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Instituto Politécnico Nacional
Unidad Profesional Interdisciplinaria de
Ingeniería Campus Guanajuato (UPIIG)
“PCR”
SEGUNDO DEPARTAMENTAL
Tecnologías de Recombinación
Genética
Nombre:
Angel Jair Pulido Santiago
Profesor:
Juan Francisco Sánchez López
05/05/2024
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Introducción
La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés Polymerase
Chain Reaction) ha revolucionado la biología molecular desde su desarrollo en la década de
1980, es una técnica fundamental en biología molecular que revolucionó la manera en que se
investiga y comprende la genética, la medicina y diversas áreas de las ciencias biológicas.
Desarrollada por Kary Mullis en 1987, esta técnica permite amplificar segmentos específicos
de ADN, incluso en cantidades mínimas, lo que ha tenido un impacto significativo en una
variedad de campos, desde la medicina forense hasta la investigación en enfermedades
genéticas. En este documento, se explorará el funcionamiento de la PCR, sus aplicaciones en
diferentes áreas, sus variaciones y su importancia en la investigación científica actual.
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Desarrollo
La PCR es una técnica ampliamente utilizada que permite la amplificación
exponencial de secuencias específicas de ADN in vitro, permitiendo así la obtención de
cantidades suficientes de material genético para su posterior análisis. Consiste en un proceso
de tres pasos que se repite en forma cíclica, utilizando una enzima especializada llamada
ADN polimerasa, que cataliza la síntesis de nuevas cadenas de ADN a partir de cebadores
cortos de ADN y una plantilla de ADN. Los tres pasos principales de la PCR son la
desnaturalización, hibridación (primers) y extensión.
• Principios Fundamentales de la PCR
El primer paso, la desnaturalización, implica calentar la muestra de ADN a una
temperatura elevada (generalmente alrededor de 95°C), rompiendo los enlaces de hidrógeno
entre las dos cadenas complementarias de ADN, lo que resulta en la separación de las hebras
de ADN.
El segundo paso es la hibridación (primers), donde se enfría la muestra para permitir
que los cebadores (oligonucleótidos cortos diseñados para unirse a secuencias específicas de
ADN) se unan a las secuencias objetivo en las hebras de ADN desnaturalizadas. Estos
cebadores marcan los extremos de la región de ADN que se amplificará. Esto ocurre a una
temperatura entre 50-60˚C por 30 segundos para permitir que los cebadores se unan a sus
secuencias complementarias en el ADN molde.. La temperatura y el tiempo puede variar
entre cebadores, muestra, equipo, etc.
Una vez que los cebadores están unidos a sus secuencias complementarias, la
temperatura se eleva nuevamente a alrededor de 72°C, la temperatura óptima para la
actividad de la ADN polimerasa. Durante la elongación, la ADN polimerasa sintetiza una
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nueva cadena de ADN complementaria utilizando los cebadores como iniciadores y las
hebras de ADN molde como plantillas. Este proceso de extensión se repite en cada ciclo de
PCR, lo que resulta en la duplicación exponencial del fragmento de ADN específico deseado.
Cada ciclo de PCR duplica el número de copias del fragmento de ADN, lo que conduce a una
amplificación masiva del material genético en pocas horas.
La PCR puede realizarse utilizando diferentes variantes y protocolos según las
necesidades específicas de la investigación o aplicación. La PCR convencional, también
conocida como PCR tradicional, utiliza termocicladores estándar y cebadores específicos
para amplificar fragmentos de ADN de interés. La PCR en tiempo real (qPCR) permite
cuantificar la cantidad de ADN presente en una muestra en tiempo real durante el proceso de
amplificación. Esta técnica es ampliamente utilizada en la cuantificación de expresión génica,
diagnóstico de enfermedades y detección de patógenos. Otra variante importante es la PCR
digital (dPCR), que permite la cuantificación absoluta de ADN mediante la partición de la
muestra en millas o millones de microcompartimentos, donde la amplificación ocurre de
forma independiente.
• Metodología de la PCR
La PCR se realiza sustancialmente en un termociclador, un equipo de laboratorio
capaz de controlar con precisión la temperatura en diferentes etapas del proceso. El diseño
del experimento de PCR implica la selección cuidadosa de los cebadores para garantizar la
especificidad y eficiencia de la amplificación, así como la optimización de las condiciones de
reacción, incluyendo la concentración de reactivos y los parámetros de temperatura.
Una vez que se completa el ciclo de PCR, el producto de amplificación se puede
analizar mediante diversas técnicas, como electroforesis en gel, secuenciación de ADN o
técnicas de detección molecular, dependiendo de los objetivos específicos del experimento.
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• Aplicaciones de la PCR
La PCR tiene una amplia gama de aplicaciones en diferentes campos. En medicina, se
utiliza para el diagnóstico de enfermedades infecciosas, la identificación de patógenos, la
detección de mutaciones genéticas y la determinación de la susceptibilidad a enfermedades
hereditarias. Por ejemplo, en el contexto de la pandemia de COVID-19, la PCR se ha
utilizado ampliamente para detectar la presencia del virus SARS-CoV-2 en muestras
respiratorias de pacientes.
En biología forense, la PCR se emplea en la identificación de individuos a través del
análisis de ADN, la determinación de relaciones familiares y la resolución de casos
criminales. Además, la PCR cuantitativa (qPCR) permite la cuantificación precisa de ADN, lo
que la hace útil en estudios de expresión génica, análisis de muestras ambientales y
seguimiento de la carga viral en infecciones virales crónicas como el VIH.
En biotecnología, la PCR se utiliza en la ingeniería genética para la construcción de
vectores de clonación, la mutagénesis dirigida y la síntesis de genes. También se emplea en la
caracterización de productos transgénicos y en la producción de proteínas recombinantes. En
la investigación científica, la PCR es una herramienta fundamental para estudiar la diversidad
genética, la evolución molecular y la filogenia de especies.
• Implicaciones y limitaciones de la PCR
Aunque la PCR es una técnica poderosa y versátil, tiene ciertas limitaciones y
consideraciones importantes a tener en cuenta. La contaminación cruzada de muestras y la
formación de productos no específicos son problemas comunes que pueden comprometer la
confiabilidad de los resultados. Además, la amplificación de ADN a partir de muestras
degradadas o contaminadas puede ser difícil y requerir técnicas adicionales, como la PCR
digital o la PCR multiplex, para mejorar la sensibilidad y la especificidad del análisis.
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Otra consideración importante es la posibilidad de errores de secuenciación durante la
amplificación, especialmente en regiones de ADN altamente variables o propensas a la
formación de estructuras secundarias. Además, la PCR tiene limitaciones en términos de
longitud de los fragmentos de ADN que se pueden amplificar eficientemente, con productos
más largos que pueden requerir estrategias de amplificación específicas, como la PCR de
Múltiples fragmentos o la amplificación por reacción en cadena de la ligasa ( LCR).
Conclusión.
En conclusión, la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica
fundamental en la biología molecular que ha transformado la forma en que se llevan a cabo la
investigación científica, el diagnóstico médico y la aplicación forense. Su capacidad para
amplificar secuencias específicas de ADN de manera rápida, precisa y eficiente la convierte
en una herramienta indispensable en una amplia gama de aplicaciones. Sin embargo, es
importante tener en cuenta sus limitaciones y consideraciones metodológicas para garantizar
la confiabilidad de los resultados. En última instancia, la PCR continúa siendo objeto de
investigación y desarrollo, con el potencial de seguir avanzando en la comprensión de la
genética, la biología y la medicina.
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Referencias
Mullis, K. B. (1994). The polymerase chain reaction. In Nobel Lectures, Physiology
or Medicine (pp. 318-337). World Scientific Publishing Co.
Saiki, R. K., Scharf, S., Fukanaga, Y., Hornby, K. B., Erlich, H. A., & Arnheim, N.
(1985). Primer-directed amplification of DNA using a heat-stable DNA polymerase. Science,
230(4704), 1340-1343.
Dieffenbach, F. W., & Saiki, R. K. (1995). The polymerase chain reaction. In PCR
(pp. 1-34).
Mullis, K. B., & Faloona, S. A. (1987). Specific amplification of DNA by the
polymerase chain reaction. Methods in Enzymology, 155, 338-350.
Gómez-Arroyo, S., & Díaz-Ruiz, A. (2016). PCR: principios y aplicaciones (2a ed.).
Editorial Médica Panamericana.
Kwok, S., Kellogg, D. E., & Spielberg, L. (1990). Phylogenetic analysis of yersinia
pestis strains by PCR-amplified 16S rRNA gene sequences. Journal of Clinical Microbiology,
28(11), 2277-2281.