Ejercicios
1. Se desarrolló un método cromatográfico por columna empacada de vidrio para separar una
mezcla de tres componentes (A, B y C). Se obtuvieron los siguientes datos:
Masa de muestra (incluyendo la fase móvil) = 2 mg
Caudal o flujo volumétrico = 0,5 ml/min
Diámetro de la columna = 0,3 cm
Relación entre el volumen que ocupa la fase móvil y la fase estacionaria: Vm/Vs = 10.
Hallar:
a. La velocidad lineal de la fase móvil
Ecuación general:
𝜋𝐷 2 𝜀 µ 4𝑄
𝑸= →µ=
4 𝜋𝐷 2 𝜀
Cálculo de ε:
𝑽𝒔 1 1 1 1 1 11 1
= −1→ = −1 → +1= → =
𝑽𝒎 𝜀 10 𝜀 10 𝜀 10 𝜀
10
𝜀= = 0,9090
11
Calculo de la velocidad lineal (µ):
4 (0,5 𝑚𝐿⁄𝑚𝑖𝑛) 𝑚𝐿
µ= 2
= 7,7809
𝜋(0,3𝑚𝐿) (0,9090) 𝑚𝑖𝑛
b. El tiempo de retención del componente más retenido
Ecuación general:
𝑉𝑟𝑖
𝑽𝒓𝒊 = 𝑄 𝑇𝑟𝑖 → 𝑻𝒓𝒊 =
𝑄
Calculo:
6,7𝑚𝐿
𝑻𝒓𝑪 = = 13,4 𝑚𝑖𝑛
0,5 𝑚𝐿⁄𝑚𝑖𝑛
c. La constante de reparto del componente menos retenido
1,0 𝑚𝐿
𝑻𝒎 = = 2 𝑚𝑖𝑛
0,5 𝑚𝐿⁄𝑚𝑖𝑛
3,0𝑚𝐿
𝑻𝒓𝑨 = = 6 𝑚𝑖𝑛
0,5 𝑚𝐿⁄𝑚𝑖𝑛
(6 𝑚𝑖𝑛 − 2 min)
𝑲,𝑨 = =2
2 𝑚𝑖𝑛
Ecuación general:
𝑉𝑠 𝑉𝑚
𝑲,𝑨 = 𝐾𝐴 → 𝑲𝑨 = 𝐾𝐴,
𝑉𝑚 𝑉𝑠
Calculo:
𝑲𝑨 = 2 ∗ 10 = 20
d. Sí los componentes A y B son fácilmente separables o no
0,425 𝑚𝐿
𝑾𝑨 = 1,7(0,25 𝑚𝐿) = = 0,85 𝑚𝑖𝑛
0,5 𝑚𝐿⁄𝑚𝑖𝑛
1,156 𝑚𝐿
𝑾𝑩 = 1,7(0,68 𝑚𝐿) = = 2,312 𝑚𝑖𝑛
0,5 𝑚𝐿⁄𝑚𝑖𝑛
3,0𝑚𝐿
𝑻𝒓𝑨 = = 6 𝑚𝑖𝑛
0,5 𝑚𝐿⁄𝑚𝑖𝑛
4,4 𝑚𝐿
𝑻𝒓𝑩 = = 8,8 𝑚𝑖𝑛
0,5 𝑚𝐿⁄𝑚𝑖𝑛
8,8 min − 6 𝑚𝑖𝑛 2,8 𝑚𝑖𝑛
𝑹𝑨𝑩 = = = 1,771
0,85 𝑚𝑖𝑛 + 2,312 min ) 1,581 𝑚𝑖𝑛
( 2
RAB > 1,5: Separación en línea base, donde no se observa solapamiento de señales
1,0 < RAB < 1,5: Separación parcial, es decir solapamiento parcial de señales
RAB < 1,0: Separación insuficiente, donde se observa solapamiento entre señales
Conclusión: RAB = 1,771, indica que A y B presentan una fácil separación sin solapamiento de
señales.
e. El diámetro de columna requerido para tratar 100 mg de muestra.
Se asume que la capacidad de la columna (masa de la muestra que puede tratarse) escala
proporcionalmente con el volumen de lecho activo para una misma longitud de columna y mismo
empaque, entonces lo que variará será el área de la sección transversal.
𝜋𝐷 2 𝜋(0,3)2
𝑨𝑇 = = = 0,0707 𝑐𝑚2 → 𝑃𝑎𝑟𝑎 2𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
4 4
Relación entre la antigua masa y la nueva:
𝑚𝑁𝑢𝑒𝑣𝑎 100 𝑚𝑔
= = 50
𝑚𝐴𝑛𝑡𝑖𝑔𝑢𝑎 2 𝑚𝑔
La nueva área debe ser 50 veces de la original:
𝑨𝑵𝒖𝒆𝒗𝒂 = 50 ∗ (0,0707 𝑐𝑚2 ) = 3,535 𝑐𝑚2
El diámetro requerido para esta nueva área se calcula así:
𝐴𝑁𝑢𝑒𝑣𝑎 ∗ 4 3,535 𝑐𝑚2 ∗ 4
𝑫=√ =√ = 𝟐, 𝟏𝟐𝟏𝟓 𝒄𝒎
𝝅 𝝅
EJERCICIO 2. Se desarrolló un método cromatográfico por columna empacada de vidrio para separar
una mezcla de tres componentes (A, B y C). Se obtuvieron los siguientes datos:
• Masa de muestra (incluyendo la fase móvil) = 2 mg
• Caudal o flujo volumétrico = 0,5 ml/min
• Diámetro de la columna = 0,3 cm
• Relación entre el volumen que ocupa la fase móvil a la fase estacionaria Vm/Vs =10.
Componente Vr (ml) W1/2 (ml)
No retenido 1.0 –
A 3.0 0.25
B 4.4 0.68
C 6.7 1.00
Hallar:
a. Diámetro de columna para tratar 2 g de muestra
La capacidad de una columna es proporcional al volumen de la fase estacionaria Vs (o volumen total de
lecho empacado), que a su vez es proporcional al área transversal y por tanto al diámetro al cuadrado si se
mantiene la longitud.
La masa máxima que se puede inyectar sin sobrecarga es proporcional a Vs (o Vm) si se mantienen
condiciones de linealidad.
• Masa actual: 2 mg
• Masa deseada: 2 g = 2000 mg
2000
• Factor de escala en masa: = 1000
2
Dado que Vm ∝ área ∝ dc2 (longitud fija), entonces:
2
𝑀nueva 𝑉𝑚,nueva 𝑑𝑐,nueva
= ≈ 2 = 1000
𝑀antigua 𝑉𝑚,antigua 𝑑𝑐,antigua
De allí:
𝑑𝑐,nueva = 𝑑𝑐,antigua × √1000 = 0.3 × 31.62 = 9.49 cm
RESPUESTA: 9.49 cm
b. Factor de capacidad del componente más retenido
El más retenido es C con Vr = 6.7 ml.
Volumen muerto Vm = Vr (no retenido) = 1.0 ml.
Factor de capacidad:
𝑉𝑟 − 𝑉𝑚
𝑘′ =
𝑉𝑚
Para C:
6.7 − 1.0
𝑘𝐶′ = = 5.7
1.0
RESPUESTA: 5.7
c. Selectividad entre los dos componentes más rápidos
Los más rápidos son A y B (excluyendo el no retenido).
Selectividad α entre B y A:
𝑘𝐵′
𝛼=
𝑘𝐴′
Calcular cada k':
3.0 − 1.0
𝑘𝐴′ = = 2.0
1.0
4.4 − 1.0
𝑘𝐵′ = = 3.4
1.0
Entonces:
3.4
𝛼= = 1.7
2.0
RESPUESTA: 1.7
d. Ancho en la base del componente menos retenido
Menos retenido (excluyendo no retenido) es A.
Para picos cromatográficos gaussianos:
𝑊 ≈ 1.698 × 𝑊1/2
Dado que para A:
𝑊1/2 = 0.25 ml
Calcular:
𝑊 ≈ 1.698 × 0.25 = 0.4245 ml
RESPUESTA: 0.425 mL
e. ¿B y C son fácilmente separables?
Resolución entre B y C:
2(𝑉𝑟2 − 𝑉𝑟1 )
𝑅𝑠 =
𝑊1 + 𝑊2
Primero, se estima los anchos en la base:
𝑊𝐵 = 1.698 × 0.68 = 1.1546 ml
𝑊𝐶 = 1.698 × 1.00 = 1.698 ml
Ahora calcular Rs:
2(6.7 − 4.4) 2 × 2.3 4.6
𝑅𝑠 = = = ≈ 1.61
1.1546 + 1.698 2.8526 2.8526
Como Rs > 1.5, se considera separación completa en condiciones ideales, aunque no es una separación muy
robusta. Sí son separables.
RESPUESTA: SÍ, SON FÁCILMENTE SEPARABLES (Rs ≈1.61).
3. Se Tiene una columna tubular abierta de 30,1 m de longitud y 0,530 mm de diámetro interno. Se recubre
su pared interior con una capa de fase estacionaria de 3,1 μm de espesor. Un soluto no retenido tarda 2,16
min en atravesarla, mientras que un determinado soluto tiene un tiempo de retención de 17,32 min.
(a) Hallar la velocidad lineal de flujo y el caudal
𝐿 100 𝑐𝑚
𝑢 = 𝜏 donde 𝐿 : es la longitud de la columna (30,1 ∗ ( 1𝑚
) = 3010 𝑐𝑚 )
𝑀
𝜏𝑀 : 𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑑𝑒 𝑝𝑎𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑢𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝑛𝑜 𝑟𝑒𝑡𝑒𝑛𝑖𝑑𝑜
60 𝑠
2,16 𝑚𝑖𝑛 × ( ) = 129.6𝑠
1 𝑚𝑖𝑛
3010 𝑚 𝑐𝑚
𝑢= = 23,23
129,6 𝑠 𝑠
El caudal
𝑄 =𝑢×𝐴
𝜋
𝑄 = 𝑢 × (𝐷 − 2𝛿)2
4
donde
𝑐𝑚
𝑢: 23,23
𝑠
1 𝑐𝑚
𝐷: 0,530 𝑚𝑚 ( ) = 0,053 𝑐𝑚
10 𝑚𝑚
0,0001 𝑐𝑚
𝛿: 3,1 𝜇𝑚( ) = 0,00031 𝑐𝑚
1𝜇𝑚
𝜋
𝑄 = 23,23 × (0,053 − 2(0,00031))2
4
𝑐𝑚3 60 𝑠𝑒𝑔 𝑚𝐿
𝑄 = 0,050 ( ) = 3,00
𝑠 1 𝑚𝑖𝑛 𝑚𝑖𝑛
(b) Hallar el factor de capacidad del soluto y la fracción de tiempo que pasa en la fase estacionaria
𝜏𝑅 − 𝜏𝑀
𝐾𝑎′ =
𝜏𝑀
donde
𝐾𝑎′: 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑝𝑎𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑
𝜏𝑅 : 𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑡𝑒𝑛𝑐𝑖𝑜𝑛 17,32 𝑚𝑖𝑛
𝜏𝑀 : 𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑚𝑢𝑒𝑟𝑡𝑜 2,16 𝑚𝑖𝑛
17,32 − 2,16
𝐾𝑎′ = = 7,02
2,16
la fracción de tiempo que pasa en la fase estacionaria
𝜏𝑅 − 𝜏𝑀 17,32 − 2,16
𝑙𝑎 𝑓𝑟𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑓𝑎𝑠𝑒 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛𝑎𝑟𝑖𝑎 = = = 0,875 𝑜 87,5%
𝜏𝑀 17,32
(c) Hallar el coeficiente de reparto de este soluto.
𝑉𝑚
𝑘′ = 𝑘′
𝑉𝑠
Volumen de la fase móvil
𝑉𝑚 = 𝜋 × (𝑟 2 ) × 𝑙
𝑉𝑚 = 𝜋 × (0,02652 ) × 3010 = 6,48 𝑐𝑚3 (𝑚𝐿)
Volumen de la fase estacionaria
𝐴𝑠 = 2𝜋 × 𝑟𝑖 × 𝑙
𝐴𝑠 = 6,283 × 0,0265 × 3010 = 5,8 𝑐𝑚3 (𝑚𝑙)
𝑉𝑠 = 𝐴𝑠 × 𝛿 = 500,8 × 3,1 × 10−4
𝑉𝑠 = 0,155 𝑐𝑚3 (𝑚𝑙)
6,48 𝑚𝑙
𝑘 = 7,02 = 293,6
0,155 (𝑚𝑙)
Punto 5: El volumen de retención de un soluto es 76,2 ml, en una columna rellena cuya fase
móvil y estacionaria ocupan 16,6 ml y 12,7 ml, respectivamente. Calcular el coeficiente de
reparto y el factor de capacidad de dicho soluto.
• Coeficiente de reparto:
Dado que el coeficiente de reparto describe el equilibrio químico de distribución del soluto en las dos partes,
se puede calcular usando los volúmenes en lugar de las concentraciones porque el volumen de cada fase
determina cuanta cantidad de soluto puede estar disuelta o absorbida en ella.
𝑉𝑟 − 𝑉𝑚
𝐾=
𝑉𝑠
76,2 𝑚𝐿 − 16,6 𝑚𝐿 59,6 𝑚𝐿
𝐾= =
12,7 𝑚𝐿 12,7 𝑚𝐿
𝐾 = 4,69
Recordando:
- K>1 (alta retención). Prefiere fase estacionaria.
- K<1 (eluye rápido). Prefiere fase móvil.
Indica que, en equilibrio, la concentración de soluto en la fase estacionaria es 4,69 veces mayor que en la
fase móvil, provocando una retención alta dentro de la columna.
• Factor de capacidad:
K´ nos indica cuanto tiempo adicional pasa el soluto retenido en la fase estacionaria en comparación con un
soluto que no se retiene, por lo tanto:
𝑇𝑟𝑖 − 𝑇𝑚 𝑉𝑟 − 𝑉𝑚
𝐾𝑖 = =
𝑇𝑚 𝑉𝑚
76,2 𝑚𝐿 − 16,6 𝑚𝐿 59,6 𝑚𝐿
𝐾𝑖 = = = 3,59
16,6 𝑚𝐿 16,6 𝑚𝐿
Recordando:
- K´= 0 el soluto no se retiene, sale con la fase móvil.
- K´<1 el soluto eluye más rápido, poca interacción con la fase estacionaria.
- 1<K´<5 retención adecuada, hay buena separación.
- K´> 10 el soluto se retiene demasiado, tarda mucho en eludir.
El K´= 3,59 indica que hay buena interacción con la fase estacionaria, lo suficiente para separarse de otros
compuestos, sin quedarse demasiado tiempo.
7. Si una columna de 15 cm de longitud tiene una altura de plato de 5 μm. cuál será la semianchura, en
segundos, de un pico que eluye a 10 min.
Longitud de la columna: 𝐿 = 15 𝑐𝑚
Altura de plato teórico: 𝐻 = 5 𝜇𝑚 → 5 ∗ 10−4 𝑐𝑚
Tiempo de retención: 𝑡𝑟 = 10 𝑚𝑖𝑛 = 600 𝑠
Despejamos la siguiente fórmula por la relación entre H, N y L:
𝐿
𝐻=
𝑁
15 𝑐𝑚
5 ∗ 10−4 𝑐𝑚 =
𝑁
15 𝑐𝑚
𝑁= =30000
5∗10−4 𝑐𝑚
Pero teniendo en cuenta que la fórmula de N es:
16 ∗ 𝑡𝑟 2 5.54𝑡𝑟 2
𝑁= =
𝑤2 𝑤1/2 2
Despejamos:
5.54𝑡𝑟 2
𝑤1/2 2 =
30000
5.54
𝑤1/2 2 = 𝑡𝑟 2 ∗
30000
5.54
𝑤1/2 2 = 𝑡𝑟 2 ∗
30000
5.54
√𝑤1/2 2 = √6002 ∗ √
30000
5.54
𝑤1/2 = 600 ∗ √
30000
𝑤1/2 = 8.16 ≃ 8.2𝑠
La semianchura del pico es aproximadamente de 8.2 segundos.