SEMINARIO – TALLER
Verificación de Métodos Analíticos
Impacto de la Verificación de Métodos
Analíticos en la Generación de Resultados
Clínicamente Útiles
DEFINICIONES
La Validación es demostrar con un alto
grado de confianza, por medio de evidencia
documentada que un proceso específico
producirá de forma consistente y permanente
servicios que poseerán las características de
calidad predefinidas.
WHO Technical Report Series, No 823, 1992
DEFINICIONES
Validar se refiere al conjunto de acciones que
demuestran formalmente que un sistema realiza
lo que se supone debe hacer, de forma
continuada y ajustada al objetivo de análisis
Al validar un método se demuestra formalmente
que el mismo posee un determinado nivel de
parámetros analíticos básicos.
Useche, B
DEFINICIONES
La Validación sirve como soporte
de aseguramiento de la calidad en
los laboratorios brindando confianza
y solidez a los resultados emitidos
por el mismo.
Cuesta, A
DEFINICIONES
Que un elemento
Comprobar
satisface los
Verificar mediante
requerimientos
evidencia objetiva
especificados
¿Cómo se obtienen las evidencias objetivas?
Diseños de experimentos basados en argumentos
estadísticos válidos
Analizando los resultados empleando herramientas
estadísticas
DEFINICIONES
Que un elemento
Comprobar
satisface los
Verificar mediante evidencia
requerimientos
objetiva
especificados Y los requisitos
especificados son
adecuados para el
uso entendido y lo
satisfacen
La Verificación es un insumo para la
gestión integral del recurso tecnológico de
cualquier organización, desde su
planeación hasta su renovación y el análisis
de los efectos en su utilización
Programa Seguridad del
Procedimiento Técnico Paciente
Componente Transversal Programa Aseguramiento
Proporciona evidencia Metrológico
objetiva. Enfoque Gestión
de Riesgo ( Minimización
Eventos Adversos) Componente Tecnovigilancia
Aseguramiento de Calidad en
el Laboratorio Clínico
TIPOS DE VALIDACIÓN:
VALIDACIÓN PRIMARIA
Método oficial gestionado por Si usamos un método oficial en
una organización proveedora gran parte la validación ya ha
de métodos de ensayo. sido realizada
Nosotros no debemos realizar
validación primaria. Si usamos Ventaja de usar un método
métodos oficiales, la validación oficial o estándar
ya la han hecho otros
TIPOS DE VALIDACIÓN:
VALIDACIÓN SECUNDARIA
(Verificación)
Método oficial o estándar seguido al Evaluar aspectos y parámetros de mi
pie de la letra. método
Demostrar cumplimiento con las
especificaciones suministradas con los
organismos de estandarización
Garantizar que obtenemos resultados
validos
Comparación con resultados de validación
primaria
¿ Verificamos el Método o el Sistema Analítico?
Los métodos nuestros están validados, son reconocidos y probados y los
ejecutamos tal cual vienen sus especificaciones de manufactura. En cambio el
concepto de sistema analítico se ajusta más a nuestra realidad
Sistema Analítico:
Es la sinergia y la interacción entre equipos, reactivos, materiales, documentos, materiales de
referencia, analistas y variables operativas que se utilizan en un método de análisis para
generar un resultado. Y todo sistema analítico debe ser validado antes de que con su
operación se generen resultados para los pacientes.
Referencias normativas
CLIA, 88 SECCION 493.1253
“… un laboratorio que introduce un nuevo procedimiento para realizar
pruebas en muestras de pacientes
Exactitud usando un método deLinealidad
Precisión complejidad
baja, moderada o alta (instrumento, equipo o sistema de prueba)
aprobado por la FDA con base a los requisitos CLIA para el control de
calidad general, debe demostrar que antes de informar los resultados de
la prueba al paciente, debe obtener las especificaciones de rendimiento
para la exactitud, precisión, rango de medición, comparables a los
establecidos por elLímite de
fabricante. Asimismo, el laboratorio
IBR debe verificar que
Detección
el intervalo biológico de referencia dado por el fabricante está acorde a la
población de pacientes del laboratorio”.
Referencias normativas
ISO 15189:2012
Los procedimientos de análisis validados utilizados sin modificaciones se deben
someter a una verificación independiente por parte del laboratorio antes de ser
introducidos en el uso de rutina. El laboratorio debe obtener información del
fabricante o de quien haya desarrollado el método para confirmar las
características de funcionamiento del procedimiento.
La verificación independiente por parte del laboratorio debe confirmar, a través
de la obtención de evidencia objetiva (en la forma de características de
desempeño), que las características de desempeño para el procedimiento de
análisis se han cumplido. Las características de desempeño para el
procedimiento de análisis, confirmadas durante el proceso de verificación,
deben ser aquellas pertinentes al uso previsto de los resultados de los análisis.
Referencias normativas
Exactitud Veracidad Precisión Um
Límite de Detección Intervalo de Medida
Sensibilidad Analítica y Especificidad Analítica y
Diagnóstica Diagnóstica
Referencias normativas
Joint Commissions on Accreditation of Healthcare Organizations.
Exactitud Precisión Linearidad
(Estándar 02.01.01)
“Antes de que un nuevo método se utilice para informar los resultados
del paciente, el laboratorio debe verificar que el método produce
resultados
Límite deexactos sobre una base consistente
Detección IBR (ay consideración)
fiable… el laboratorio
debe verificar la exactitud, precisión y rango de medición, además de
asegurar el intervalo biológico de referencia que se aplica a la
población de pacientes específico de la prueba. Para los métodos
previamente establecidos, los datos del control de calidad y resultados
anteriores son prueba suficiente para confirmar su validez”
Referencias normativas
Requisitos Regulatorios y Normativos CAP (College of Amercan
Pathologists)
La filosofía del CAP es que todas las pruebas del laboratorio clínico, deberán
cumplir con los requisitos definidos para las pruebas de alta complejidad
según la sección 493.1213 CLIA’88
Exactitud Precisión Linealidad
Límite de Detección IBR Interferencias
Referencias normativas
Norma ISO 17025:2017
La validación es la confirmación, a través del examen y el aporte de evidencias
objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares para un uso especifico
previsto.
Exactitud Precisión Linearidad
Límite de Detección Límite de Cuantificación Um
Sensibilidad Especificidad Robustez
Planificación de la Verificación con Enfoque de Riesgo
El enfoque de riesgo implica entonces como actividad
fundamental que debe quedar planeada des la selección,
evaluación, incorporación, monitoreo y control de los
sistemas analíticos de medición en el laboratorio clínico, la
verificación de la existencia o no de alarmas sanitarias.
Planificación de la Verificación con Enfoque de Riesgo
Otro dato importante a tener en cuenta son los equipos usados o
repotenciados, definidos como: los equipos que han sido utilizados
en la prestación de servicios o en procesos de demostración, en los
cuales parte de sus subsistemas principales han sido sustituidos con
piezas nuevas por el fabricante o los repotenciados autorizados y
que cumplen con los requisitos especificados por el fabricante y las
normas de seguridad bajo el cual fueron construidos. Estos equipos
deben cumplir los siguientes requisitos:
Planificación de la Verificación con Enfoque de Riesgo
1. Que el equipo biomédico repotenciado cuente con las mismas
características de efectividad, seguridad y desempeño del equipo
biomédico nuevo.
2. Que el equipo biomédico repotenciado se encuentre en estado óptimo
de operación y funcionamiento, lo cual deberá incluir sus sistemas de
seguridad.
3. Que el equipo biomédico repotenciado cuente con la documentación
para la importación de equipos usados.
4. Que el titular del registro sanitario o permiso de comercialización del
equipo repotenciado cuente con el registro sanitario o el permiso de
comercialización de un equipo biomédico nuevo de iguales
características.
5. Que el importador cuente con la autorización del fabricante o su
representante en el país, para importar los equipos que han sido
repotenciados.
Planificación de la Verificación con Enfoque de Riesgo
Muestra
Ensayo
Tipo
Características de
Manipulación Desempeño
Método
Volumen
Temperatura
Uso de Dilución Sensibilidad Analítica
Duración
Sensibilidad Funcional
Sensibilidad Clínica
Especificidad Analítica
Especificidad Clínica
Precisión r.
Precisión WL.
ESPECIFICACIONES DE MANUFACTURA
Planificación de la Verificación con Enfoque de Riesgo
Reactivos
Calibrador
Componentes
Almacenamiento Interpretación de Resultados
Características.
Estabilidad Limitaciones e
Estabilidad. interferencias
Unidad de medida.
Trazabilidad.
Valor de Referencia.
Frecuencia. Limitaciones e
Intervalo de Interferencias
Medición.
Solicitud test
adicionales.
ESPECIFICACIONES DE MANUFACTURA
CLISI EP – 5 A2 CLISI EP – 9 A3
Guías CLSI
CLSI. Evaluation of Precision Performance of CLSI. Method Comparison and Bias Estimation
Quantitative Measurement Methods; Approved Using Patient Samples; Approved Guideline—
Guideline—Second Edition. CLSI document EP5- Second Edition. CLSI document EP9-A – Ítem 3
A2 – Ítem 4 Precision Evaluation Experiment Comparison of Methods Experiment. CLISI EP – 6 A
CLSI. Evaluation of the
CLISI EP – 15 A3 CLISI EP – 12 A2 linearity of Quantitative
Measurement Procedures
CLSI. User Verification of Precision and Estimation Bias;
CLSI. User Protocol for Evaluation of
Approved Guideline – Third Edition Qualitative Test Performance;
Approved Guideline - Second Edition.
CLISI H26
CLISI EP – 17 A
CLSI. Validation, verification and
Quality Assurance of Autometed
CLSI. Procedimiento para la determinación Hematology Analyzers; Approved
y verificación del LOD en un procedimiento Standar Secons – Edition
de medición analítico.
VMA Hematología H26 A2
Validation, Verification and Quality Assurance of Automated Hematology
Analyzers .
Verificación
Lectura de fondo
Arrastre
Precisión (Repetibilidad e Intralaboratorio)
Precisión simple para blancos y plaquetas (niveles bajos)
Precisión simple para blancos (nivel alto)
Veracidad (Estadística y Clínica)
Intervalo de Medición
Intervalos de referencia
VMA Hematología H20 – A2
Reference Leukocyte (WBC) Differential Count (Proportional) and
Evaluation of Instrumental Methods
Este documento es un método de
referencia para la evaluación de
contadores diferenciales automáticos,
basado en el conteo diferencial visual
Guías específicas con Enfoque de Riesgo Clínico
Criterios para Ensayos Tiroideos Según las
Recomendaciones de la NACB (Academia Nacional de Bioquímica Clínica)
Sensibilidad
Funcional
Arrastre
Sensibilidad Criterio
de Calidad más Uso de dos lotes diferente de
importante para reactivos y dos calibraciones
selección de un
método para
determinación de
TSH
Fases del Proceso de Verificación
• Definición de los
• Generar el informe métodos a verificar.
y las • Protocolo (Tiempo,
recomendaciones responsables.
Ajustar Planear
Verificar Hacer
• Análisis de los • Ejecución del
datos Obtenidos. protocolo.
• Inductores • Aspectos a
Estadísticos Evaluar
Entonces… para Qué Verificar?
✓Demostrar desempeño
aceptable del Método.
✓Garantizar la seguridad del
paciente
Implementación IQC
Evaluación Externa de la Calidad
Indicadores de Seguimiento
Calificación de Equipos
Requisitos de Calidad
Verificación de Métodos
¿Qué es la Calificación de Equipos?
“Proceso documentado por el cual se
verifica la correcta instalación y
operación de un equipo”
Fabricante
Diseño
Establece que el instrumento debe estar
correctamente instalado en el ambiente
Instalación
seleccionado y que es apropiado para la
operación y uso. (Medio ambiente, espacio
físico, requerimientos eléctricos).
Fabricante
Instrumento
correctamente
instalado - Evaluación del Software.
- Test de funcionamiento de puntos
Instalación críticos(transferencia de datos al LIS).
Operación - Se debe demostrar que el equipo
funcionará de acuerdo a la especificación
operacional en el ambiente seleccionado.
Fabricante
Instrumento
correctamente Se demuestra la efectividad y la precisión
instalado del proceso mediante pruebas del
sistema en condiciones normales de
Instalación
operación
Operación
Desempeño - Verificación de desempeño en las
mismas condiciones en que se procesan
las muestras (test de precisión, otros
experimentos).
Lineamientos ISO 15189 - 2012
5.3.1 Equipamiento
[Link] Registros de los Equipos
Se deben mantener registros de cada equipo que contribuye a la realización de
exámenes.
- Identificación del Equipo Instrucciones de
uso del fabricante - Certificados de todas las
calibraciones del equipo.
- Nombre, modelo del fabricante
y el número de serie u otra de - Daño o mal funcionamiento,
identificación única. modificación o reparación de la
equipo
- Información de contacto del - Mantenimiento llevado a
proveedor o el fabricante cabo y el calendario de
- La fecha de recepción y la mantenimiento preventivo
fecha de su entrada - Registros que confirmaron la
en servicio aceptabilidad inicial de los
- Ubicación del Equipo Condición del equipos.
Entrenamiento del Personal
de Laboratorio
“El propósito de los instrumentos analíticos es
generar resultados confiables”
“Una gestión de equipos adecuada impacta
positivamente sobre la calidad de los resultados
generados por los instrumentos”
Implementación IQC
Evaluación Externa de la Calidad
Indicadores de Seguimiento
Calificación de Equipos
Requisitos de Calidad
Verificación de Métodos
Requisitos de la Calidad
Sinónimos:
“Límite analítico de desempeño (LAD)”
“Límites de tolerancia” – ISO 3534
“Error máximo permisible” – RiliBAK
“Especificaciones de calidad” – Dybkaer 1999
“Objetivos de calidad” – Miro, Fuente Arderiu y Klee
Requisitos de la Calidad
Definición:
“Son especificaciones acerca de la tasa de error que
puede ser permitida para un procedimiento de medida
sin invalidar la utilidad clínica de resultado generados
por el mismo.”
ISO 15189:2012
Establece que las
Permite asegurar que los
especificaciones para cada Se deduce que se debe
procedimientos analíticos
procedimiento analítico disponer de
estén diseñados para
deben corresponder a la especificaciones de calidad,
producir resultados
utilización prevista de tal bien definidas.
clínicamente útiles
procedimiento.
LAD
Definir LAD implica el
entendimiento del objetivo
analítico
Requerimiento de calidad
El establecimiento
analítica fundamental para
del propio desempeño con
controlar la calidad en el
la prueba
Laboratorio Clínico
Aplicar
herramientas de control de
Determinar alarmas y límites calidad para cada paso
importante.
• Diagnosticar – Detectar
• Confirmar – Descartar
NECESIDADES CLÍNICAS
• Control Terapéutico - Monitorear
Sensibilidad diagnóstica
PRECISIÓN: MONITOREAR
Sensibilidad analítica
(Garantizar reproducibilidad,
Especificidad diagnóstica
VRC)
Especificidad analítica
EXACTITUD: DIAGNOSTICAR
(Detectar de primer vez)
Tolerancia Admisible Dentro de
TEST CUANTITATIVOS Variación Analítica Total Tolerancia
Error Total admisible
VALIDEZ DEL
DIAGNÓSTICO
Positivo -
TEST CUALITATIVOS Especificaciones de Desempeño Negativo
ESPECIFICACIONES DE
CALIDAD FUNCIONAL
Oportunidad Confidencialidad
Accesibilidad
Humanización del
Seguridad
Servicio
Continuidad
Requisitos de la Calidad
241 participantes
de 41 países…
En Noviembre del 2014 se
llevó a cabo en Milán, Italia
una conferencia sobre
especificaciones de la
calidad para el laboratorio
clínico organizada por la
Federación Europea de
Química Clínica y
Laboratorio Médico (EFLM,
por sus siglas en inglés)
Requisitos de la Calidad
Los tres modelos propuestos son:
Modelo 1: Basado en el efecto del desempeño analítico
sobre los resultados clínicos
Modelo 2: Basado en los componentes de variabilidad
biológica del mensurando
Modelo 3: Basado en el estado del arte (CLIA, RCPA)
Modelo 1. Situaciones Clínicas Específicas.
NACB: Guía de Consenso para el Diagnóstico y Seguimiento de la Enfermedad Tiroidea Liliana M.
Bergoglio, Bioquímica Endocrinóloga y Jorge H. Mestman, Médico Endocrinólogo
Modelo 2. Variabilidad Biológica.
Modelo 3. Estado del Arte CLIA.
Modelo 3. Estado del Arte CLIA.
Requisito de la Calidad en unidades de concentración: expresión en porcentaje
Vamos a plantear la siguiente situación:
- Mensurando: Calcio en suero en mg/dl.
- He seleccionado para este mensurando el requisito de la calidad de CLIA.
- El requisito de la calidad de CLIA para el Calcio es un 1 mg/dl.
- En mi laboratorio cuento con dos materiales de control.
- El primer material de control tiene un valor asignado de 9.8 mg/dl
- El segundo material de control tiene un valor asignado de 12.5 mg/dl
- El requisito de la calidad de CLIA para ambos niveles de decisión medica es de 1 mg/dl
La pregunta es: ¿cómo expreso el requisito de la calidad para cada nivel de decisión medica evaluado en porcentaje?
Es fácil. Aplicamos una regla de tres simples o proporciones. La forma adecuada y simple de resolverlo es dividir al
requisito de la calidad expresado en unidades de concentración entre el nivel de decisión médica, y al número
resultante lo multiplico por cien.
O divido 1 entre 9.8, y el numero resultante lo multiplico por 100. La expresión en porcentaje del requisito de la
calidad según CLIA para el Calcio para un nivel de decisión medica de 9.8 mg/dl es de 10.2%.
Modelo 3. Estado del Arte CLIA.
Requisito de la Calidad con doble expresión
Existen mensurandos que tienen especificaciones de desempeño analítico con una doble expresión, es decir, están
expresados en unidades de concentración y porcentaje. La idea, es que aplique lo que sea siempre más alto, según la
concentración que estemos evaluando.
Pensemos que en nuestro laboratorio:
- Tenemos dos controles de Creatinina.
- El primer nivel de decisión médica tiene una concentración de 0.9 mg/dl.
- El segundo nivel de decisión médica tiene una concentración de 1.8 mg/dl.
Debemos definir, ¿cuál es la expresión del requisito de la calidad de CLIA en porcentaje para cada
nivel de decisión medica evaluado?
Modelo 3. Estado del Arte RiliBAk.
Modelo 3. Estado del Arte EQC.
Modelo 3. Estado del Arte Interlaboratorios.
Percentiles. Propuestos por el Dr. Xavier Fuentes Arderiu
Modelo 3. Estado del Arte Interlaboratorios.
Buen Desempeño
Especificaciones de
Desempeño analítico
[Link]
¿ Cómo seleccionar el mejor LAD?
Definiciones
Medición 2.1
“proceso que consiste en obtener experimentalmente uno o
varios valores que pueden atribuirse razonablemente a una
magnitud”
Magnitud 1.1
“propiedad de un fenómeno, cuerpo o sustancia, que puede
expresarse cuantitativamente mediante un número y una
referencia” . La magnitud que pretendemos medir es el
mensurando.
Analito
“entidad que pretendemos determinar”
Vocabulario Internacional de Metrología, VIM 2012.
Definiciones
Mensurando 2.3
“magnitud que se desea medir”
En el laboratorio clínico mensurando es el contenido (concentración) de una entidad química (molécula, elemento, ión,
etc.) en un objeto (muestra biológica). La entidad que pretendemos medir es conocida como analito.
IUPAC/ IFCC proponen el siguiente formato mínimo para definir un mensurando en el Laboratorio Clínico:
“sistema – componente; tipo de magnitud y unidad de medida”
Por ejemplo:
1. Sistema (parte del universo que se estudia). Plasma en condiciones fisiológicas (37°C, pH: 7.4).
2. Componente (que se examina en ese sistema). Tiroxina libre (FT4).
3. Tipo de propiedad (del componente en ese sistema). Concentración de sustancia.
4. Unidad de medida. pmol/L.
Resumido:
“P-FT4; concentración de sustancia en pmol/L”
Vocabulario Internacional de Metrología, VIM 2012.
Definiciones
2.15
Precisión
CV(%)
precisión de medida, f
precisión, f
proximidad entre las indicaciones o los valores medidos obtenidos en mediciones repetidas de un
mismo objeto, o de objetos similares, bajo condiciones especificadas
2.20 condición de repetibilidad de 2.22condición de precisión 2.24 condición de reproducibilidad
una medición, f intermedia de una medición, f de una medición, f
condición de repetibilidad, f condición de precisión intermedia, f condición de reproducibilidad, f
condición de medición, dentro de un condición de medición, dentro de un condición de medición, dentro de un
conjunto de condiciones que incluye conjunto de condiciones que incluye el conjunto de condiciones que incluye
el mismo procedimiento de mismo procedimiento de diferentes lugares,
medida, los mismos operadores, el medición, el mismo lugar y mediciones operadores, sistemas de medida y
mismo sistema de medida, las repetidas del mismo objeto u objetos mediciones repetidas de los mismos
mismas condiciones de operación y similares durante un objetos u objetos similares
el mismo lugar, así como mediciones periodo amplio de tiempo, pero que
repetidas del mismo objeto o de un puede incluir otras condiciones que
objeto similar en un periodo involucren variaciones
corto de tiempo
Vocabulario Internacional de Metrología, VIM 2012.
Definiciones
2.14
Veracidad
veracidad de medida, f
veracidad, f
proximidad entre la media de un número infinito de Sesgo / Bias(%)
valores medidos repetidos y un valor de
referencia
2.13 (3.5)
exactitud de medida, f
exactitud, f
proximidad entre un valor medido y un valor verdadero de un
mensurando
Exactitud
NOTA 2 El término “exactitud de medida” no debe utilizarse en lugar
de veracidad de medida, al igual que el término “precisión de medida”
tampoco debe utilizarse en lugar de “exactitud de medida”, ya que esta ET(%)
última incluye ambos conceptos.
Vocabulario Internacional de Metrología, VIM 2012.
Parámetros estadísticos que Parámetros estadísticos que estiman la dispersión
estiman el valor central
Desviación Estándar
Media Aritmética Coeficiente de Variación
▪ Promedio de los resultados
▪ Suma de los resultados dividido en su cantidad. Cuanto más se dispersan los resultados de un valor
▪ Nos da una estimación del valor central. central mayor será la DS y menor la precisión
▪ Llamado también valor medio.
desde -∞ hasta +∞
Definiciones
Error Error
Aleatorio Sistemático
Imprecisión Veracidad
Control de
Control de Calidad
Calidad Interno Interlaboratorial
SESGO%
CV%
ERROR TOTAL EXACTITUD CONTROL EXTERNO
Definiciones
Definiciones
Cutoff-Punto de Corte
Es el umbral por encima del cual el resultado se reporta como positivo y por debajo del cual el resultado se informa como negativo.
Recomendación EP12A2 8.0 Estudios de Precisión.
100% Fiabilidad 100% Fiabilidad
Definiciones
Analítica
(LOD)
Analítica
Especificidad
Sensibilidad
Diagnóstica
100 x VN / (FP + VN)
Diagnóstica Funcional
100 x VP / (FN + VP). (LOQ)
Condición de Interés:
Enfermedad particular, estadio de una enfermedad, estado de salud o cualquier otra condición o característica de
interés identificable en un individuo, tal como una enfermedad presente.
Falso negativo (FN)
Falso positivo (FP)
Resultado negativo de una prueba en un Resultado positivo de una prueba en
individuo que presenta la condición de un individuo que no presenta la
interés (determinada por un criterio condición de interés (determinada por
diagnóstico preciso). un criterio diagnóstico preciso).
Resultado negativo de una prueba en un
Verdadero negativo (VN) individuo el cual no presenta la condición de
interés (determinada por un criterio
diagnóstico preciso)
Resultado positivo de una prueba en un
individuo el cual presenta la condición de Verdadero positivo (VP)
interés (determinada por un criterio
diagnóstico preciso).