Informe III - Espectrofotometría infrarroja; verificación de equipos y análisis

cualitativo de muestras
Report III - Infrared spectrophotometry; equipment verification and qualita-
tive sample analysis
Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias; Programa de Química. Laboratorio de
Métodos ópticos (2029266).
Héctor Mauricio Morales Rincón1 , Wendy Lorena Gómez Alvarado 2 , Santiago Poveda Henao 3
1 hmoralesr@[Link], 2 wegomeza@[Link], 3 spovedah@[Link]

Entregado: 25 de junio de 2025

Resumen
Se utilizó el equipo Thermo Scientific Nicolet iS10 para tomar espectros por transformada de Fourier (FTIR)
y por reflectancia total atenuada (ATR). Con el uso de una lámina de poliestireno como patrón secundario se
verificó el correcto funcionamiento del equipo, y posteriormente se determinó el espesor de una celda para
líquidos de NaCl. Se compararon los espectros de p-toluensulfonamida por pastilla de KBr y por ATR, se observa
que de manera general no hay gran diferencia en las posiciones de las bandas pero, si difieren en gran medida
en la intensidad de las mismas. Se utilizó la espectroscopia infrarroja para el análisis y seguimiento de reacción
del biodiesel, producto de la transesterificación del aceite de canola catalizado por hidróxido de potasio, para
el seguimiento de la reacción se tomaron los espectros por reflectancia total atenuada y se utilizó la bandas
de 1200 cm−1 (estiramiento del enlace C-O) y 1440 cm−1 (flexión de los enlaces H-C-H) para la comparación
entre el aceite de canola y el producto (biodiesel). Se concluye que la técnica de espectroscopia IR es adecuada
para el análisis y seguimiento de reacciones de compuestos orgánicos como los ácidos grasos, debido a sus
amplios modos de vibración activos en el infrarrojo.
Palabras Clave: ATR, biodiesel, FAMES, FTIR, transesterificación..

Resumen

Thermo Scientific Nicolet iS10 was used to collect Fourier transform infrared (FTIR) and attenuated total
reflectance (ATR) spectra. A polystyrene sheet was used as a secondary standard to verify proper operation
of the equipment, and the thickness of a NaCl liquid cell was subsequently determined. The spectra of p-
toluenesulfonamide by KBr pellet and ATR were compared. It was observed that, in general, there was no
significant difference in the band positions, but they did differ significantly in their intensity. Infrared spec-
troscopy was used for the analysis and reaction monitoring of biodiesel, a product of the transesterification
of canola oil catalyzed by potassium hydroxide. To monitor the reaction, attenuated total reflectance spectra
were taken and the 1200 cm−1 (C-O bond stretching) and 1440 cm−1 (H-C-H bond bending) bands were used
for the comparison between canola oil and the product (biodiesel). It is concluded that the IR spectroscopy
technique is suitable for the analysis and monitoring of reactions of organic compounds such as fatty acids,
due to their broad active vibration modes in the infrared.
Keywords: ATR, biodiesel, FAMES, FTIR, transesterification..

1. Objetivos 1.3 Identificar las diferencias entre las técnicas FTIR y

ATR mediante la comparación de espectros de un mis-
1.1 Comprender los fundamentos que explican la técnica
mo compuesto obtenidos por cada técnica.
de espectroscopia infrarroja y sus aplicaciones en la
química analítica. 1.4 Llevar a cabo el seguimiento de una reacción de transes-
terificación mediante la técnica de espectroscopia de
1.2 Realizar una verificación de espectrofotómetro infra-
infrarrojo.
rrojo de transformada de Fourier, de la marca Ther-
mo Fisher, modelo Nicolet iS10 FTIR empleando un
patrón de poliestireno.

1–12 | 1
 Fig. 1 Moléculas principales que componen del aceite de canola y su proporción de acuerdo a lo reportado por el fabricante (canola
life®).

2. Introducción Al ser una técnica analítica que se complementa con el

funcionamiento de múltiples componentes en un sistema,
2.1. Espectroscopia de infrarrojo
es fundamental verificar la exactitud y precisión de los ins-
La espectroscopía de infrarrojo es una técnica analítica
trumentos que se utilizan. Para realizar este procedimiento,
que estudia las interacciones entre la materia y la radiación
se deben considerar distintos aspectos relacionados con la
electromagnética, se especializa en las interacciones con
respuesta dada por el equipo y el funcionamiento del sis-
longitudes de onda en el rango entre 0,78 µm a 1000 µm.
tema. En este caso se analizará el eje espectral, para ello,
Se suele dividir en tres regiones principales:
se lleva a cabo la comparación del espectro obtenido de un
Infrarrojo cercano: 0,78 a 2,5 µm (12800 a 4000 patrón de poliestireno certificado con el reportado por la
cm−1 ), predominan sobretonos y combinaciones de literatura.
modos vibracionales de moléculas. Por otra parte, para muestras líquidas se determina el
paso óptico de la celda, con ello se puede verificar que la
Infrarrojo medio: 2,5 a 25 µm (4000 a 400 cm−1 ),
celda no incluya efectos de interferencia y se garantiza la
predominan la vibraciones fundamentales de enlaces
reproducibilidad entre experimentos, el uso de estas celdas
y corresponde a la región más empleada.
permite realizar análisis cuantitativos.
Infrarrojo lejano: 25 a 1000 µm (400 a 10 cm−1 ), en
Se han desarrollado múltiples técnicas de análisis a tra-
donde ocurren vibraciones moleculares de baja fre-
vés del uso de la radiación infrarroja, dentro de las cuales el
cuencia.
FTIR convencional (transmisión con pastillas de KBr o cel-
En el infrarrojo, la energía proporcionada excita tran- das para líquidos) y el ATR (espectroscopia de reflectancia
siciones rotavibracionales de modos vibracionales funda- atenuada) son algunas de las más utilizadas. El funciona-
mentales, entre los que se encuentran los estiramientos miento del FTIR consiste en el uso de un láser de IR que se
(asimétricos y simétricos) y las flexiones, las cuales pueden divide por un interferómetro, uno de los láseres atraviesa la
ser en el plano del enlace (tijereteo y balanceo) o fuera del muestra y se encuentra con el otro para recombinarse, por
plano (torsión y aleteo). Para que exista una absorción, de- otra parte, el ATR utiliza un cristal de alta refracción para
be existir un cambio en el momento dipolar de la molécula generar una onda evanescente que interactúa con las capaz
durante la vibración, lo que se traduce como señales detec- más superficiales de las muestras [1]. Entre ambas técnicas
tables en el espectro, en consecuencia, moléculas con un se obtienen resultados similares, aunque puede variar en la
momento dipolar neto equivalente a cero, no son detecta- intensidad de las bandas o presentar la pérdida de algunas.
bles en infrarrojo. Ambas técnicas se complementan en la cantidad de mues-
Una característica muy importante de esta técnica co- tras que se pueden analizar, considerando la complejidad
rresponde a que las transiciones son características para de las muestras, por ejemplo, la técnica de ATR es muy útil
cada grupo funcional, por lo cual puede ser de mucha uti- para analizar muestras cuya preparación puede ser com-
lidad en la identificación cualitativa. Además, puede em- pleja en pastillas sólidas o líquidos.
plearse en cuantificación, siempre y cuando se establezcan En el presente trabajo se realizará la verificación de un
relaciones claras entre el cambio de absorbancia de un una equipo de FTIR a través del análisis de un patrón de po-
banda en específico, concentración, absortividad molar del liestireno, se realizará la comparación de los espectros de
grupo funcional considerado y el paso óptico. p-toluensulfonamida por transmitancia y reflectancia total

2 |1–12
atenuada. Finalmente, se estudiará la reacción de transes-
terificación de aceite de cocina de canola life®para produ-
cir biodiesel. Este aceite, según se indica en su etiqueta,
consiste de una mezcla de aceites grasos, mono y poliinsa-
turados, principalmente de omega 9 (ácido oléico), ome-
ga 6 (ácido linoléico), omega 3 (ácido alfa-linoléico) en
proporciones del 60, 20 y 10 % respectivamente, además
de ácidos grasos saturados de 16 (palmítico) y 18 (esteári-
co) carbonos, en proporciones del 5 y 2 % respectivamente,
concorde se muestra en la figura 1.
Cada uno de los ácidos que componen el aceite, se en-
cuentran en forma de triglicéridos, es decir como ésteres
unidos al glicerol. Durante la transesterificación, los grupos
Fig. 2 Espectrofotómetro de infrarrojo Thermo Fisher®, modelo
éster de los triglicéridos del aceite reaccionan con metanol Nicolet iS10 FTIR.
en medio básico para formar ésteres de metilo (biodiesel) y
glicerina como subproducto [2]. Mediante la comparación
de los espectros de IR del aceite original y del producto
refrigerado y su RCF máxima es de 16,816 xg.
obtenido, se podrá confirmar si la reacción ocurrió satis-
factoriamente.
3.3. Procedimientos
3. Materiales y métodos 3.3.1. Verificación con patrón de poliestireno
3.1. Reactivos Inicialmente, se encendió el espectrofotómetro y se re-
Durante los procedimientos experimentales realizados tiraron las bolsas de desecantes ubicadas en la cámara de
para la reacción y medición de las muestras, se utilizó acei- la muestra. A continuación se realizó un background. Se
te canola Life®, agua destilada, metanol, hidróxido de po- verificó que el equipo estuviera configurado en modo ab-
tasio, ácido sulfúrico concentrado (98 % p/p), p-toluen sul- sorbancia, con un total de 16 escaneos por espectro, una
fonamida y bromuro de potasio. Se empleó una celda de resolución de 4 cm−1 y un tiempo total de colecta de 23
IR para muestras líquidas con ventanas de cloruro de so- segundos.
dio (NaCl), un patrón de poliestireno de un grosor de 1,5 Posteriormente, se procedió a tomar el espectro de in-
mm, un mortero de ágata y un prensador manual para la frarrojo del patrón de poliestireno (iS10). El espectro ob-
preparación de muestras sólidas en pastillas con KBr. tenido es procesado mediante la aplicación de un ajuste
automático de línea base, un suavizado y una normaliza-
ción de la escala y conversión de la escala a porcentaje de
3.2. Equipos y material
transmitancia. Finalmente, se emplea la opción de identifi-
Se empleó un espectrofotómetro infrarrojo de transfor-
car picos para facilitar su respectivo análisis. Este proceso
mada de Fourier de la marca Thermo Fisher®, modelo Ni-
se realiza un total de 5 veces.
colet iS10 FTIR (figura 2). Este equipo cuenta con un de-
tector tipo DTGS, ventanas de bromuro de potasio (KBr)
recubiertas con fluoruro de calcio, y una fuente de radia- 3.3.2. Determinación del paso óptico
ción tipo Nernst. Adicionalmente, se utilizó el accesorio de Se realizó el background correspondiente. A continua-
muestreo Thermo Scientific smart iTX para el análisis por ción, una celda de IR para líquidos vacía, se colocó en el
ATR [3]. camino del paso óptico del espectrofotómetro, se midio su
Para llevar a cabo la reacción de transterificación, se espectro de infrarrojo conservando los parámetros mencio-
utilizó un matraz redondo de 100 mL, un baño de aceite, nados anteriormente. De este proceso se obtuvieron dos in-
una plancha de calentamiento y una columna de destila- terferogramas, uno en escala de absorbancia y el otro en %
ción de tipo vigreux. Adicionalmente, se empleó una ba- de transmitancia.
lanza analítica marca KERN AES que presenta una resolu-
ción de 0,0001 g, una incertidumbre de ± 0,0003 g y una 3.3.3. Comparación de espectros por FTIR y ATR
capacidad máxima de 220,0000 g. Se realizó la comparación de los espectros tomados por
Finalmente, se empleó una centrífuga marca MPW - FTIR y ATR para la p-toluenosulfonamida. En primer lugar,
251, cuya velocidad máxima es de 13000 rpm, es tipo no se realizó el espectro por FTIR. Para ello, una mínima can-
tidad de muestra (0,1 mg) se dispuso en un mortero de

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ágata y se maceró con bromuro de potasio (30 mg). Par- Con el fin de detener la reacción se adiciona 24 µL de
te de la mezcla pulverizada se transfirió a un molde de un ácido sulfúrico, el medio de reacción se dejó decantar por
prensador manual y, aplicando la presión adecuada se ge- aproximadamente una semana, se observó la aparición de
neró una pastilla translúcida. La pastilla se secó en la estufa dos fases (figura 4): la más densa correspondiente al glice-
a 98 °C por alrededor de 5 minutos para retirar exceso de rol y, la fase superior, al producto de interés, el biodiesel.
humedad y, finalmente, se midió el espectro FTIR conser-
vando los parámetros instrumentales y el procesamiento de
espectro previamente descrito.
En segundo lugar, se procedió a la obtención del espec-
tro por ATR. Con este fin, se retiró la cámara de la muestra
de FTIR y, en su lugar, se instaló el accesorio de muestreo
Thermo Scientific smart iTX para ATR, con la punta espe-
cífica para sólidos. A continuación, se depositó la muestra
sobre el diamante cubriendo totalmente la superficie. Lue-
go, se ajustó el brazo con punta metálica sobre la muestra,
asegurando un contacto adecuado entre éste y el diamante.
Finalmente, se midió el espectro de absorción y se realizó Fig. 4 Producto de la reacción después de una semana
decantando.
su respectivo procesamiento.

El biodiesel se trasvasó a un falcon y se lavó con al-

3.3.4. Reacción de transesterificación
gunas gotas de agua destilada caliente. Posteriormente, se
Se mezclaron 0,0479 ± 0,0003 g de hidróxido de po-
sometió a centrifugación durante 8 minutos a 5000 rpm. El
tasio y 1,54 ± 0,01 mL de metanol, a parte, se pesaron
sobrenadante obtenido correspondió al biodiesel, se trans-
5,0005 ± 0,0003 g de aceite de canola en un balón de fon-
firió a un nuevo tubo falcon, limpio y seco.
do redondo y se inició un suave calentamiento a 68 °C em-
Por último, se midieron los espectros de absorción por
pleando un baño de aceite y una plancha de calentamiento.
ATR tanto del aceite de canola, como del biodiesel, esto
A continuación, se adicionó la mezcla de metanol y agua,
concorde con la metodología descrita anteriormente para
tras lo cual se inicia la agitación y un reflujo con una co-
la p-toluensulfonamida, se empleó la punta específica para
lumna de destilación por aproximadamente 3 horas (figura
líquidos.
3).

3.3.5. Análisis estadístico

Ecuaciones de precisión y veracidad
Para el tratamiento de errores experimentales respecto
a los reportados por el fabricante, se usó el cálculo de erro-
res absolutos y el porcentaje de error relativo (ecuaciones
1 y 2 respectivamente). Para determinar la precisión de las
medidas se utilizaron el promedio, desviación estándar y
coeficiente de varianza para determinar la dispersión entre
las mediciones (ecuaciones 3, 4 y 5 respectivamente).

Eabs = Xre f − Xexp (1)

Eabs
%E = · 100 % (2)
Xre f

1 n
x̄ = ∑ xi (3)
n i=1
s
1 n
Fig. 3 Montaje de reacción para la transesterificación de aceite s= ∑ (xi − x̄)2
n − 1 i=1
(4)
de canola en esteres de metanol.

4 |1–12
 importantes del espectro en IR, se consideran interferentes
s
CV = × 100 % (5) significativos en la espectrofotometría infrarroja. [1]
x̄
En la figura 5-C también se presenta el espectro de
4. Resultados y discusión background tomado por reflectancia total atenuada (ATR).
4.1. Verificación con patrón de poliestireno Al comparar con el background tomado por FTIR se puede
observar que se comparten las bandas interferentes prove-
4.1.1. Análisis del Background
nientes del dióxido de carbono (CO2 ) y del vapor de agua.
Se realizaron mediciones del background previo a la ve-
Sin embargo, en el espectro de ATR surgen bandas fuertes
rificación del equipo y de cada medición de las muestras
entre 1900 y 2300 cm−1 . Estas bandas son asociadas a la
de interés del presente trabajo. A diferencia de los espec-
estructura cristalina del diamante, el cual es el material del
tros de IR convencionales, donde el eje de las ordenadas
que está hecho el recipiente de la muestra. La presencia de
corresponde a absorbancia o porcentaje de transmitancia,
esas interferencias pueden llegar a afectar la sensibilidad
en el background se observa el modo de medición “Single
de las mediciones en esa zona del espectro. [4]
Beam” como se observa en los espectros A y B de la figura
5. Esto se debe a que, al registrar el background, no se re-
quiere emplear el modo de doble haz, ya que no hay mues- 4.1.2. Análisis de la película de poliestireno
tra con la cual comparar. En su lugar, el espectro obtenido Para la verificación de la exactitud y precisión de las
pertenece al blanco, que en este caso, es el aire. medidas realizadas por espectrofotómetro IR, se utilizó una
Basado en la composición del aire, se esperan encontrar lámina de 1,5 mm de espesor de poliestireno como patrón
bandas producidas por dióxido de carbono (CO2 ) y vapor secundario, provista por el fabricante del equipo. Los es-
de agua. En este caso, aunque el nitrógeno (N2 ) y el oxí- pectros de infrarrojo obtenidos para las 5 réplicas en escala
geno (O2 ) se encuentren en mayor proporción, no son com- de porcentaje de transmitancia se muestran en el espectro
puestos activos en el infrarrojo y por ende, no se observan C de la figura 5. En la tabla 1 se presenta la comparación
en el background. Esto se debe a que estas moléculas son de las medidas de número de onda obtenidas respecto a
homonucleares, en consecuencia, no presentan cambios en las esperadas para el patrón reportada en el manual del
el momento dipolar en sus modos de vibración.[1] equipo.
En primer lugar, en el background se puede observar se- Para certificar la exactitud del equipo, las mediciones
ñales agudas entre 3760 ± 1 y 3540 ± 1 cm−1 , así como en de número de onda deben encontrarse ± 1 cm−1 del valor
el intervalo de 1920 ± 1 y 1360 ± 1 cm−1 . Estas bandas son esperado para la banda. Como se ve en la Tabla 1 el prome-
atribuidas al vapor de agua, una molécula no lineal (angu- dio de las mediciones para todas las bandas se encuentra
lar) con tres modos de vibración activos en el infrarrojo. en este rango; además, los errores relativos calculados no
Las señales a mayores números de onda son producidas superan el 0,05 % para todos los casos, indicando un gra-
por estiramientos simétricos y asimétricos del enlace O-H, do de exactitud satisfactorio. Respecto a la precisión de las
mientras que las vibraciones de alrededor de 1600 cm−1 se medidas, se evaluó la desviación estándar para cada una
deben a modos de flexión. A diferencia de estado líquido, de las bandas esperadas, considerando que las desviacio-
donde las moléculas de agua pueden formar puentes de hi- nes estándar son menores a 0,6 cm−1 , se considera que la
drógeno que provocan el ensanchamiento de las bandas; precisión del equipo es suficiente para el análisis de mues-
en el estado gaseoso estas interacciones están ausentes da- tras por espectrofotometría infrarroja.
da la distancia entre cada molécula, por lo que las señales
aparecen como bandas estrechas, intensas y definidas. 4.2. Análisis de espesor de celda
Respecto al dióxido de carbono, se clasifica como una En el análisis de una celda de líquidos para IR, con ven-
molécula lineal con tres vibraciones activas en IR. La señal tanas de cloruro de sodio (NaCl), se obtuvieron los inter-
observada en 2360 ± 1 cm−1 corresponde al estiramiento ferogramas en modo porcentaje de transmitancia que se
asimétrico del enlace C=O, pues el estiramiento simétrico muestran en la figura 6.
no causa un cambio en el momento dipolar de la molécula A partir de los interferogramas, se establece un rango
y es inactivo en IR. La señal en 667 ± 1 cm−1 pertene- de número de onda, que en este caso corresponde a 843 ±
ce en realidad a dos modos de vibración (flexiones), que 1,0 cm−1 y 1843 ± 1,0 cm−1 y, se determina la cantidad de
absorben las mismas cantidades de energía, es decir que franjas de interferencia presentes. Con esta información,
corresponden a estados degenerados y por lo tanto, apare- se emplea en la ecuación 6a con el fin de calcular el paso
cen como una única banda en el espectro IR. Considerando óptico de la celda de IR.
que el agua y el dióxido de carbono son activos en partes

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 Fig. 5 (A) Background medido por transmitancia (FTIR), (B) Background medido por reflectancia total atenuada (ATR), (C)
Resultados del análisis por quintuplicado de la película de poliestireno de 1,5 mm en el equipo Thermo Scientific Nicolet iS10.

Se obtiene que el paso óptico de la celda de IR para

líquidos es de (5,065 ± 0,007) mm. Si se considera la es-
pectroscopia de infrarrojo como método de cuantificación
empleando la ecuación de Beer-Lambert-Bouguer, este va-
lor resulta ser considerablemente menor en comparación
con los pasos ópticos comúnmente empleados en otras téc-
nicas espectroscópicas: 10 cm para AES y AAS o 1 cm para
espectroscopia de UV y UV-vis. Esta diferencia indica que,
para él caso de IR, se pueden llegar a requerir concentra-
ciones de muestra mayores para obtener señales compara-
bles, debido a la menor longitud del paso óptico del haz a
través de la muestra, sin embargo, esto es dependiente de
cada muestra analizada y de la sensibilidad con relación a
Fig. 6 Espectro de la celda para líquidos vacía. los grupos funcionales de la misma.

4.3. Comparación de espectros entre FTIR y ATR

∆N Se realizó una comparación entre los espectros infrarro-
b= (6a) jos tomados por transformada de fourier (FTIR) y por re-
2(v1 − v2 )
flectancia total atenuada (ATR) para la p-toluensulfonamida,
v2 → 843,0 cm−1 (6b) los cuales se muestran en la figura 7.
v1 → 1830,0 cm−1 (6c) A partir de los espectros se identificaron las bandas ca-
racterísticas para el compuesto y se realizó la comparativa
∆N → 10 (6d) entre los dos espectros respecto al número de onda e in-
10 tensidad de estas señales, las diferencias se reportan en la
b= = 0,005065 cm = 5,065 mm (6e)
2(1830,0 − 843,0)

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Tabla. 1 Resultados del análisis estadístico en la comparación de las bandas esperadas en el espectro del patrón secundario (poliesti-
reno), para el equipo Thermo Scientific Nicolet iS10.

Replica
Real 1 2 3 4 5 Prom. Desv. Error % Error
Banda %CV
(cm−1 ) (cm−1 ) (cm−1 ) (cm−1 ) (cm−1 ) (cm−1 ) (cm−1 ) Est. absoluto relativo
1 3060,00 3059,88 3059,50 3059,50 3059,50 3060,50 3059,78 0,44 0,01 0,22 0,01
2 2849,50 2849,60 2849,30 2849,30 2849,20 2849,30 2849,34 0,15 0,01 0,16 0,01
3 1942,90 1942,80 1942,00 1942,90 1942,90 1942,90 1942,70 0,39 0,02 0,20 0,01
4 1602,20 1601,20 1602,50 1601,60 1602,50 1601,60 1601,88 0,59 0,04 0,32 0,02
5 1583,00 1583,20 1582,30 1582,30 1582,30 1582,30 1582,48 0,40 0,03 0,52 0,03
6 1154,50 1154,70 1154,20 1154,20 1154,20 1154,20 1154,30 0,22 0,02 0,20 0,02
7 1028,30 1028,40 1028,80 1028,80 1028,80 1028,80 1028,72 0,18 0,02 0,42 0,04

Fig. 7 Espectros tomados por ATR y FTIR para la p-toluensulfonamida.

tabla 2. través de un material reflactante, genera una onda evanes-

En primer lugar, se observa que, en términos genera- cente cuya intensidad disminuye exponencialmente con la
les que no hay cambios significativos en la posición de las profundidad de penetración en la muestra [6]. Al interac-
bandas, presentándose diferencias en el número de onda tuar solo con una capa superficial del material, se involucra
cercanas a cero o menores a 5 cm−1 . No obstante, hay al- una menor cantidad de moléculas, lo que resulta en una
gunas excepciones, específicamente en las banda ubicadas menor absorción de la radiación suministrada con respec-
en los extremos del espectro, las bandas correspondientes a to a FTIR, esto se ve reflejado en un mayor porcentaje de
los estiramiento de N-H (>3120 cm−1 ) y la señal de 665,3 transmisión en ATR.
± 1,0 cm−1 muestran diferencias considerables en su posi- En consecuencia, considerando que en el caso de la p-
ción. Esto podría atribuirse al hecho de que, en la técnica toluensulfonamida no se observan diferencias significati-
de FTIR , al requerir una preparación previa con KBr en vas en la posición de las bandas en los dos espectros, ni
contacto con la atmósfera, existe la posibilidad de se absor- se presentan desaparición de señales características impor-
ba humedad, la cual puede interactuar con el grupo N-H e tantes para su identificación y, dado que la preparación de
interferir en las señales de espectro [5]. la muestra es más sencilla en la técnica de ATR, siendo
Por otro lado, se observa en todo el rango del espectro incluso más conveniente en términos de la reducción de
que la intensidad de las señales es considerablemente ma- interferencias como la del agua, se define que la espectros-
yor en FTIR en comparación con ATR. Este fenómeno se copia por ATR resulta más adecuada para este caso.
puede explicar desde las diferencias entre ambas técnicas,
la radiación interactúa con la muestra de maneras distin- 4.4. Reacción de transesterificación
tas. En FTIR, la radiación atraviesa un volumen de muestra, En la producción de biodiesel a partir de aceite de ca-
lo que le permite la interacción con una mayor cantidad de nola, se consideró que los ésteres están como triglicéridos,
moléculas. En cambio, en la técnica de ATR, la radiación a con mezclas de los distintos ácidos que lo componen, prin-

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Tabla. 2 Reporte de las bandas obtenidas en el análisis de p-toluensulfonamida por FTIR y ATR.

ATR %T
Número de Número de δ número de
%T %T δ %T Vibración
onda (cm−1 ) onda (cm−1 ) onda (cm−1 )
3317,0 48,80 3328,5 27,71 11,57 21,09
Estiramiento
3231,2 41,54 3244,7 25,65 13,50 15,89
N-H y O-H
3120,3 67,57 3122,2 49,82 1,93 17,75
3051,8 88,50 3051,8 73,35 0,00 15,15
Estiramiento C-H
3033,5 88,00 3033,5 70,71 0,00 17,29
sp2 aromático
3032,5 88,21 3031,6 70,72 0,96 17,49
2923,6 89,93 2923,6 68,87 0,00 21,06 Estiramiento C-H sp3
1917,9 91,00 1917,9 76,25 0,00 14,75 Sustitución
1805,1 94,00 1803,1 82,15 1,93 11,85 anillo
1647,9 93,06 1651,7 69,27 3,85 23,79 Estiramiento C=C
1595,8 69,03 1595,8 43,25 0,00 25,78
Estiramiento C=S
1571,7 59,30 1574,6 44,65 2,89 14,65
1493,6 80,32 1493,6 62,92 0,00 17,40
Flexión H-C-H
1401,0 83,13 1402,0 54,46 0,97 28,67
1321,0 16,91 1325,8 12,73 4,82 4,18
1287,3 40,62 1287,3 39,18 0,00 1,44 Estiramiento
1147,4 14,31 1151,3 10,06 3,86 4,25 O=S=O simétrico
1091,5 21,13 1093,4 13,35 1,93 7,78 y asimétrico
1016,3 60,00 1016,3 42,47 0,00 17,53
906,4 31,56 907,3 32,37 0,96 0,81 Flexión C=S-X
Flexión C=C de la
805,1 20,38 809,0 21,23 3,86 0,85
sustitución 1,4

cipalmente del ácido oléico que es monoinsaturado y sus miendo que se compone al 100 % de ésteres, el resultado
derivados linoléico y alfa-linoléico, la principal mezcla que se observa en la ecuación 9.
se presenta en el aceite es la trioleína, dada la proporción
de ácido oléico, esta se compone de 3 grupos oleato uni-
5, 0005
dos al glicerol. Mediante la información suministrada por mol esteres = = 5,84x10−3 mol ésteres
856, 85g/mol
el fabricante y lo reportado en literatura relacionado a la (9)
proporción de los ésteres que componen el aceite, se realizó De acuerdo a la literatura, para la reacción de transeste-
un promedio de la masa molar para considerar la cantidad rificación se recomienda un medio básico con una propor-
de precursor que está presente en 5 g de aceite, como re- ción 6:1 de las moles de metanol y de catalizador (base)
sultado se obtuvo lo presentado en la ecuación 7, en donde utilizadas con respecto a las de los ésteres. Obteniendo las
se muestra la masa molar promedio de los ácidos. Al consi- ecuaciones 10 y 11 para el metanol y la base de hidróxido
derar que se encuentran en forma de ésteres con el glicerol, de potasio respectivamente.
es decir que son 3 ácidos y un glicerol por cada molécula,
se obtiene la masa molar presentada en la ecuación 8.
g 1mL
mL MeOH = 5, 84x10−3 mol ∗6∗32, 04 MeOH ∗ MeOH
mol 0, 79g
(10)
Mm promedio = 282, 47 ∗ 0, 6 + 280, 45 ∗ 0, 2 + 278, 43 ∗ 0, 1
= 1,42 mL MeOH
(7)
256,42*0,05+284,48*0,02 = 271,93 g/mol
g
g KOH = 5, 84x10−3 mol ∗6∗56, 11 MeOHKOH = 1,9647 g KOH
mol
(11)
Mm esteres = 3 ∗ 271, 93 + 41, 072 = 856,85 g/mol éster
Un factor muy importante a considerar para no afectar
(8)
el rendimiento de la reacción son las reacciones adversas
Con base en estos resultados, se determinó la cantidad
indeseadas, en este caso, la principal consiste en la sapo-
de moles presentes en los 5,0005 ± 0,0003 g de aceite, asu-

8 |1–12
nificación de los ésteres con el hidróxido utilizado, consi- muy similar, así como la sensibilidad de la técnica a estos
derando este factor, se utilizó aproximadamente la cuarta cambios moleculares tan pequeños, se obtienen espectros
parte de masa de KOH. Por otra parte, con el propósito en los cuales las principales bandas que caracterizan a los
de favorecer la formación de los productos deseados y me- grupos funcionales de los ésteres, se llegan a encontrar en
diante el principio de Le Chatelier, es la razón de utilizar exactamente el mismo número de onda.
un exceso de metanol en la proporción molar. Las bandas que caracterizan los ésteres sintetizados son
El paso previo a la mezcla de todos los reactivos consis- las de el estiramiento del enlace C=O (1740 ± 1,0 cm−1 ),
tió en la reacción ácido base del metanol con el catalizador el estiramiento del enlace C-O (1240 a 1110 cm−1 ) y fi-
(KOH), la reacción se ilustra en la figura 8, el hidróxido nalmente las asociadas al doble enlace cis de las grasas ve-
de potasio es una base fuerte y al reaccionar con el meta- getales (860 cm−1 y 650 cm−1 en la flexión asimétrica del
nol, se forma agua y metóxido de potasio. Una característi- enlace), la última banda mencionada es característica tam-
ca importante de los metóxidos es su inestabilidad termo- bién de la flexión asimétrica de compuestos que poseen 4
dinámica, la cual los conduce a reaccionar fácilmente co- o más grupos metileno (-CH2 -) unidos en cadena. Las ban-
mo nucleófilos con centros electrofílicos como los carbonos das son indicadas en el espectro con las vibraciones que
carbonílicos. Finalmente, a través del ataque nucleofílico, las provocan. Con el propósito de facilitar el entendimien-
se favorece la salida del mejor grupo saliente, en este caso, to de los espectros obtenidos y las vibraciones asociadas a
debido al exceso de metanol corresponde al glicerol, como las bandas, se desarrolló la tabla 3.
se ilustra en el esquema de reacción de la figura 9. En las bandas en el espectro del patrón de FAMES se
observa la presencia de un estiramiento de enlace O-H en
3440 ± 1,0 cm−1 , esta se asocia a la contaminación de la
muestra con agua al momento de medir el espectro, por
otra parte, en el espectro de FAMES están ausentes las ban-
das asociadas a la presencia de dobles enlaces: la de 3010
Fig. 8 Reacción de metanol con hidróxido de potasio. ± 1,0 cm−1 , correspondiente al estiramiento C-H de carbo-
nos con hibridación sp2 (presente en alquenos) así como
la inexistencia de la señal de baja intensidad de 1650 ±
1,0 cm−1 , asociada al estiramiento del doble enlace C=C.
Considerando lo anterior se infiere que el FAMES está com-
puesto principalmente por ésteres saturados como el me-
til palmitato (C16) y metil estearato (C18). Ambas señales
procedentes de los grupos alqueno se evidencian en el es-
Fig. 9 Reacción de metóxido de potasio con ésteres del aceite pectro del aceite de cocina y del biodiesel obtenido, lo cual
para formar ésteres de metilo (biodiesel). era lo esperado, ya que en la etiqueta del aceite se indica
una composición mayoritaria de ácidos grasos insaturados
Finalmente, para neutralizar la base restante de la so- tales como omega 3, 6 y 9. La banda asociada al estira-
lución, se adicionó la cantidad de ácido sulfúrico concen- miento del enlace C=C se indica en la figura 11 en la parte
trado necesaria, y se procedió a purificar el producto de la izquierda superior.
reacción. En cuanto al seguimiento de la reacción, a simple vis-
Para seguir el avance de la reacción, se midió el precur- ta puede parecer que no es posible confirmar la formación
sor (aceite de canola), el producto sintetizado después de del producto debido a la similitud del biodiesel con el es-
la purificación (biodiesel) y un patrón de ésteres de metilo pectro del aceite de partida. No obstante, un análisis más
de ácidos grasos (FAMES). En la figura 10 se presentan los detallado permite identificar dos bandas características in-
espectros tomados por ATR. dicativas de la formación de ésteres metílicos, las bandas
En términos generales, se observa un comportamiento son seleccionadas considerando que se presentan en los es-
casi idéntico en los espectros para cada uno de los pro- pectros del producto y del patrón de FAMES, mientras el
ductos analizados, esto es esperable considerando que las aceite de canola no las produce.
estructuras de cada éster no cambia considerablemente, la La primera banda se produce en 1440 cm−1 , atribuida a
mayor parte de su estructura (la cadena carbonada) no se la flexión de los enlaces H-C-H, posiblemente relacionada
ve afectada en la reacción, y la parte que es sometida a con la adición del grupo metoxilo (O-CH3 ). Cabe destacar
un cambio, no tiene uno significativo. Considerando que la que en el metanol esta señal aparece en 1460 ± 1,0 cm−1 ,
naturaleza y longitud del grupo alquilo intercambiado es con una intensidad relativa del 47 % [7], lo que podría con-

1–12 | 9
 Fig. 10 Espectros tomados por ATR para el precursor (aceite de canola), el producto de ésteres de metilo(biodiesel) y un patrón de
ésteres de metilo (FAME´s) de la reacción de tranesterificación.

Tabla. 3 Reporte de las bandas obtenidas por ATR en el análisis de de la reacción de transesterificación de aceite de canola.

Aceite Biodiesel patrón FAMES

Número de Número de Número de
%T %T %T Vibración
onda (cm−1 ) onda (cm−1 ) onda (cm−1 )
- - - - 3440 86,8 Estiramiento O-H
3010 77,1 3010 74,9 - - Estiramiento C-H sp2
2920 15,0 2920 18,2 2920 15,0
Estiramiento C-H sp3
2850 26,4 2850 30,2 2850 27,2
1740 10,2 1740 17,1 1740 10,2 Estiramiento C=O
1650 91,0 1650 95,9 - - Estiramiento C=C
1460 49,3 1460 59,5 1460 50,1
- - 1440 58,7 1440 44,3 Flexión H-C-H
1380 65,8 1360 77,3 1360 60,9
1240 50,4 1240 63,4 1240 45,5
- - 1200 51,4 1200 31,0
1160 22,6 1170 44,9 1170 21,9 Estiramiento C-O
1090 42,8 1090 82,0 1110 52,6
1030 68,5 1020 87,1 1010 62,5
869 79,6 881 95,5 880 80,4
Flexión C=C cis
722 41,7 723 72,3 721 65,2

firmar esta apreciación. La segunda banda se produce en líquidos. Como se mencionó previamente, la intensidad y
1200 cm−1 , corresponde al estiramiento del enlace C-O, la definición de las bandas puede ser considerablemente más
cual, junto con la presencia de la señales en 1240 ± 1,0 intensa por FTIR que en ATR.
cm−1 y 1170 ± 1,0 cm−1 , se han reportado como carac- En consecuencia, considerando la presencia de estas
terísticas de ésteres de metilo de ácidos grasos de cadena dos señales, es posible afirmar que la reacción de transes-
larga [7]. Al consultar en las bases de datos los espectros terificación fue efectiva.
del precursor, en este caso la trioleína, que es el triglicérido Teniendo en cuenta que usualmente se desea utilizar
principal y de los productos, oleato de metilo, (compuesto como bandas diagnóstico aquellas que sean intensas y que
principal), se observa de manera mucho más clara la au- sean fácilmente identificables, se puede seguir esta reac-
sencia y presencia de las bandas mencionadas, en la figura ción por espectroscopia infrarroja, sin embargo, no se reco-
11 se señalan las bandas de interés en los espectros del mienda realizar una cuantificación mediante esta técnica,
AIST y en los experimentales, la causa de que no se vean las bandas seleccionadas aparecen en la zona del espectro
tan definidas las bandas en los experimentales, se asocia de la huella digital, en la que se pueden observar una gran
a que se utilizó ATR para tomar el espectro, mientras en cantidad de vibraciones moleculares y que suele ser com-
los espectros reportados se utilizó FTIR de película para pleja. Ambas bandas se solapan parcialmente con otras pro-

10 |1–12
 Fig. 11 (A) y (B) corresponden a los espectros reportados en el AIST del precursor de trioleína y el producto (oleato de metilo), (C)
corresponde a las bandas importantes en los espectros tomados por ATR para el precursor (aceite de canola), el producto de ésteres de
metilo(biodiesel) y un patrón de ésteres de metilo (FAMES) de la reacción de tranesterificación.

ducidas por grupos similares. Un seguimiento cuantitativo como patrón secundario. Se determinó el espesor de una
por esta técnica implica incertidumbre. celda de NaCl en 5,065 ± 0,007 mm. A partir de espectros
Dentro de las técnicas que se suelen utilizar para cuan- de ATR y FTIR de la p-toluensulfonamida se observaron
tificar la concentración de biodiesel, el infrarrojo por ATR algunas diferencias como una mayor intensidad en los es-
es utilizado para determinar concentraciones del 1-20 % se- pectros de transformada de Fourier, debido a las formas en
gún la norma ASTM D7371, en esta, se pretende determi- las que interactúa la radiación con la materia en ambas téc-
nar su presencia en mezclas de diésel fósil, estas se caracte- nicas; no obstante, para el análisis del aceite de canola y el
rizan por contener principalmente mezclas de hidrocarbu- biodiesel se decidió usar ATR debido a su mínima prepara-
ros alifáticos y aromáticos, así como compuestos azufrados, ción de muestra, y a que no hay cambios significativos en la
en ese sentido, las bandas características de los FAMES se posición (número de onda) de las bandas. El análisis y se-
distinguen fácilmente y no estarán sujetas a un sesgo. Para guimiento de la transesterificación del aceite de canola se
la cuantificación de estos compuestos y su rendimiento en logró satisfactoriamente mediante los espectros de trans-
la reacción en concentraciones hasta del 100 %, se utiliza mitancia por ATR. Se utilizaron principalmente las bandas
la norma EN14103, en la cual se describe el uso de croma- ubicadas en 1200 ± 1,0 cm−1 (C-O) y 1440 ± 1,0 cm−1
tografía de gases acoplada a un detector de ionización por (H-C-H) para el seguimiento de la reacción. Basado en la
llama (GC-FID), o la EN 14105, en la cual se describe el comparación con el reactivo, con el patrón de ésteres de
uso de HPLC. metilo de ácidos grasos y de los espectros reportados en
literatura, se concluye que la reacción transcurrió satisfac-
4.5. Conclusiones toriamente.
Se verificó el correcto funcionamiento del espectrofotó-
metro Thermo Scientific Nicolet iS10 usando poliestireno

1–12 | 11
5. Referencias
1 Skoog, D., Holler, J., Crouch S. Principios de análisis
instrumental (6. ed), México D.F, Cengage Learning.
2008

2 Torossi, Favio.. Reacciones en contexto: la transeste-

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aceite de fritura usado. Anales de la Real Sociedad
Española de Química, ISSN 1575-3417, Nº. 3, 2006,
p.p.. 43-49.

3 Thermo Fisher. Thermo scientific nicolet iS10 FTIR

spectrometer. Recuperado el 19 de junio del 2025 a
través [Link]
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4 Harrick Scientific Products. (2019). A Diamond ATR-

FTIR Study of Nitriles. Application Notebook, 34 (2).
p. 1-2. [Link] /view/
diamond-atr-ftir -study-nitriles

5 Melanie M. Beasley, Eric J. Bartelink, Lacy Taylor, Randy

M. Miller. Comparison of transmission FTIR, ATR, and
DRIFT spectra: implications for assessment of bone
bioapatite diagenesis. Journal of Archaeological Scien-
ce, Volume 46, 2014, Pages 16-22, ISSN 0305-4403,
[Link]

6 Mettler Toledo. Reflectancia total atenuada (ATR). In-

formación recuperada en 22 de junio del 2025 a tra-
vés del portal: [Link] /ap-
plications/L1_AutoChem _Applications/ftir- spectros-
copy/ attenuated- [Link]

7 Spectral Database for Organic compounds (SDBS).

Espectro de infrarrojo del metanol. Recuperado el 22
de junio del 2025 a través del portal: [Link]
[Link]/[Link]?sdbsno=3302.7]

8 Silverstein, R. WEbster, F. Spectrometric identifica-

tion of organic compounds (6. ed), Universidad de
New York. 1996, p. 99.

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