el grupo de ligamiento e incluso
entre tres pares de genes que segregan en un mismo expe- poder conocer las distancias que separan los distintos locus.
rimento. ¿Por qué tres pares de genes? La respuesta es que Cuando en 1911 Morgan y sus discípulos describieron el liga-
para determinar la distancia entre genes muy alejados en el miento en genes de Drosophila, plantearon que probablemen-
cromosoma, es conveniente emplear un tercer gen (marcador te existía una relación entre la frecuencia de recombinación y
génico o gen marcador) entre los dos genes extremos con la distancia lineal existente entre los genes en el cromosoma
el fin de detectar cualquier entrecruzamiento doble o en un (grupo de ligamiento). Según este punto de vista la distancia
número par que ocurriese entre los anteriores sin el marcador entre los genes A y B, y entre B y C, permitiría predecir la
intermedio los productos de los dobles entrecruzamientos distancia entre los genes A y C, si los tres genes estuviesen
podrían presentarse como tipos parentales, y por lo mismo ordenados linealmente en el mismo grupo de ligamiento. De
podríamos subestimar la distancia de mapa real (ver dobles este modo, si la ordenación lineal es A, B y C y se utiliza la
entrecruzamientos). frecuencia de recombinación como medida de separación o
Sobre la base de estos experimentos se han confeccionado distancia, la suma de las frecuencias de recombinación entre
los mapas genéticos de los cromosomas de muchos orga- A y B, y entre B y C, tendría que ser igual a la frecuencia de
nismos vivos, tales como los de Drosophila, guisante de olor, recombinación entre A y C (Fig. 3).
maíz, ratón, conejo, gallina, Neurospora, todas especies de En 1913, Alfred Sturtevant, un discípulo de Morgan logra
alto índice reproductivo. Sin embargo es un método poco confeccionar el primer mapa de ligamiento utilizando la in-
eficaz porque cuando la distancia que separa a los genes formación disponible sobre los cruzamientos realizados en
ligado en muy corta se requieren miles de descendientes para Drosophila. Para relacionar la frecuencia de recombinación
173
y C, si los tres genes estuviesen ordenados linealmente en el mismo grupo de
ligamiento. De este modo, si la ordenación lineal es A, B y C y se utiliza la
frecuencia de recombinación como medida de separación o distancia, la suma
de las frecuencias de recombinación entre A y B, y entre B y C, tendría que ser
igual a la frecuencia de recombinación entre A y C (Fig. 3).
Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel

De esta manera se pudo determinar la relación entre la re-

combinación intracromosómica y la distancia entre genes, de
modo que a mayor distancia existente entre dos locus exista
mayor probabilidad de recombinación entre ellos.

5.2. Dobles Entrecruzamientos

El entrecruzamiento, proceso que produce recombinación,
es el intercambio de segmentos cromosómicos. Podemos
afirmar entonces que reconocemos al entrecruzamiento a
través de la recombinación.
Supongamos que el entrecruzamiento se produce al azar
en varios puntos del cromosoma. Una gran distancia entre
dos genes significaría, entonces, probabilidades mayores
Figura 3. Estimación de la distancia entre dos genes, A y C, que se que se produzcan simultáneamente dos o más entrecru-
encuentran lejos mediante el cálculo de las distancias relativas entre A y zamientos entre estos locus. Observemos a continuación
Figura 3. Estimación de la distancia B, yentre
entre Bdos
y C. genes, A y C, que se encuentran
lejos mediante el cálculo de las distancias relativas entre A y B, y entre Blas diferencias entre dobles entrecruzamientos donde se
y C.
involucran dos pares de genes (A y B) y entre tres pares
con la distancia entre genes, creó una medida de mapeo ar- génicos (A, B y C) (Fig. 4).
En 1913, Alfred Sturtevant,
bitraria: un discípulo
el centiMorgan de Morgan
(cM) también llamadalogra confeccionar
Unidad Mapa el primer
Concluyendo con la explicación de este fenómeno, si sólo
mapa de ligamiento
(UM). Una utilizando la información
UM (al igual que 1cM) equivaledisponiblea unsobre
1 % delosfre-cruzamientos
se dispone de dos pares de alelos como marcadores, un
realizados encuencia
Drosophila. Para relacionar
de recombinación, por lolatanto,
frecuencia de recombinación
una Unidad Morgan con la
entrecruzamiento doble o en número par entre los loci en
distancia entre genes,
equivale a uncreó
100 una
% demedida
frecuencia dede mapeo arbitraria: el centiMorgan
recombinación. cuestión no se puede detectar genéticamente, puesto que
(cM) también llamada Unidad Mapa (UM). Una UM (al igual que 1cM) equivale las combinaciones genéticas obtenidas son las mismas que
a un 1 % de frecuencia
1 UM = 1 cM de= recombinación,
1 % de frecuenciapor lo tanto, una Unidad Morgan
de recombinación si no hubo entrecruzamientos entre ellos.
equivale a un 100 % de frecuencia de recombinación. Se desprende de los resultados anteriores que una forma
Retomando el ejemplo de los genes de Prolactina y BoLA- de evitar la pérdida de la información (entrecruzamientos
D R en el bovino, si pudiésemos observar el número de que no originan recombinación) y estimar distancias géni-
1 UM =gametas
1 cM = recombinantes
1 % de frecuencia de unade meiosis
recombinación
del individuo dihí- cas lo más reales posibles es mediante la realización de la
brido podríamos determinar que la distancia entre los locus prueba de tres puntos donde la presencia del gen marcador
Retomando el ejemploR de
BoLA-D y PRLloses
genes de ya
de 9 cM, Prolactina
que comoy dijimos
BoLA-D R en el bovino,
podemos centralsipermite detectar esos dobles entrecruzamientos y
pudiésemos observar
observarunel9número de gametas
% de descendientes con recombinantes de una meiosis
fenotipo recombinante. del
así expresarlos como frecuencia de recombinación.
individuo dihíbrido podríamos determinar que la distancia entre los locus BoLA-
D R y PRL es de 9 BoLA-DQR (B/b)como9 dijimos
cM, ya que UM PRL (A/a)
podemos observar un 9 % de
descendientes con fenotipo recombinante.

174
De esta manera se pudo determinar la relación entre la recombinación
intracromosómica y la distancia entre genes, de modo que a mayor distancia
existente entre dos locus exista mayor probabilidad de recombinación entre
ellos. 9
 Ligamento y Mapeo Génico

Figura 4. Resultado de dobles entrecruzamientos de acuerdo a su localización en relación a los genes considerados.
Figura 4. Resultado de dobles entrecruzamientos de acuerdo a su localización
en relación a los genes considerados.

Concluyendo con la explicación de este fenómeno, si sólo se dispone de dos

175
pares de genes como marcadores, un entrecruzamiento doble o en número par
entre los locus en cuestión no se puede detectar genéticamente, puesto que las
combinaciones de alelos de cada gen obtenidas son las mismas que las
 Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel

Concluyendo con la explicación de este fenómeno, si sólo Frecuencia de dobles

se dispone de dos pares de genes como marcadores, un entrecruzamientos esperados = pI x pII = 0,08 x 0,05 = 0,004
entrecruzamiento doble o en número par entre los locus en
cuestión no se puede detectar genéticamente, puesto que donde pI es la probabilidad de entrecruzamiento en la región
las combinaciones de alelos de cada gen obtenidas son las I y pII es la probabilidad de entrecruzamiento en la región II.
mismas que las generadas en ausencia de entrecruzamiento. Es común que los dobles entrecruzamientos no se presenten
Se desprende de los resultados anteriores que una forma de tan frecuentemente como es de esperar, entonces la frecuen-
evitar la pérdida de la información (entrecruzamientos que no cia de entrecruzamientos observados generalmente es menor
originan recombinación) y estimar distancias génicas lo más a la de los esperados. Aparentemente el entrecruzamiento en
reales posibles es mediante la realización de la prueba de tres una región inhibe o interfiere con otro que pueda producirse
puntos donde la presencia del gen marcador central permite en la región vecina, cuanto menor distancia entre los genes,
detectar esos dobles entrecruzamientos y así expresarlos mayor será esta interferencia. Este fenómeno se denomina
como frecuencia de recombinación. interferencia cromosómica según M ller.
Comúnmente las intensidades de interferencia se expresan
como coeficiente de coincidencia. Por definición, llamamos
5.3. Coincidencia e Interferencia así a la relación existente entre la frecuencia observada y
Según la Figura 4 esperaríamos que los dobles entre- la frecuencia esperada de dobles entrecruzamientos, por lo
cruzamientos entre los genes A, C y B se presentasen con tanto:
una frecuencia igual al producto de ambos entrecruzamien-
tos simples, ya que la probabilidad de que dos sucesos Dobles entrecruzamientos observados
Coeficiente de Coincidencia = C = -----------------------------------------------------
independientes se presenten simultáneamente es igual a la Dobles entrecruzamientos esperados
probabilidad de un suceso multiplicado por la probabilidad
del otro. Si suponemos las siguientes distancias relativas
Por ejemplo, si al realizar una prueba de tres puntos obser-
entre los genes:
vamos una frecuencia de dobles entrecruzamientos de 0,002
o 0,2% y la frecuencia esperada era de 0,004, entonces el
REGION I REGION II coeficiente de coincidencia será igual a:

C = 0,002 = 0,5
A C B
0,004
8 UM 5 UM

Si enSilas
endos
las regiones
dos regiones
(R I y(R I ylos
R II) R entrecruzamientos
II) los entrecruzamientos Esto
sim- simples significa que se ha producido el 50% de los dobles en-
fuesen
independientes entre sí, esperaríamos según el mapa de ligamiento: trecruzamientos esperados.
ples fuesen independientes entre sí, esperaríamos según el
mapa de ligamiento: La coincidencia varía inversamente respecto a la interferen-
Frecuencia de dobles
entrecruzamientos esperados = pI x pII = 0,08 x 0,05 = 0,004 cia, y se pueden esperar valores de coincidencia entre cero

donde pI es la probabilidad de entrecruzamiento en la región I y pII es la

176probabilidad de entrecruzamiento en la región II.
Es común que los dobles entrecruzamientos no se presenten tan
frecuentemente como es de esperar, entonces la frecuencia de
entrecruzamientos observados generalmente es menor a la de los esperados.
Aparentemente el entrecruzamiento en una región inhibe o interfiere con otro
 por lo tanto la distancia estimada se acerca cada vez más a la real. Al
aumentar la distancia en el mapa, el porcentaje de recombinación observado
también aumentará, pero seguirá sin superar el 50% y la frecuencia de
recombinación seguirá siendo menor que la distancia real en el mapa.
La presencia de dobles entrecruzamientos dificulta la estimación exacta de
Ligamento y Mapeo Génico
grandes distancias en el mapa, mientras que las distancias pequeñas en las
y uno. La interferencia completa da valores de C = que
0 y una mapas de
se dan menos ligamiento
dobles más precisos son
entrecruzamientos selos obtenidos
estiman cona partir
mayor precisión.
C = 1 indica que no existe ninguna interferencia. Los mapas de de ligamiento
datos de frecuencias
más precisosde recombinación para intervalos
son los obtenidos a partir de datos de
frecuencias de pequeños entre genes.
recombinación para intervalos pequeños entre genes.
Interferencia = I = 1 - C La relación lineal entrelineal
La relación entre la frecuencia
la frecuencia de recombinación
de recombinación y la
y la distancia adopta,
= 1 - 0,5 = 0,5 o 50 % distancia adopta, basándose en numerosos experimentos
basándose en numerosos experimentos llevados a cabo en Drosophila, maíz y
Neurospora, llevados
la formaade cabo
unaencurva
Drosophila, maíz y Neurospora, la forma
(Fig. 5).
Al disminuir la distancia entre los genes, disminuye el valor de una curva (Fig. 5).
de coincidencia y aumenta el de interferencia. De este modo,
cabría esperar que tres locus que estén muy próximos en el
cromosoma presentasen muy poca o ninguna probabilidad de
dobles entrecruzamientos, en consecuencia la interferencia
entre los genes sería total.

5.4. Relación entre Distancia en el Mapa y

Frecuencia de Recombinación: Función de Mapa
La estimación de la distancia en el mapa se realiza en base
a la frecuencia de recombinación obtenida para los genes
utilizados como marcadores en un cruzamiento de prueba.
Se debe tener en cuenta que los entrecruzamientos dobles
en una determinada región afectan a las distancias parciales,
pero no producen recombinación entre los genes localizados
en los extremos (Fig. 4).
La frecuencia de recombinación es una medida de la dis-
tancia en el mapa. Tomando distancias pequeñas entre
marcadores lo suficientemente cercanos, la probabilidad de Figura 5. Relación entre frecuencia de recombinación y distancia entre
dobles entrecruzamientos disminuye considerablemente Figuray 5. Relación entre frecuencia dosde recombinación y distancia entre dos
genes.
genes.
por lo tanto la distancia estimada se acerca cada vez más a
la real. Al aumentar la distancia en el mapa, el porcentaje de Cuando la frecuencia de recombinación se acerca al 50%, la
recombinación observado también aumentará, pero seguirá relación con la distancia deja de ser directa (más de 50 UM)
sin superar el 50% y la frecuencia de recombinación seguirá y a partir que la frecuencia de recombinación es igual a 50%
siendo menor que la distancia real en el mapa. 13
se forma una meseta que se mantiene constante aunque la
La presencia de dobles entrecruzamientos dificulta la esti- distancia entre los genes aumente. Esto se debe a que la
mación exacta de grandes distancias en el mapa, mientras máxima frecuencia de recombinación es del 50% y la distancia
que las distancias pequeñas en las que se dan menos do- entre genes puede ser mayor a 50 UM.
bles entrecruzamientos se estiman con mayor precisión. Los

177
 6. Mapeo Génico: métodos empleados en especies domésticas
El conocimiento de la posición de cada uno de los genes (loci) en sus
correspondientes cromosomas y sus relaciones con los restantes genes que
posee un individuo se denomina mapa génico de la especie. Existen diferentes
clases de mapas génicos de acuerdo con los métodos empleados para su
Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel
construcción:

6. Mapeo Génico: métodos empleados 6.1.

en Mapas dos genes ligados sean separados por un evento de recom-
Cromosómicos
binación dependerá de la distancia que exista entre ellos.
especies domésticas 6. 1. 1 FISH
Un (hibridización in situes
mapa de ligamiento fluorescente)
un diagrama de los rearreglos
Para el desarrollo
lineales dede losesta
genestécnica se utilizan
localizados en un sondas de ADN
cromosoma. Paramarcadas
El conocimiento de la posición de cada uno de los genesmediante diferentes fluorocromos. Estas sondas se ponen en contacto con
(loci) en sus correspondientes cromosomas y sus relaciones desarrollar este tipo de mapas una alternativa es formar
preparaciones de cromosomas en metafase. La identificación previa de los
con los restantes genes que posee un individuo se denomi- familias de referencia (en caso de animales domésticos) a
cromosomas en metafase se consigue mediante técnicas de bandeo G, R ó .
desonda ladesnaturalizada
na mapa génico de la especie. Existen diferentes clasesLa que llamaremoshibridizará
generación con parental,
el ADN ytambién
que los desnaturalizado
padres de del
mapas génicos de acuerdo con los métodos empleados para familia presenten alelos diferentes en dos
cromosoma en el lugar donde ambas secuencias sean homólogas. o más loci (hete- De esta
su construcción: rocigotas)
forma podrá para poder
identificarse estudiar
una señal el patrón correspondiente
fluorescente de segregación en la que se
al gen
descendencia. Es por esta razón que los mapas de ligamiento
desea localizar en una región determinada de un cromosoma. En la Figura 6
dependan
puede verse enormemente
la localización de delos lagenes
disponibilidad
DY 1 ydeD6 marcadores
1 bovino en sus
6.1. Mapas Cromosómicos moleculares
respectivos cromosomas. polimórficos.

6. 1. 1 FISH (hibridización in situ fluorescente)

Para el desarrollo de esta técnica se utilizan sondas de ADN
marcadas mediante diferentes uorocromos. Estas sondas
se ponen en contacto con preparaciones de cromosomas
en metafase. La identificación previa de los cromosomas en
metafase se consigue mediante técnicas de bandeo G, R ó
. La sonda desnaturalizada hibridizará con el ADN también
desnaturalizado del cromosoma en el lugar donde ambas se-
cuencias sean homólogas. De esta forma podrá identificarse
una señal uorescente correspondiente al gen que se desea Figura 6. Figura
Idiograma y localización
6. Idiograma y localizaciónpor FISHde de
por FISH los genes
los genes D6 1 en D6
el 1 en el
localizar en una región determinada de un [Link]
En 6 y DYcromosoma
1 en el 6cromosoma
y DY 1 en elYcromosoma
del bovino Y del bovino
(Haberman y col. 2005)
la Figura 6 puede verse la localización de los genes DY 1 y (Haberman y col. 2005)
D6 1 bovino en sus respectivos cromosomas.
6.2. MapaExisten
de Ligamiento
un par de puntos a tener en cuenta con respecto a
6.2. Mapa de Ligamiento La construcción de mapas de ligamiento, se basa en el hecho de que durante
estos mapas:
La construcción de mapas de ligamiento, se basa en el la meiosis,1)los
he- lociestablecer
Para que se encuentran
el orden en dediferentes
los loci secromosomas
requiere que sealseparan al
cho de que durante la meiosis, los loci que se encuentranazar
en en las
menos gametas (transmisión
un evento independiente),
de recombinación rompamientras
el ordenque los que se
lineal
diferentes cromosomas se separan al azar en las gametas encuentran en un mismo
de origen parental. cromosoma tienden a co-segregar, a menos que un
evento
(transmisión independiente), mientras que los que se encuen- de recombinación rompa esta asociación de
2) La densidad de un mapa genético estará correlacionada tipo “parental”. Como ya
tran en un mismo cromosoma tienden a co-segregar, a menos con el número de polimorfismos que segregan en una cruza
que un evento de recombinación rompa esta asociación de en particular, mientras que su resolución depende del número
tipo “parental”. Como ya hemos visto la probabilidad de que de gametas (número de meiosis) analizadas en la progenie. 14
178
 Ligamento y Mapeo Génico

Este tipo de mapa define la relación de ligamiento en uni- de recombinación “para intervalos pequeños” entre loci
dades de recombinación (p) entre los genes ubicados en marcadores, ya que en cortas distancias la probabilidad
un mismo cromosoma. La unidad de mapeo es el centi- de dobles entrecruzamientos es menor.
Morgan (cM), que corresponde al 1 % de probabilidad de Actualmente se utilizan marcadores moleculares para aumen-
producir una gameta recombinante luego de la meiosis. En tar la resolución de los mapas, los cuales pueden ser micro-
promedio 1 cM en el genoma del ratón equivale a 1.700 kb satélites o SNPs, (paneles de alta densidad) siendo éstos
(ó 1,7 Mb) en tanto que en el humano a 1000 kb (ó 1 Mb). últimos los mayormente utilizados. El procedimiento consiste
Estos datos deben considerarse como promedios porque en genotipificar los padres de las familias de referencia para
no hay una correlación absoluta entre cM y kb debida a la todos los marcadores que se disponen. Si los individuos son
distribución despareja de los eventos de recombinación homocigotos no serán informativos y ese marcador debe
a lo largo de las cromátides. Por ello dos genes pueden descartase en esa familia. Luego del nacimiento de los hijos
aparecer completamente ligados en un mapa de alta reso- se determina el genotipo para todos los descendientes. Los
lución y resultar estar distantes en términos moleculares, genotipos de los hijos nos permiten determinar que marca-
mientras que contrariamente dos genes pueden aparecer dores se trasmiten en forma independiente y cuales están
relativamente alejados uno del otro si existe una región ligados. De los que se encuentran ligados se establece la fase
“hot spot” de recombinación en la región intergénica. Tam- de ligamiento y la frecuencia de recombinación entre ellos. De
bién hay que considerar el fenómeno de interferencia de esta forma se puede conocer el orden lineal y la distancia. Se
entrecruzamientos, que impide la formación de quiasmas utilizan diferentes programas para este cálculo, un ejemplo
cercanos en un mismo cromosoma. es el soft are CRI-MAP ([Link]
Cuando la distancia entre marcadores que están sobre un crimap/). En la Figura 7 se muestra el mapa de ligamiento
mismo cromosoma aumenta, se incrementa la probabili- del cromosoma 28 bovino (BTA28) construido mediante el
dad de que ocurran eventos de recombinación meiótica uso de marcadores del tipo microsatélites.
(entrecruzamiento) entre los mismos. Si la frecuencia (p)
observada tiende a cero los marcadores están fuertemen- Un ejemplo de construcción de mapa de ligamiento
te ligados (muy cercanos) y pudiendo ser 0,5 cuando se Utilizaremos en este caso, como ejemplo de la construcción
encuentran muy distantes. De esta manera, a partir de los de un mapa de ligamiento, la localización del locus MOD
valores (p), se puede estimar la distancia entre loci mar- (Multiple Ocular Defects) responsable de defectos oculares
cadores mediante la aplicación de distintas “funciones de severos en la raza bovina Japanese Black. Del análisis de
mapeo” que transforman la frecuencia de recombinación registros familiares se sugiere una herencia autosómica
(p) en unidades de distancia genética o “Morgan”. Asimis- recesiva (Fig. 8). El estudio presenta las siguientes particu-
mo, se debe tener en cuenta que la estimación exacta de laridades:
grandes distancias en el mapa se ve dificultada porque es
mayor la probabilidad de dobles entrecruzamientos. Por 1- Familias apropiadas: en el ejemplo se utilizó un pedi-
esta razón, los mapas de ligamiento más precisos son gree obtenido de una población comercial compuesto por
aquellos que se obtienen a partir de datos de frecuencias 1 abuelo común a 6 padres confirmados como portadores,

179
 registroses
distancia. Se utilizan diferentes programas para este cálculo, un ejemplo familiares
el se sugiere una herencia autosómica recesiva (Fig. 8). El
estudio presenta las siguientes particularidades:
soft are CRI-MAP ([Link] En la Figura 7 se
muestra el mapa de ligamiento del cromosoma 28 bovino (BTA28) 1- construido
Familias apropiadas: en el ejemplo se utilizó un pedigree obtenido de una
mediante el uso de marcadores del tipo microsatélites. población comercial compuesto por 1 abuelo común a 6 padres confirmados
como portadores, 21 nietos afectados y 68 nietos sanos (no se muestran en el
esquema). El análisis de los registros genealógicos indica que los progenitores
Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel
de los terneros fueron descendientes de un “fundador” distante a varias
generaciones de los padres y portador de la mutación (Fig. 8). La información
fic ro rc or co o r-
acerca del estado sano o enfermo del animal se realizó por el examen
fico : que permitan
oftalmológico correspondiente. una buena cobertura del genoma. En
2- este c caso losromarcadores rc orutilizados cofueron
o microsatélites
r co : que permitan
una seleccionados
buena coberturaadelpartir de mapas
genoma. bovinos
En este caso ya
los existentes
marcadoresen la
utilizados
fueron microsatélites
literatura seleccionados a partir de mapas bovinos ya existentes en
([Link]).
la literatura ([Link]).
3- Análisis de ligamiento: el principio de la construcción de
3- Análisis de ligamiento: el principio de la construcción de este tipo de mapa
este tipo
se sustenta ende mapa sedesustenta
la posición en la posición
los loci marcadores o losde los loci
genes. mar-sobre
Si están
cadores
diferentes o los genes.
cromosomas, Si están sobre
segregarán diferentes
aleatoriamente, cromosomas,
mientras que si están
próximos presentarán
segregarán una tendencia amientras
aleatoriamente, heredarsequejuntos.
si están próximos
presentarán una tendencia a heredarse juntos.

Figura 8. Familia de referencia para estudiar la segregación del gen MOD. Los
Figura 7. Mapa de ligamiento
Figura 7. Mapade
de BTA 28 de
ligamiento (Ihara y (Ihara
BTA 28 col. 2004).
y col. 2004). Figura 8. Familia de referencia para estudiar la segregación del gen
cuadrados o círculos llenos y medio llenos representan animales afectados y
MOD. Los cuadrados o círculos llenos y medio llenos representan
portadores respectivamente. Las casillas grises indican animales de genotipo
animales afectados y portadores respectivamente. Las casillas grises
no identificado (Abbasi y col. 2009).
21 nietos afectados y 68 nietos sanos (no se muestran en indican animales de genotipo no identificado (Abbasi y col. 2009).
Un ejemplo deelconstrucción de mapa de ligamiento
esquema). El análisis de los registros genealógicos indica Para resolver esto se diseñó el mapeo denominado Idéntico por Descendencia
Utilizaremos enque este caso, comodeejemplo
los progenitores defueron
los terneros la construcción
descendientes (IBD
dedeun mapa Identical-by-Descent).
de
Para resolver esto seSediseñó
define el
Idéntico
mapeo pordenominado
DescendenciaIdéntico
(IBD) cuando
un alelo o alelos son réplica bioquímicas producida sin mutación en un
ligamiento, la localización
un “fundador”del locusaMOD
distante varias(Multiple Ocular
generaciones Defects)
de los padres responsable
por Descendencia
antecesor (IBD de
común. El fundamento Identical-by-Descent). S
este tipo de mapa es encontrar una región
de defectos oculares severos
y portador en la raza
de la mutación bovina
(Fig. Japanese Black.
8). La información Idéntico
Del análisis
acerca del depor Descendencia (IBD) cuando un alelo o alelos son
estado sano o enfermo del animal se realizó por el examen réplica bioquímicas producida sin mutación en un antecesor
oftalmológico correspondiente. común. El fundamento de este tipo de mapa es encontrar
17
180
16
 cromosómica que esté conservada en individuos relacionados con un
antepasado común, y que se trasmita sin recombinación a sus descendientes.
Por lo tanto, teniendo en cuenta la historia y la estructura poblacional
analizada, es razonable predecir quey Mapeo
Ligamento la mayoría
Génico de los individuos afectados por
una determinada
una región cromosómica enfermedad
que esté conservada genética marcadores
en individuos compartirían la misma
en BTA18, 4 padres ymutación (que El
21 terneros afectados.
relacionados debería ser idéntica
con un antepasado común, a suseantepasado
y que trasmita en todos
número losdecasos),
de animales y los
cada haplotipo está mismos
entre paréntesis.
segmentos que flanquean a dicha mutación (que también tendrían que
sin recombinación a sus descendientes. Los haplotipos asociados con el alelo mutante ser están
del MOD
Por lo tanto, teniendo en cuenta la historia y la estructura indicados en color gris.
idénticos por ascendencia) debido Como
poblacional analizada, es razonable predecir que la mayoría
a la ausencia de recombinación
resultado de este trabajo se pudo determinar que los
(desequilibrio
de los individuos afectados por deuna ligamiento).
determinada enfermedad 21 animales afectados fueron homocigotas para el haplotipo
Siguiendo
genética compartirían con mutación
la misma nuestro(queejemplo,
debería seren la Figura
2/- de 9 se ABS13
los marcadores pueden observar
y FDC1, los
respectivamente
idéntica a suhaplotipos (combinación de alelos de dos o más loci sobre el mismo afec-
antepasado en todos los casos), y los mismos y que todos los padres y las madres de los animales
segmentos que anquean a dicha mutación (que también tados fueron heterocigotas para estos mismos haplotipos
tendrían que cromosoma)
ser idénticos porde siete microsatélites
ascendencia) debido a la au- marcadores
(Fig. 9), indicandoen “no
BTA18, 4 padres
recombinación” entre elylocus
21 MOD
terneros afectados.
sencia de recombinación (desequilibrio deElligamiento).
número de animales de cada
y los marcadores anteshaplotipo
[Link]á entre que
Esto significa
Siguiendo conparéntesis. Los haplotipos asociados con el alelo mutante del MOD están
nuestro ejemplo, en la Figura 9 se pueden el gen MOD se encuentra en el intervalo de 1 cM entre los
observar los haplotipos (combinación de alelos de dos o microsatélites anqueantes (MOK 1801 a 8.96 cM y MOK
indicados en color gris.
más loci sobre el mismo cromosoma) de siete microsatélites 1805 a 9.97 cM) en BTA 18 (Fig. 8). Mediante el análisis de

Figura 9. Haplotipos para diferentes marcadores de BTA18 cubriendo una región de 5,65 cM. Puede observarse la falta de recombinación entre el gen
Figura 9. Haplotipos para diferentes marcadores de BTA18 cubriendo una
FDC1, y los marcadores ABS13 y NECAB2 indicando la posible presencia causal de la mutación en ese rango
(Abbasi y col. 2009).
región de 5,65 cM. Puede observarse la falta de recombinación entre el gen
FDC1, y los marcadores ABS13 y NECAB2 indicando la posible presencia 181

causal de la mutación en ese rango (Abbasi y col. 2009).

 Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel

mapas comparativos del bovino con otras especies (humano sido utilizada satisfactoriamente en el mapeo de genes rela-
y ratón) se pudo establecer que en la misma región mapean cionados con caracteres productivos en diferentes especies.
12 genes diferentes. Los genes involucrados y sus sentidos
de transcripción pueden verse en la Figura 10. 6.3. Mapas Físicos
Se secuenciaron y compararon las secuencias codificantes Un mapa físico es la representación real del alineamiento
de estos 12 genes (Fig. 10) y si bien se encontraron dife- de los genes en un cromosoma. El orden de los genes es el
rentes sustituciones en las secuencias analizadas de sanos mismo que en un mapa de ligamiento, pero las distancias se
y afectados, sólo la inserción de una citosina en el exon 2 miden en kb o Mb. Estos mapas constituyen un paso crucial
del gen FDC1 ( AP 1) estuvo en la caracterización estructural y funcional del genoma. Pue-
asociada (alelo con 7 cistosinas en lugar de 6) el estado de den lograrse por diversos métodos pero el más conveniente
enfermedad (Fig. 11). Este gen se considera un buen gen es el ordenamiento de grupos de secuencias de ADN hasta
candidato ya que en el ratón su expresión esta relacionada obtener grandes segmentos alineados. El establecimiento de
con el desarrollo embriológico del ojo (lentes, retina y nervio dicho mapa se ve facilitado por la existencia de mapas de
óptico). La inserción de la citosina produce un corrimiento ligamiento previos desarrollados para la especie, así como
del marco de lectura que origina un codon de stop prematuro también por la consulta de mapas comparativos.
que dará origen a una proteína más corta y no funcional. El La Figura 12 muestra el resultado de la generación de un
análisis por secuenciación de los animales sanos, portadores mapa de ligamiento de alta densidad para BTA 14 q11-16
y enfermos confirma la descripción de esta mutación. utilizando como referencia genes posicionados en un mapa
Cabe resaltar que esta metodología no sólo es de utilidad en comparativo humano junto con la información proveniente
la detección de caracteres cualitativos, sino que también ha de un mapa de ligamiento bovino previo. Los marcadores en

Figura 10. Doce genes presentes en el intervalo comprendido entre los marcadores MOK1801 y MOK1805. Las echas indican la dirección de la
transcripción (Abbasi y col. 2009).
Figura 10. Doce genes presentes en el intervalo comprendido entre los
182 marcadores MOK1801 y MOK1805. Las flechas indican la dirección de la
transcripción (Abbasi y col. 2009).
 óptico). La inserción de la citosina produce un corrimiento del marco de lectura
que origina un codon de stop prematuro que dará origen a una proteína más
elcorta
mapeoy no funcional.
de genes El análisis
relacionados con por secuenciación
caracteres productivosdeenlos animales sanos,
diferentes
portadores y enfermos confirma la descripción de esta mutación.
especies.
Ligamento y Mapeo Génico
6.3. Mapas Físicos
Un mapa físico es la representación real del alineamiento de los genes en un
cromosoma. El orden de los genes es el mismo que en un mapa de ligamiento,
pero las distancias se miden en kb o Mb. Estos mapas constituyen un paso
crucial en la caracterización estructural y funcional del genoma. Pueden
lograrse por diversos métodos pero el más conveniente es el ordenamiento de
grupos de secuencias de ADN hasta obtener grandes segmentos alineados. El
establecimiento de dicho mapa se ve facilitado por la existencia de mapas de
ligamiento previos desarrollados para la especie, así como también por la
consulta de mapas comparativos.
La Figura 12 muestra el resultado de la generación de un mapa de ligamiento
de alta densidad para BTA 14 q11-16 utilizando como referencia genes
posicionados en un mapa comparativo humano junto con la información
proveniente de un mapa de ligamiento bovino previo. Los marcadores en azul
pertenecen
Figura 11. Mutación puntual en el aexon
un 2mapa
del gendeFDC1
ligamiento bovino
que genera previodel
un corrimiento enmarco
tantodeque losconmarcados
lectura la formación de un codon de stop
prematuro y una proteína no funcional.
en rojo y verde fueron descubiertos al analizar nuevas secuencias de ADN
Figura 11. Mutación puntual en el exon 2 del gen FDC1 que genera un
corrimiento del marco de lectura con la formación de un codon de stop
prematuro y una proteína no funcional.

Cabe resaltar que esta metodología no sólo es de utilidad en la detección de

caracteres cualitativos, sino que también ha sido utilizada satisfactoriamente en

19

Figura 12. Generación de un mapa de ligamiento de alta densidad para BTA 14 q11-16 (Riquet y col. 1999)
Figura 12. Generación de un mapa de ligamiento de alta densidad para BTA
14 q11-16 (Riquet y col. 1999) 183

6.4. Secuenciación del genoma

La información más detallada que podemos obtener de una región del genoma
 Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel

azul pertenecen a un mapa de ligamiento bovino previo en 6.5. Mapas Integrados

tanto que los marcados en rojo y verde fueron descubiertos
al analizar nuevas secuencias de ADN. La integración de los mapas físicos y de ligamiento es posi-
ble e importante y se puede realizar mediante la ubicación
6.4. Secuenciación del genoma de genes y marcadores no codificantes comunes a ambos
La información más detallada que podemos obtener de una mapas. Estos sistemas suelen designarse corrientemente
región del genoma es su secuencia nucleotídica. Existen como loci “ancla” pues permiten ubicar ciertos marcadores
diferentesDebido
proyectosadelasecuenciación de genomas en cromosomas individuales, sirviendo como referencia para
para las fuentes
disponibilidad de muchas dey orientar
localizar información (Bovine
los grupos HapMap,
de ligamiento en los distintos
especies domésticas de interés. En el caso del bovino se
Interbreed, RRL, Ensembl) se
encuentra disponibles en Bovine Genome Database projectpueden identificar las
cromosomas. posiciones
Para ayudar a de
la los genes
integración de endiversos
los
el genoma por
([Link] ). diferentes metodologías mapas (análisis de segregación
genéticos, los genetistas hanen familias,
definido un grupo de loci
Debido a construcción
la disponibilidad dede haplotipos
muchas fuentes de y de referencia que se encuentran
cálculo de las distancias por programas como
información uniformemente distribuidos
(Bovine HapMap, Interbreed, RRL, Ensembl) se pueden en todos los cromosomas y son también polimórficos (Fig. 12).
CRI-MAP). Otros grupos han desarrollados metodologías bioinformáticas para
identificar las posiciones de los genes en el genoma por di-
su localización
ferentes metodologías (Fig.
(análisis 13).
de segregación en familias, 6.6. Mapa Comparativo
construcción de haplotipos y cálculo de las distancias por Cuando comparamos los mapas genéticos de dos especies
programas como CRI-MAP). Otros grupos han desarrollados que se han separado evolutivamente, podemos observar que
metodologías bioinformáticas para su localización (Fig. 13). hay regiones del genoma que han sido conservadas con mayor

Figura 13. Localización del gen de la hormona de crecimiento (GH).[Link])

Figura 13. Localización del gen de la hormona de crecimiento (GH) en bovinos en el cromosoma 19 (
en bovinos
en el cromosoma 19 ( .[Link])

184
6.5. Mapas Integrados
La integración de los mapas físicos y de ligamiento es posible e importante y se
puede realizar mediante la ubicación de genes y marcadores no codificantes
 Ligamento y Mapeo Génico

o menor fidelidad, en función del tiempo de divergencia entre alinear los segmentos cromosómicos correspondientes.
ellas. Este hecho se debe a que dos especies que evolucio- Esto último permitirá revelar, por ejemplo, que la evolución
nan a partir de un antecesor común, en el proceso sufren una funcional y estructural de los cromosomas de los mamíferos
alinear los segmentos cromosómicos correspondientes.
serie de cambios en el genoma, uno de cuyos re ejos son las
Esto últimolo permitirá
está altamente conservada, que facilitará el estudio de
revelar, por ejemplo, que la
reordenaciones cromosómicas. El conocimiento de los frag- evolución distintos caracteresestructural
funcional y de importanciade los
entre distintas especies,
cromosomas
mentos cromosómicos de los
equivalentes mamíferos
entre está es
ambas especies altamente conservada,
es decir lo queresultan
que estos mapas facilitará
muyelútiles para buscar
el denominado estudio
“mapeo de distintosque
comparativo” caracteres de importancia
permite la utilización entre genes
posibles distintas especies,
candidatos paraeseldecir
clonado posicional a
de los mapasquegenéticos
estosobtenidos
mapasenresultan
una especie,
muy sobre otra parapartir
útiles buscarde genes descriptos
posibles genes y “mapeados”
candidatosen el ratón y en el
no muy alejadapara el clonado posicional a partir de genes descriptos y “mapeados”progreso
evolutivamente. Generalmente, las especies hombre de modo que el enorme en el en el desarrollo
más relacionadas presentan mayor grado de conservación del mapa genético de estas dos especies, proporciona una
ratón y en el hombre de modo que el enorme progreso en el desarrollo del
genómica, con lo que la localización cromosómica de genes importante fuente de información para el estudio genético
homólogos en mapa genético
diferentes de estas
especies dosidentificar
permite especies, y proporciona una
en otras (Fig. importante fuente de
14).
información para el estudio genético en otras.

Figura 13. Regiones cromosómicas

Figura 14. conservadas
Regiones cromosómicas conservadas entre el humano
entre el humano y bovino.
y bovino.

185

BIBLIOGRAFIA
 Huguet, Miguel J.; Marrube, G. y Pinto, Gabriel

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