TUBERCULOSIS

La familia Mycobacteriaceae contiene un solo género, el género Mycobacterium, del

que en sus orígenes sólo se conocían dos especies:
●​ El bacilo de la lepra o Mycobacterium leprae (A. Hansen 1874) y el bacilo
tuberculoso o M. tuberculosis.
●​ Actualmente en el género Mycobacterium se han descrito más de 150 especies
diferentes.

Mycobacterium tuberculosis
En 1882, Robert Koch describió el agente etiológico de la tuberculosis (TB) y lo
denominó Bacterium tuberculosis

El nombre inicial fue sustituido por el de Mycobacterium tuberculosis en 1896 por

Lehmann y Neumann

El término Mycobacterium significa hongo-bacteria, y esta denominación se debe al

aspecto de los cultivos, que en ciertos aspectos recuerdan a los hongos

Mycobacterium tuberculosis complex

Engloba a un grupo de micobacterias que presentan >95% de homología en su DNA y
que se designa como “Complejo M. tuberculosis“ (o MTC).
Está compuesto, además de M. tuberculosis, por Mycobacterium bovis, M. bovis BCG
(una cepa variante de laboratorio utilizada en vacunación ),Mycobacterium africanum
(principal causante de la TB en África tropical), Mycobacterium microti (causante de la
TB en roedores, llamas y otros mamíferos) y Mycobacterium canetii

Mycobacterium no tuberculosis (MNT)

En la actualidad el 10-30 % de las micobacterias aisladas en laboratorios clínicos
corresponden al grupo de las micobacterias no pertenecientes al Complejo M.
tuberculosis.
Este grupo heterogéneo de micobacterias ha recibido históricamente otros nombres
como micobacterias atípicas, “Mycobacterium other than tuberculosis” (MOTT),
micobacterias ambientales o micobacterias oportunistas (MNT)(Mycobacterium no
tuberculosis)

Fisiología y estructura de micobacterias

Se pueden clasificar en función de su tasa de crecimiento :

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❖ Especies rápidas (necesitan 3 días para formar colonia) M. fortuitum, M. chelonae,
M. abcessus
❖ Especies de crecimiento lento (3 – 8 semanas de incubación) La gran mayoría de las
micobacterias de interés clínico tienen un crecimiento muy lento 15 a 18 horas en con
un tiempo de multiplicación de condiciones favorables.
De ahí que sean necesarias de 1 a 3 o más semanas incubación para obtener un
crecimiento apreciable medios de cultivo convencionales. de en los M. tuberculosis, M.
avium-intracelulares (MAI), M. kansasii.

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Género mycobacterium
❖ Las micobacterias son capaces de sobrevivir durante semanas o meses sobre
objetos inanimados, siempre que estén protegidas de la luz solar.
❖ Son más resistentes a los ácidos, álcalis y desinfectantes que el resto de las
bacterias no formadoras de esporas.
❖ Resisten la desecación y la congelación
❖ La luz ultravioleta y el calor (>65º C durante 30 minutos) las inactiva

❖ Bacilos intracelulares, rectos o ligeramente curvos

●​ aerobios, inmóviles , no esporulados,
●​ no capsulados

❖ A veces forman cadenas ramificadas que se rompen con facilidad

❖ Se tiñe con fucsina fenicada alcalina en caliente (coloración de Ziehl-Neelsen) y

resisten la decoloración con ácido en medio alcohólico
Esta particularidad las define como bacilos ácido alcohol resistentes. (BAAR)

❖ Se caracterizan por ser bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR)

❖ Debido al alto contenido en lípidos (que tienen en su pared celular, impide que
penetren los colorantes por lo que pueden ver en la tinción de Gram

Los betalactámicos no funcionan porque la pared celular no tiene la misma estructura

y van a inducir la respuesta inmune del huésped.

Pared celular
La pared micobacteriana

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❖ Posee un elevado contenido en lípidos (50–60%) que le confieren un carácter
hidrofóbico
❖ Es una efectiva barrera frente a muchos de los convencionales agentes
antimicrobianos
❖ Constituida por el complejo macromoleculararabinogalactano–peptidoglucano
(mAGP).
❖ En la membrana plasmática se anclan formado por ácidos micólicos :proteínas,
manósido de fosfatidilinositol y Lipoarabinomanano (LAM)
❖ Los ácidos micólicos son ácidos grasos complejos de gran importancia
taxonómica para micobacterias
❖ Los glicolípidos junto con algunas proteínas son responsables de las
características antigénicas de la bacteria

Esta pared consta de cuatro capas : Constituida por el complejo macromolecular

formado por ácidos micólicos–arabinogalactano–peptidoglicano (MAGP).
●​ Más interna es el peptidoglicano con moléculas de N-acetilglucosamina t aido
Nglucolimuramico. Esta capa da rigidez y forma a la bacteria.
●​ La segunda posee arabinogalactanos que se encuentran unidos a los ácidos
micólicos de la tercera capa.
●​ La tercera capa, formada por ácidos micólicos que son ácidos grasos de
cadena larga, (70 a 90 átomos de carbono) de gran importancia taxonómica.
La composición varía en función de la especie de micobacteria.
●​ La capa más externa (cuarta capa) se encuentra constituida por lípidos como
el cord factor (trehalosa 6,6 dimicolato) llamado así por su aparente asociación
con la forma acordonada con que se agrupan las micobacterias virulentas.

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Factores de virulencia de mycobacterium tuberculosis
❖ Los derivados de los fosfolípidos se caracterizan por estar altamente glicosilados
dando lugar a moléculas como el lipoarabinomanano (LAM), que tienen un papel
fundamental en la patogénesis de la tuberculosis

El cual se une a los receptores de manosa de macrofagos y promueve la

penetración de los mismos. Estimula la liberación de IL-9 que induce la quimiotaxis de
granulocitos que contribuyen al daño del tejido.

Factor Cord (cordon) (trehalosa 6,6 dimicolato) inhibe la fusion de los lisosomas de
los macrofagos con los fagosomas, fenomeno que se considera clave para la
supervivencia de [Link] dentro de los macrofagos. Es un estimulante de la
respuesta inflamatoria.
Debido a este factor las microbacterias en cultivo se agrupan formando
conglomerados que asemejan a una cuerda.
El lipoarabinomanano junto con el factor de cordón permiten producir granulomas
tuberculosos y necrosis de los tejidos.
El factor cord es la unión de glucolípidos y ácido nucleico y evita la lisis de la bacteria
por parte de los macrófagos alveolares.

❖ Sulfátidos Inhiben la fusión entre los lisosomas secundarios y los fagosomas y

permiten la supervivencia de M. tuberculosis dentro de los Macrófagos . Promueven la
liberación de TNF-α , que induce daño celular

Ureasa, arginasa, glutaminasa y asparaginasa. Producen la liberación de amoniaco

que inhibe la fusión entre el fagosoma y los lisosomas. Así la micobacteria asegura la
supervivencia intracelular.

Granuloma: micobacterias, macrofagos alveolares, células epitelioides y células

gigantes de Langans forman el núcleo central de una masa necrótica que está
rodeada de una pared de linfocitos y macrofahos. Impide la diseminación posterior de
la bacteria.
La virulencia de la bacteria se asocia a su capacidad de multiplicarse dentro de los
macrofagos.

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Patogenia

Los macrófagos secretan Interleucinas y Factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) en

respuesta a la infección
Estas citoquinas aumentan la inflamación localizada al reclutar LT células citolíticas
(NK) hacia la zona de los macrófagos infectados y se secreta interferón γ (gamma)
Cuando existe interferón γ los macrófagos infectados se activan aumenta la fusión
entre el fagosoma y los lisosomas y la destrucción intracelular
Las personas que tienen disminución de interferón γ o (TNF-α) mayor riesgo de
infecciones severas
La eficacia de la eliminación bacteriana va a depender en parte del tamaño del foco
de la infección

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Grupos de riesgo de TBC
Sintomáticos respiratorios que acuden a la consulta médica por sus síntomas,
principalmente tos y expectoración persistente .

Contactos (convivientes ) de enfermos pulmonares bacilíferos, especialmente niños y

jóvenes

Personas infectadas con el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH), que por ser
un grupo de alto riesgo debe ser controlado permanentemente con bacteriología y/o
radiología.

Adictos al alcohol y/o drogas.

Enfermos diabéticos o con otras enfermedades que comprenden el sistema

inmunitario y/o en tratamiento prolongado con corticoides o inmunosupresores,
desnutridos, dializados.

Recién nacidos, infantes y adultos mayores de 60 años.

Personas que presentan imágenes radiológicas pulmonares con anomalías. (Ministerio

de Salud. Normas técnicas 2009)

Diagnostico microbiologico
Cuanto mayor es el número de enfermos que están expectorando bacilos en la
comunidad, mayor es la diseminación de la tuberculosis

Un diagnóstico oportuno y un inicio precoz del tratamiento no solo reducen el riesgo

de transmisión sino también las secuelas clínicas, económicas y sociales de la
enfermedad.

El diagnóstico se confirma identificando el agente causal, y para ello son

fundamentales los métodos bacteriológicos

Muestras: selección, recogida, transporte y conservación

Las muestras remitidas al laboratorio deben cumplir una serie de condiciones
generales de las que depende la calidad y eficiencia de los resultados microbiológicos:
indicación correcta del estudio de micobacterias

Selección de la muestra más representativa y rentable, recogida de forma esteril en

cantidad suficiente y si es posible antes del inicio del tratamiento antimicrobiano.

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No deben utilizarse fiadores ni sustancias conservantes.

Tampoco es recomendable emplear hisopos o torundas de algodón.

Las muestras se deben recoger y enviar en contenedores estériles de un solo uso y con
cierre hermético.

Expectoración espontánea :Esputo

●​ El paciente no debe ingerir alimentos en las 2 horas previas, ni cepillarse los
dientes. Debe realizar varios buches con agua.

●​ La mejor muestra es la primera expectoración de la mañana. Deben obtenerse

esputos seriados .Se recolectaron 3 muestras seriadas en días consecutivos

●​ Un concepto clásico en el diagnóstico de la tuberculosis es que la eliminación

de bacilos, en muchos casos puede ser intermitente

●​ Las muestras una vez obtenidas, bien cerrado el frasco y bien identificadas, se
transportan al laboratorio lo más rápidamente posible.

●​ Si va a transcurrir más de una hora entre la expectoración y la recepción en el

laboratorio deberá permanecer en frío (4-8ºC) y no a temperatura ambiente

Lavado gástrico :
❖ Se utiliza para investigar M. tuberculosis u otra micobacteria (pacientes con
Sida).Se busca el esputo deglutido sobre todo en niños pequeños (muestra de
elección) o en aquel paciente incapaz de expectorar.

❖ Debe ser realizado antes que el paciente se levante, cuando todavía no ha

comenzado el peristaltismo intestinal que eliminaría rápidamente los micobacterianos
deglutidos bacilos durante la noche( con un reposo de 6-8 hs),

❖ El lavado se realiza con Solución fisiológica estéril

❖ Remitir en un frasco con un medio de transporte neutralizante (Carbonato de Na y

fosfato trisódico). Es ideal un seriado de tres muestras

LAVADO BRONCOALVEOLAR : BAL

❖ Recolectar también la expectoración post BAL (muy redituable)
❖ De las muestras obtenidas por técnicas broncoscopicas: (Broncoaspirados, lavado
broncoalveolar y cepillado bronquial)
❖ Se deben enviar al menos 5 ml deben procesarse lo antes posible para su estudio,
teniendo en cuenta que ya que la lidocaína, anestésico utilizado frecuentemente en la
broncoscopia, inhibe el crecimiento de estas bacterias

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❖ Es importante que se informe al laboratorio del tipo de esputo enviado que los
inducidos tienden a ser más acuosos.
❖ Aunque el esputo hemoptoico , ya pueda ser clínicamente orientativo, la sangre del
mismo puede interferir el rendimiento diagnóstico. No obstante, cuando no se
disponga de otro, se debe procesar

Toque laríngeo o hisopado laríngeo : (Poco utilizada)

●​ Se utiliza cuando no se puede obtener expectoración y el cuadro clínico no
permite un procedimiento invasivo.
●​ El hisopo humedecido en Sol Fisiológica se introduce hasta la laringe y se le
indica al paciente que tosa .
●​ Se recogen las secreciones sin tocar partes blandas de la boca.
●​ Se realiza en 3 días diferentes

Orina: sospecha de TBC renal

Cantidad y momento de recolección :
●​ 3 Muestras (máximo 6) previa higiene externa con agua, el paciente debe
recoger no menos de 50 ml de la primera micción de la mañana desechando la
primera parte para disminuir la carga de gérmenes contaminantes.
●​ Conservación: la muestra debe ser procesada inmediatamente porque el pH
ácido afecta la viabilidad del bacilo
●​ La baciloscopia positiva del sedimento de orina no necesariamente es
diagnóstico concluyente de tuberculosis, por cuanto existen micobacterias
saprófitas urinarias que pueden producir resultados falsos positivos. en el
tracto
●​ El diagnóstico debe ser completado con cultivo e identificación del bacilo
observado.

SANGRE: Se recomienda inocular en los medios de cultivo de los nuevos sistemas

automático o bien utilizar técnicas de lisis-centrifugación (Isolator System)
Guantes estériles con 2 procesos de antisepsia.

TEJIDOS (BIOPSIAS): Pulmonar ganglionares, óseas y médula ósea

Se precisa un mínimo de 1 gramo de tejido.
Para evitar la deshidratación de las muestras de biopsia deben enviarse al laboratorio
en suero fisiológico o bien en medio líquido 7H9 de Middlebrook.
Nunca debe utilizarse formol ya que haría inviables a las micobacterias, distinto que el
laboratorio de patología ya que miran otras cosas. Se debe distinguir claramente entre
las muestras enviadas al laboratorio de anatomía patológica y microbiología.
El transporte rápido de las muestras al laboratorio es fundamental.
La conservación deberá hacerse a 4° C siempre que sea posible.

LÍQUIDOS ESTÉRILES :
Cefalorraquídeo, articular, peritoneal, pleural, pericárdico, etc.

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Siempre debe recogerse el mayor volumen posible (10 a 15 ml), debido al bajo
número de bacilos presente.

Como algunos líquidos (ej., articulares) contienen una elevada cantidad de fibrinógeno
, este tipo de muestras deberán recogerse en un tubo con anticoagulante.
El transporte rápido de las muestras al laboratorio es fundamental. La conservación
deberá hacerse a 4ºC siempre que sea posible

HECES
Se recomienda el estudio de tres muestras de al menos 1 g cada una. Su
procesamiento debería ser inmediato.

Cantidad de muestras
Todas las que el médico cree conveniente cuanto mayor es la cantidad de muestras
procesadas mayor es la probabilidad de hallazgos de bacilos.
La cantidad insuficiente de muestra podría suponer un resultado de cultivo falso
negativo.
En el agua y otros fluidos pueden existir micobacterias viables que forman parte de la
microbiota normal.
Las contaminaciones por estas micobacterias saprofitas puede producir cultivos y/o
microscópicas falsamente positivas.
Micobacterias saprofitas pueden aislarse también de los lavados gástricos u otros
orígenes humanos.

1)​ Exámen Microscópico :Baciloscopia (muestra)

❖ Coloración de Ziehl-Neelsen
❖ Semicuantificación de los BAAR
2)​ Cultivo:
❖ Decontaminación de la muestra (con el fin de destruir la flora acompañante
que crece más rápidamente)
❖ Siembra en Lowenstein-Jensen /Stonebrink/Medios líquidos en sistemas
automatizados(Ej: BACTEC)
❖ En condiciones óptimas de cultivo tarda varias semanas en aparecer
colonias visibles
3)​ Métodos Moleculares (PCR )Técnicas de amplificación de ácidos nucleicos
(detección en la muestra)
4)​ Identificación en laboratorios de referencia :Sondas moleculares específicas de
especie
5)​ Dosaje de adenosina deaminasa (ADA) Sospecha de tuberculosis
extrapulmonar: pleural, peritoneal y sistema nervioso central

❖Todo el procesamiento, debe llevarse a cabo en cabinas de seguridad biológica y

por personal bien entrenado.

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❖Deben extremarse las medidas y los controles para evitar tanto la contaminación del
personal, como la de otras muestras que se procesan al mismo tiempo

El examen microscópico directo de las muestras clínicas, mediante técnicas

específicas de tinción (baciloscopia) , es rápido con una Especificidad: 96-99% .La
limitación más importante es su baja sensibilidad. (40-70%) en muestras respiratorias
Para ser positiva se necesitan 5000-10.000 BAAR/ml de muestra

Los cultivos son los más sensibles y más lentos . Detectan 10-100 BAAR/ ml muestra

Las técnicas moleculares basadas en amplificaciones genómicas tienen una

sensibilidad menor que los cultivos pero son más rápidas

PCR positiva para M. tuberculosis (banda de material genético señalizada) en el caso 2

y muestra control.

El Exámen microscópico permite:

●​ Valorar la calidad de las muestras recibidas,
●​ Identificar los pacientes más contagiosos
●​ Monitorear la respuesta de los pacientes al tratamiento antimicobacteriano.
Sin embargo, una tinción negativa no descarta una posible infección micobacteriana
subyacente

Durante la ˙última década se han desarrollado diferentes Métodos Moleculares,

especialmente de amplificación genómica, para la detección e identificación del
complejo M. tuberculosis directamente en muestras clínicas.

Baciloscopia
Tienen por objeto, poder visualizar en el microscopio la presencia o no de BAAR
(bacilos ácido- alcohol resistentes) en las muestras.
Actualmente siguen constituyendo la forma más rápida y económica para
diagnosticar la TB.
Se ha reconocido internacionalmente a la por técnica de ZN baciloscopía seriada de
esputo como el método de elección en la detección de TB entre Sintomáticos
Respiratorios es decir con tos y expectoración por más de dos semanas
No obstante, dado que su sensibilidad (40-70% en muestras respiratorias) .
Es necesario realizar siempre cultivos para un diagnóstico de certeza

Son necesarios entre 5.000 y 10.000 BAAR/ml. de muestra para ser baciloscopia
positiva, por eso la limitación más importante es su baja sensibilidad. Especificidad:
96-99%

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Con la técnica adecuada, una primera muestra durante la consulta aporta un 80% de
la identificación, y el resto del rendimiento corresponde a las muestras segunda y
tercera.

Se observan BAAR : bastoncitos delgados, ligeramente curvos, rojo fucsia

destacándose claramente contra el fondo azul. A veces se observan con gránulos o
cuentas intensamente coloreados en el interior. En la muestra de esputo pueden
presentarse aislados, apareados o agrupados.

Tinción de Ziehl Neelsen

Utiliza fucsina y fenol junto con el calentamiento de las preparaciones. Las
micobacterias se tiñen de rojo, colorante que perdura pese a la posterior decoloración
con una mezcla de alcohol-Ac clorhídrico, sobre un fondo azul por colorante de
contraste que es el azul de metileno .

Exige la observación con el objetivo de inmersión (100 X), la presencia de bacilos

puede ser escasa, es necesario observación (300 campos) un mínimo de 10 minutos de
antes de valorar el examen como negativo.

Cuantificación de baciloscopia
El número de BAAR presentes en una muestra es un índice de la severidad
de las lesiones y del grado de infectividad y control de tratamiento
●​ Negativo : no BAAR en 100 campos observados
●​ Positivo(+) menos 1 BAAR /100 campos observados
●​ Positivo(++) 1-10 BAAR /campo en 50 campos observados
●​ Positivo(+++) mas de 10 BAAR/campo en 20 campos observados
Una baciloscopia positiva hace el diagnóstico de la enfermedad y permite el inicio de
tratamiento anti-TB de manera , no obstante las normas internacionales exigen
baciloscopías positivas para diagnosticar un caso de TB.
Con la técnica adecuada, una primera muestra aporta un 80% de la identificac
resto del rendimiento corresponde a las muestras segunda y tercera
Una vez diagnosticado el caso de Tuberculosis es necesario notificarlo

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Métodos moleculares rápidos: PCR tiempo real Xpert® MTB/RIF.
●​ Recomendada por la OMS desde el año 2010, a (Boehme, et al., 2010). Es un
método que utiliza una prueba de amplificación de ácidos nucleicos y detecta
la presencia de un gen particular de la bacteria.
●​ Evidencia simultáneamente la presencia de M. tuberculosis y la resistencia a
Rifampicina. Una sensibilidad del 88% y una especificidad muy alta (99%).
●​ El estudio se realiza directamente en la muestra de esputo o en muestras
seleccionadas (ej.: LCR, ganglios).
●​ Su gran ventaja es que el resultado se obtiene en 2 horas extrapulmonares y
puede detectar hasta el 68% de las formas de TB activa con baciloscopías
negativas (presencia de muy pocos bacilos).
●​ Se recomienda fuertemente utilizarlo como método diagnóstico inicial en niños
y adultos con sospecha de TB resistente ,TB asociada a VIH Y TB meníngea.
●​ Otras técnicas de Biología Molecular Ej .PCR

Cultivo
●​ La mayoría de las muestras respiratorias (excepto el líquido pleural obtenido
por toracocentesis) contienen otros microorganismos que crecen rápidamente
y que es preciso eliminar para que puedan desarrollarse las micobacterias.
●​ Para ello se realizan unos procedimientos de descontaminación de la muestra
que a su vez la homogeneizan y la concentran.
●​ Luego se procede a la realización de las extendidos para tinción y se inoculan
los medios de cultivo.
●​ Se utiliza para diagnóstico pero al arrancar el tratamiento no se hace cultivo
después sino que se le hace baciloscopia por control post tratamiento.
●​ Los medios de cultivo pueden ser líquidos o sólidos.

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 ●​ Se diferencian en la base puede ser de agar (las diferentes variantes del agar
Middlebrook son las más utilizadas) o de huevo (el medio Lowenstein-Jensen)
(glicerina, huevos enteros, verde de malaquita)
●​ La detección del crecimiento depende del tipo de medios empleados. Con los
medios sólidos en base de huevo la se realiza mediante la observación
macroscópica 1 vez por semana. Si utilizamos medios en base de agar habrá
que visualizarlos con el microscopio (10 X) 2-3 veces por veces por semana

Medios líquidos :Se introducen en el incubador los frascos y realizar un monitoreo

continuo de la actividad metabólica que hay en su interior para ver si hay crecimiento
o no. (10-14 días ) Los más utilizados son el MGIT (Mycobacterial Growth Indicator
Tube, BD), el ESP Culture System II (Trek Diagnostic Systems) y el MB/BacT ALERT 3D
(Biomerieux).

La incubación de los medios de cultivo se realiza a 35-37ºC que es la temperatura

óptima para el desarrollo de la mayoría de las micobacterias

Los cultivos se mantienen un mínimo de 7 semanas antes de descartarlos como

negativos.

Los métodos automatizados hasta 42 días, para informar negativos

Utilidad del cultivo

Detectar bacilos escasos en distintas muestras :
a)​ Muestras de lesiones pulmonares poco avanzadas
b)​ Extrapulmonares
c)​ Pediátricas

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 d)​ En pacientes con VIH
La baciloscopia a veces puede ser negativa (sensibilidad = 65%) por lo que siempre
debe solicitarse cultivo de la muestra.
Aislar e identificar BAAR en muestras que pueden contener micobacterias
ambientales
Orina, lavado gástrico etc de pacientes inmunosuprimidos

❑ Aislar y realizar la prueba de sensibilidad de BAAR de muestras de

pacientes que pueden tener tuberculosis resistente a los antibióticos de
primera línea con :
Mala respuesta al tratamiento
Historia de tratamiento previo
Inmunosuprimidos

Vigilancia epidemiológica

Recomendación
Se recomienda el cultivo de las muestras provenientes de:
1.​ Pacientes en fracaso terapéutico y recaída.
2.​ Pacientes inmunocomprometidos
3.​ Personas bajo sospecha de TB con exposición conocida a pacientes con TB
resistente a drogas, especialmente multirresistente (TBMR).
4.​ Pacientes con formas extrapulmonares.
5.​ Esputos seriados negativos en pacientes con radiografía y cuadro clínico
compatible con TB

Identificación
Una vez que se ha detectado crecimiento en alguno de los medios, se realiza la tinción
de Ziehl-Neelsen para ver si lo que ha crecido son BAAR

Tradicionalmente la identificación se realizaba en base a una serie de características

fenotípicas.

La velocidad de crecimiento en los cultivos y la temperatura óptima , la morfología de

la colonia, su pigmentación, etc.

Hemocultivos
La mayoría de los laboratorios realizan la identificación de mediante sondas genéticas
debido a su rapidez, precisión y simplicidad.

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Lisis centrifugación: El método comercial (por ejemplo Isolator) contienen
anticoagulantes , agente lítico (saponina) y presenta un gradiente de densidad que
favorece la sedimentación de los microorganismos
Los tubos deben ser centrifugados, el sedimento se siembra en diversos medios
incluyendo para micobacterias y hongos.
También hay sistemas automatizados

Estudio de sensibilidad
Su finalidad es poder predecir, si la cepa aislada responderá al tratamiento
convencional o bien si presenta algún mecanismo de resistencia que indican que una
determinada droga no será efectiva
Todo paciente con aislamiento inicial de M. tuberculosis debería para determinar la
sensibilidad al menos a rifampicina ser testeado (cuando se tiene acceso a un test
rápido) o al menos a Isoniacida y rifampicina (si es a través
de métodos convencionales )

Se prueban 5 drogas: (primera línea)

❑ Rifampicina
❑ Isoniacida
❑ Estreptomicina *
❑ Etambutol
❑ Pirazinamida

*Previamente considerada como droga de primera línea, aún se utiliza en situaciones

puntuales como parte del tratamiento inicial (ej., ante hepatotoxicidad por drogas de
primera línea), aunque con precaución debido al aumento global de resistencia a la
misma
Las drogas de segunda línea se reservan para situaciones especiales de intolerancia,
reacciones adversas a fármacos de primera línea o esquemas para TB resistente. •Ej
Fluoroquinolonas

Para estudiar la sensibilidad de las micobacterias, se emplea generalmente el método

de las proporciones , es decir se compara el número de colonias que crecen en un
medio con droga y el número de colonias que crecen en el mismo medio libre de
droga.

Si el número de colonias en el primero es menor al 1% del segundo se considera

efectiva. (sensible)

20 días para detectar la resistencia . 40 días para ver si es sensible , la droga

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Métodos automatizados de las proporciones
La realización del antibiograma en medios líquidos cada vez es más frecuente por su
relativa sencillez, reproducibilidad y rapidez, ya que los resultados pueden obtenerse
en 5-10 días, frente a 3 semanas que requieren los medios sólidos.

Métodos moleculares :basados en Biología Molecular (ej PCR real time) detección de
las alteraciones genéticas que condicionan resistencia a los diferentes fármacos.
Potencialmente pueden detectarse estas alteraciones con gran rapidez, incluso
directamente en las muestras clínicas

OMS propuso la estrategia para finalizar la Tuberculosis para el año 2035 (Ginebra ,
Mayo 2014 67 asamblea Mundial de la salud)

Prueba rápida de detección basadas en Biología Molecular

100% casos detectados se realice Sensibilidad a Rifampicina

La estrategia más efectiva para el control de la tuberculosis es el diagnóstico y

tratamiento temprano de la enfermedad

Conclusión
1.​ La baciloscopia sigue siendo el método más rápido y barato para diagnosticar
la TB en nuestro medio.

2.​ El diagnóstico de certeza se establece con el aislamiento en cultivo e

identificación de M. tuberculosis a partir de muestras clínicas.

3.​ La utilización sistemática de medios de cultivo líquidos ha aumentado su

sensibilidad y rapidez.

4.​ Los estudios de sensibilidad deben realizarse a todo primer aislamiento de M

tuberculosis en centros acreditados y con suficiente experiencia.

5.​ El gran desarrollo de la tecnología molecular de ácidos nucleicos ha permitido

en muchos laboratorios que la detección , identificación y pruebas de
sensibilidad de M tuberculosis sea más rápida y precisa

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