2025

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MANUAL DE
REPORTES DE
LABORATORIO
MATERIA: MICROBIOLOGIA GENERAL
PROFESORA: DRA. SABINA VIRAMONTES RAMOS
FECHA DE ENTREGA: 23 DE MAYO 2025
FRIDA LUCIA CASILLAS MOLINA
Contenido
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 2
RESULTADOS ................................................................................................................. 4
Práctica 1: Observación microscópica de células eucariotas: algas y protozoos .......... 4
Práctica 2: Observación microscópica de células eucariotas; hongos.......................... 6
Práctica 3: Observación microscópica de células procariotas; bacterias ................... 10
Práctica 4: Determinación de bacterias lácticas ......................................................... 13
Práctica 5: Esterilización y medios de cultivo .............................................................. 14
Práctica 6: Observación columna de Winogradsky ...................................................... 20
Práctica 7: Efecto de factores ambientales en crecimiento microbiano ..................... 21
Práctica 8: Conteo Microbiano..................................................................................... 27
Práctica 9: Metabolismo microbiano: producción de exoenzimas .............................. 29
Práctica 10: Pruebas Bioquímicas para enterobacterias ............................................. 33
DISCUSIÓN DE RESULTADOS....................................................................................... 39
Práctica 1 ..................................................................................................................... 39
Práctica 2 ..................................................................................................................... 40
Práctica 3 ..................................................................................................................... 41
Práctica 4 ..................................................................................................................... 42
Práctica 5 ..................................................................................................................... 43
Práctica 6 ..................................................................................................................... 50
Práctica 7: .................................................................................................................... 51
Práctica 8: .................................................................................................................... 53
Práctica 9: .................................................................................................................... 54
Práctica 10: .................................................................................................................. 56
CONCLUSIONES .......................................................................................................... 64
BIBLIOGRAFÍA .............................................................................................................. 69
INTRODUCCIÓN
La microbiología es la ciencia encargada de estudiar los microorganismos, unos seres
unicelulares que solo son visible al microscopio y que también son conocidos como
microbios. Entre ellos se encuentran las bacterias, los hongos, los protistas, los
parásitos, los priones, las arqueas y los virus, muchos de los cuales cumplen funciones
esenciales dentro de los distintos ecosistemas.

Tradicionalmente la microbiología ha estudiado los microorganismos patógenos, pero

también estudian las bacterias fijadoras de nitrógeno, cianobacterias,… que no son
patógenas pero que tienen una importancia crucial en los ciclos biogeoquímicos del
planeta.

Esta disciplina se ocupa de clasificarlos, analizarlos y describirlos y, en el caso de

aquellos que generan enfermedades, también examina su forma de infección y la
manera de controlarlos y combatirlos.

Desde hace miles de años los seres humanos han utilizado a los microorganismos para
producir alimentos, como el vino, el queso, la cerveza y el pan. Hoy los mismos tienen
un alto potencial de aprovechamiento en la biotecnología, para usos medicinales,
energéticos y ambientales.

En la actualidad se estima que solo se conocen menos del 1 por ciento de los
microbios existentes en la biosfera. Esto abre las puertas para investigaciones y
posibilidades de nuevos desarrollos tecnológicos para mejorar la vida de las personas.

Durante el siglo XX la microbiología empezó a estudiarse desde distintos ángulos,

incluyendo a la genética, la ecología, la bioquímica y la fisiología. Desde entonces, la
microbiología tuvo un amplio desarrollo para usos alimenticios, medicinales, hídricos,
energéticos y ambientales. En el futuro se estima que esta ciencia permitirá nuevos
desarrollos tecnológicos para mejorar la vida humana (Microbiología: historia, qué
estudia, tipos, conceptos básicos, 2020).

Existen numerosos tipos de microbiología, cada uno de ellos está especializado en un

ámbito de estudio en concreto.

• Microbiología médica: se centra en el estudio de los microorganismos que

causan enfermedades (es decir, patógenos), como también definir estrategias
para la prevención y control de enfermedades infecciosas.
• Microbiología sanitaria: dentro de este tipo podemos diferenciar
principalmente otros dos: la microbiología de alimentos, que estudia los
microorganismos en los alimentos, tanto de los efectos beneficiosos como
 dañinos que estos causan, y la microbiología del agua, que aborda los
microorganismos de las aguas con el objetivo de obtener aguas de óptima
calidad, así como el uso de microorganismos para la regeneración de las aguas.
• Microbiología agrícola: trata los microorganismos para la fertilización de los
suelos, así como todos los efectos beneficiosos y perjudícales de los
microorganismos para la agricultura.
• Microbiología veterinaria: se centra en las enfermedades infecciosas causadas
por microorganismos a las mascotas y animales, estudiando también maneras
de prevención y control.
• Microbiología industrial: existen numerosos productos que se obtienen
mediante el metabolismo microbiano, y aquí es donde participa este tipo de
microbiología.
• Microbiología espacial: la microbiología va más allá y también abarca la posible
existencia de microorganismos en el espacio exterior, así como el uso de
microorganismos para temas relacionados con las naves espaciales.

La microbiología es considerada una de las disciplinas más importantes en biología,

ya que permite identificar cómo algunos de estos organismos causan enfermedades,
descubrir curas para dichas enfermedades y hasta incluso usar algunos microbios con
finalidades industriales.

Además, esta importancia también recae en el hecho de que los microorganismos se

encuentran prácticamente en casi todos los elementos naturales que existen en el
planeta y, nuestras vidas, así como las de las plantas y los animales, están
intrínsecamente vinculadas a estos microbios. Estos seres vivos se encuentran
constantemente reciclando nutrientes claves, como es el carbono o el nitrógeno, así
como degradando materia orgánica y contribuyendo a la configuración de nuestro día
a día. Así pues, los microorganismos afectan nuestro mundo de diferentes maneras.

Primeramente, los microbios mantienen el planeta sano, ya que aseguran un continuo

reciclaje de los minerales y nutrientes y, desempeñan a la vez, un papel crucial para el
mantenimiento de la atmósfera oxigenada. Por otro lado, los microbios son vitales para
la agricultura y los suelos que albergan cultivos y ganado. También, contribuyen a
mantener los brotes de ciertas enfermedades infecciosas bajo control. En cuanto a la
farmacología, los microbios se utilizan en numerosos productos de gran utilidad,
desde antibióticos hasta solventes o conservantes. Finalmente, la microbiología se ha
convertido en una herramienta indispensable para la biotecnología y también para la
ingeniería genética en las últimas décadas (Arias, 2020).
RESULTADOS
Práctica 1: Observación microscópica de células eucariotas: algas y protozoos
En esa agua estancada que fue analizada fue
muy fácil identificar las navículas presentes
dado a su coloración amarillo – ocre tan
característico además de su forma. (círculo
azul)

Muy cerca de una de las navículas se encontró

a una diatomea y más hacia su lado izquierdo
se logra observar la aparición de dos más de
ellas. Si se observa la muestra con más
detenimiento se lograban apreciar que debajo
de este agrupamiento de materia orgánica
estaba una población de diatomeas, y estas
se iban alejando cada vez más hacia las
orillas. (círculo rojo)

En la muestra 2 de agua que se analizó solo fue

posible encontrar diatomeas. Este tipo de algas
es típico encontrártelas en agua dulce, en este
caso era un agua estancada, que por lo que se
logra apreciar en el microscopio no eran muy
abundantes los flujos de microorganismos o el
charco de donde fue recolectada la muestra se
acababa de formar y además no estaba
rodeado de posibles contaminantes.
 La muestra 3 era rica y muy poblada por Euglena, es
fácil distinguirla de los otros tipos de algas presentes
gracias a su “ojo” rojo que les permite tener una
dirección hacía donde está el alimento beneficioso
para ellas y además darles movimiento, por lo que es
muy aplicable por estas algas en el hábitat en el que se
encuentran. La mancha ocular es una estructura
formada por una membrana que incluye gránulos
compuestos por pigmentos que captan la luz. Al lado
de la mancha ocular hay un orgánulo que se conoce
como fotorreceptor o fotosensor. Este recibe la luz que
filtra la mancha ocular y activa el funcionamiento
celular.

En una de las muestras fue impresionante porque

encontramos a un Rotífero, de clase Monogononta,
el cual se encontraba acompañado de varios
grupos de Euglenas, los cuales fueron los dos tipos
de algas que más predominaron en esta muestra.

Los rotíferos de clase Monogononta suelen

encontrarse en aguas de suelo; este tipo no
presentaba un mantrax muy evidente, pero los
cilios que forman su corona si eran evidentes en un
aumento de 100x en conjunto con las Euglena.
Práctica 2: Observación microscópica de células eucariotas; hongos
En el primer cuadro de PDA se colocó muestra de
fresa la cual ya contaba con crecimiento abundante
de moho, y bajo el microscopio se pudieron
encontrar 2 clases distintas de ellos conviviendo en
el mismo ambiente.

En el circulo azul se encuentran dos esporangios

pertenecientes a Rhizopus formados que si se
siguen las raíces provienen de la misma, solo que
una creció más arriba que la otra.

En los círculos de color rojo se pueden observar 3

formaciones de Penicillium, 2 salen de la misma
raíz y están más desarrolladas en comparación a la
que se encuentra más cercana a Rhizopus, esta
puede que se estuviera apenas formando.

En la muestra de naranja contaminada se pudieron

observar además de estreptococos; un esporangio
bien formado y probablemente aún en proceso de
maduración muy cerca de un esporangio que había
estallado hacia poco antes de tomar la muestra,
por lo que se logra apreciar como las esporas están
siendo liberadas y se comenzaban a distribuir para
seguir proliferando.

Además de estos dos esporangios se encontraba

presente una formación de Penicillium la cual se
estaba desarrollando desde una raíz que
pertenecía a uno de los Rhizopus y a mitad de esta
comenzó a crecer.
 En la muestra de tomate, además de
Penicillium se logró observar dos formaciones
de Alternaria que nacían desde la misma hifa,
pero como esta tuvo varias ramificaciones se
separaron, la cual se extendió desde el lado
Penicillium izquierdo y estas dos formaciones de mycetos
surgieron casi al final de esta.

En una hifa que quedo como intermediaria de

ambas, se puede apreciar como estaba en
proceso de formación otra Alternaria que a la
hora de la toma de muestra se quedó
inconcluso este proceso y solo aparece la
dictiospora.

La muestra de salchicha que era la más

contaminada tuvo un conjunto de todos los hongos
que ya se habían encontrado en las otras muestras,
y se sumó Geotrichum en abundancia, son
reconocibles 2 cadenas largas que se encuentran
ubicadas cerca la una de la otra, además de
cadenas pequeñas acumuladas en la parte
superior de la foto. (color rojo)

Una formación de Alternaria se encuentra en el

centro de la imagen, aunque un tanto borrosa ya
que estaba debajo de materia orgánica se logran
apreciar cada una de las dictiosporas de la cadena.
(color azul)

Y por último a Penicillium, la cual tiene una secuencia de 5 formaciones que lograron
salir completas; de las cuales 3 nacieron de la misma hifa y se extendieron hasta dar
forma al cuerpo fructífero completo. (flechas naranjas)
Además de observar el crecimiento de mohos en distintos alimentos en cuadros de
agar PDA, se hicieron 2 cajas Petri con otras dos muestras diferentes y de la limpieza
de la cascara para determinar hongos y levaduras, desafortunadamente aunque si se
obtuvo el crecimiento esperado en las cajas Petri, al microscopio solo fuimos capaces
de encontrar Penicillium en la caja de los hongos, por su parte en la caja de las
levaduras no hubo mucho crecimiento y en el microscopio no eran distinguibles como
hubiera sido esperado.
Continuando con las prácticas para la observación de hongos se observaron muestras
de Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans y Candida tropicalis. Se tiene
evidencia de la muestra de Candida, debido a la facilidad con que fue aislada del
cultivo por su forma de crecimiento. Las siembras de cada tipo fueron incubadas
aproximadamente a ±35°C por lo que en esta ocasión prolifero en forma de levadura,
por el aspecto de sus células redondas u ovaladas que forman pequeños grupos.

Lo que se observó en el microscopio fueron las clamisdoporas de este tipo de hongo;

algunas se encontraban en proceso de maduración y otras ya habían completado su
ciclo de vida cuando la muestra fue tomada para sembrarla en el agar.
Práctica 3: Observación microscópica de células procariotas; bacterias
• BACILLUS

El genero Bacillus es una bacteria Gram +, los cuales poseen una pared celular gruesa
conformado por un 90% de peptidoglicanos y un 10% de ácido teicoicos esto se
comprueba con la prueba de KOH al 3% si no se tiene formación de hebras, lo que
confirma esta caracteristica. Se utilizo como cepa para las distintas tinciones Bacillus
235 la cual es una bacteria que esporula rapido. Foto 1: Bacteria Bacillus con tinción
de Gram; Foto 2: Prueba de KOH+ no generó hebras; Foto 3: Prueba de Tinción de
Maneval; Foto 4: Prueba tinción de Shaeffer – Fulton.
 • KLEBSIELLA

Klebsiella es una bacteria Gram - que no posee movimiento, tiene forma de bastón y
con la tinción de Gram es muy caracteristico el color rosa. En la Foto 1: Se aprecia a
Klebsiella con la tinción Maneval con la que se puede identificar la cápsula. Foto 2: se
puede observar a Klebsiella con la tinción de Saheffer – Fulton con el característica
coloración azul verdosa y una prescencia pequeña de bacillus en la misma muestra lo
que puede significar una contaminación cruzada. Foto 3: Se observan una población
grande de Klebsiella con la tinción de Gram, la que es fácil de identificar la forma y los
arreglos de esta bacteria. Foto 4: Con la prueba de KOH 3% y al ser una bacteria Gram-
presenta formación de hebras gracias al bajo porcentaje de pepetidoglicanos en su
pared celular.

Se realizó un exhudado faringeo de uno

de los integrantes del equipo para poder
analizar el contenido bacteriano que se
encontraba en ese momento en su
organismo mediante el crecimiento de
este en agar sangre y agar nutritivo,
además de hacer un frotis.

La célula que se observó en el

microscopio fue una célula epitelial
escamosa. Al momento de hacer el
exhudadpo faringeo raspamos la capa
mas superficial del epitelio trayendonos
en el cotonente parte de estas células.

Se logran apreciar además bacilllus

rondando por la célula epitelial.
Práctica 4: Determinación de bacterias lácticas
Se analizaron muestras de productos lácteos para
observar la presencia de lactobacillus y
estreptococos respectivamente. En la muestra 1 se
analizó el producto Yakult, el cual es un producto
hecho a base de leche fermentada que contiene
gran cantidad de probióticos Lactobacillus, los
cuales son un género de bacterias Gram + que se
encuentran en el intestino; son beneficiosos para la
flora intestinal y que ayudan a mejorar el sistema
inmune sin provocar enfermedades en el cuerpo
humano. Dentro del círculo rojo se encierran todos
los conjuntos de lactobacillus que se encontraron a
simple vista en la muestra.

En la Foto 2 se logra apreciar los estreptococos que se encontraron en la muestra de

yogurth comercial que se estaba analizando.

Se logran apreciar en color azul debido al colorante azul de metileno que fue empleado
para colorearlos y asi poder apreciar su forma, arreglo bacteriano y longitud. La cadena
del centro se distingue que es la más larga de las 3 que se encontraron.
Práctica 5: Esterilización y medios de cultivo
Para el cultivo de cepas se utilizaron 10 medios de cultivo sólidos preparados por el
grupo cada uno con características y especificaciones diferentes para cada tipo de
bacteria a utilizar. Los medio de cultivo que fueron empleados son:

• Selectores y Diferenciales G- : XLD, Sulfito de Bismuto (SB), Agara Salmonella

– Shigella (SS), Desoxicolato, EMB, ENDO, HE
• Selectores y Diferenciales G+ : Sal Manitol
• Generales y Enriquecidos: T – 7 y Agar Chocolate

Las cepas de referencia que fueron utilizadas para sembrar cada medio de cultivo
fueron:

1. Eschericia coli
2. Shigella flexneri
3. Salmonella enteritidis
4. Staphylococcus aureus
5. Staphylococcus epidermidis

Siendo las primeras 3 cepas para agares G- y las últimas dos para agares de
crecimiento G+. Los agares generales y enriquecidos dependiendo la concentración de
la cepa que sea sembrada inhibe a un tipo de bacterias u otras. La composición
química de los medios de cultivo hay un punto importante; el cual es el componente
inhibidor del crecimiento: agares Gram- cuenta con Sales Biliares para no permitir el
crecimiento de las Gram +. Por su parte en las bacterias Gram+ posee una cantidad de
NaCl 7%.
 El agar XLD es especial para las bacterias
Gram-. Este agar tiene como sustrato en
conjunto con otros a la Lactosa, además
las iniciales del agar significan otros 3
sustratos que posee. Xilosa, Lisina,
Desoxicolato. El indicador de pH que
contiene este agar es el Rojo Fenol;
Shigella se torna rojizo porque esta
descarboxilando la lisina. La coloración
negra en el crecimiento de esa cepa
indica la producción de ácido sulfúrico
en gran medida, principalmente fue la
cepa enteritidis.

El agar Sulfito de Bismuto, está diseñado

especialmente para el crecimiento de
Salmonella y Shigella, en especial tiene
mayor crecimiento la cepa de Salmonella
enteritidis. La cepa de Salmonella
produce en gran cantidad ácido sulfúrico
en este medio como en el agar XLD. En el
medio de cultivo la peptona y el extracto
de carne proporcionan nitrógeno,
vitaminas y minerales necesarios para el
crecimiento de los microorganismos. Se
puede reducir el bismuto a metal dando
un brillo metálico alrededor de las
colonias correspondientes.
 El Agar SS es una modificación del Agar
Citrato de Desoxicolato. El agar SS es un
medio moderadamente selectivo en el
que las bacterias grampositivas son
inhibidas por las sales biliares, el verde
brillante y el citrato de sodio. El agar de
Salmonella Shigella (SS) es altamente
selectivo para las especies de
Salmonella, pero inhibe algunas cepas
de Shigella. No hay cambio de color a
excepción de la Salmonella que
produce coloración negra como
precipitado debido al sulfato ferroso del
agar.

Es un medio de crecimiento
bacteriológico sólido utilizado para aislar
patógenos entéricos. Es un medio
selectivo moderado y diferencial para el
aislamiento de patógenos entéricos,
especialmente Salmonella y muchas
especies de Shigella. Este es un agente
selectivo que inhibe el crecimiento de
bacterias Gram positivas, lo que favorece
el crecimiento de las bacterias Gram
negativas. Eschericia coli fermenta la
lacotsa del medio lo que provoca un
cambio de color, por otro lado
Salmonella y Shigella no la fermentan por
lo que sus colonias quedan del mismo color del agar.
 El agar HE está diseñado
especialmente para aislar Shigella que
contiene 3 veces la cantidad de sal
biliar que normalmente posee. El
indicador de ph es el azul de
bromotimol; en un ph básico se torna
verde, de color ácido es amarillo –
naranja. E. coli fermenta los azucares
del medio de cultivo lo que inidca el
cambio de color. La Salmonella
produce ácido sulfurico como
precipitado cambiando de color el
medio y poniendo las colonias de color
negro oscuro.

El agar ENDO es un medio de cultivo

diseñado para diferenciar entre
microorganismos fermentantes y no
fermentantes de la lactosa. La
selectividad del agar Endo se debe a la
combinación del sulfito de sodio con
fucsina básica, lo cual ocasiona la
supresión parcial de los
microorganismos gram-positivos. Los
coliformes fermentan la lactosa,
produciendo colonias color rosa oscuro
a rojizo con un brillo metálico verdoso
iridiscente y una coloración similar en el
medio. Las colonias de
microorganismos que no fermentan la lactosa son incoloras o de color rosa pálido en
contraste con el fondo rosa claro del medio. Siendo la muestra 1 E. coli una productora
de lactosa, Shigella y Salmonella no la fermentan.
 La diferenciación entre organismos
capaces de utilizar la lactosa y/o
sacarosa, y aquellos que son
incapaces de hacerlo, está dada por
los indicadores eosina y azul de
metileno; éstos ejercen un efecto
inhibitorio sobre una amplia variedad
de bacterias Gram positivas. Muchas
cepas de Escherichia coli presentan un
característico brillo metálico. Las
cepas que utilizan la lactosa poseen
centro oscuro con periferia azulada o
rosada, mientras que las que no lo
hacen son incoloras. La cepa 1 es E.
coli, se distingue por la coloración oscura de sus colonias, el brillo que poseen y el
borde en color rosado claro. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de
especies de Salmonella y Shigella; aunque estás dos cepas no tengan una coloración
similar a E. coli se observan más desarrolladas y con un mayor crecimiento colonial.

Este tipo de agar contiene NaCl al 7.5%

el cual potencializa el crecimiento de
bacterias Gram postivas. El Manitol es
el sustrato principal del medio, se
produce manitolasa, se destruye y
produce Glucosa y Piruvato para entrar
en la vía metabolica de la Glucolisis ya
sea en presencia o no de oxigeno. El
indicador de ph que posee el agar es el
rojo fenol. En un pH ácido se torna
amarillo y para Staphylococcus aureus
indica un manitol y manitolasa
positivas. Y en un pH básico se torna
rosa, la cepa Staphylococcus
edpidermidis tiene manitol y manitolsaa negativos.
 Este medio de cultivo es general y
enriquecido ya que dependiendo la
concentración de la cepa de Gram – o
Gram + se inhibe a una u otra bacteria. El
indicador de ph del medio es el azul de
bromotimol. E. coli si creció pero no en
gran cantidad, el inhibidor de la Lactosa +.

En donde no se observa nada en el espacio

fue sembrada una bacteria Gram positiva
(Staphylococcus aureus), su nulo
crecimiento se debe a la baja
concentración de la bacteria por lo que no
fomenta su nutrición y por ende
crecimiento.

Por su parte Shigella tiene una producción negativa de lactosa y hace un cambio con
el indicador de ph, provoca que se alcalinice cambiando su coloración a un verde
bandera.

El agar chocolate no posee ningún

inhibidor de crecimiento especifico para
algún tipo de bacterias por lo que permite
el crecimiento de cualquier
microorganismo presente en el medio
ambiente. Se hizo un muestreo de los
telefonos de las compañeras del equipo
para observar la presencia de bacterias y
microorgnaismos en el dispositivo.

Entre las más comunes se encuentran

Estreptococo, estafilococo, difteroides y
E. Coli.
Práctica 6: Observación columna de Winogradsky
En la columna de Winogradsky no fueron observados muchos microorganismos,
fueron pocos, por mencionar:
• Euglena

• Pinnularia

No se observó tanto crecimiento de microorganismos debido a la muestra que fue

utilizada ya que no venía tan rica en contaminantes ni con poblaciones en crecimiento
microbiano.
Práctica 7: Efecto de factores ambientales en crecimiento microbiano
Está práctica se dividió en dos partes: la primera donde se pusieron bajo efecto de
diversas características ambientales a distintos microorganismos para
posteriormente observar su crecimiento o la ausencia de este. La segunda parte
consistió en la observación de determinado microorganismo y la resistencia que este
posee a cuatro antibióticos específicos.

PARTE 1

• Temperatura

Los microorganismos que fueron sembrados para esta parte son: 1) E. coli, 7)
Pseudomonas aeruginosa y 8) Bacillus stearothermopilus

60° C: Dado que son temperaturas fuera del

rango de crecimiento para bacterias que no
son extremófilas no hay crecimiento de
ninguna de las primeras dos cepas, sin
embargo, Bacillus se encuentra en el rango
óptimo de crecimiento, y aunque creció muy
poco la cepa, se observan colonias muy
puntuales.

35° C: A esta temperatura las cepas 1 y 7,

encuentran un rango adecuado para proliferar
y aumentar en número. Se observan con
claridad innumerables colonias de estas
cepas las cuales tuvieron un crecimiento
uniforme, sin embargo, se puede observar
cómo ambas cepas muestran señas de
contaminación en el espacio de Bacillus
(principalmente Pseudomonas) por el color de
sus colonias y la proximidad al espacio donde
estaba sembrada, y aunque E. coli también
contamino lo hizo en menor medida.
 3 ° C: En una incubación a esta
temperatura ninguna de las cepas
mostró crecimiento debido a que no
son las temperaturas óptimas para
ellas.

• pH

Las cepas utilizadas para la parte de pH son: 2) Shigella flexneri, 3) Levadura 9 y 4)

Vibrio parahemoliticus. Se emplearon tres agares diferentes para cada prueba.

Agar PDA (ácido):

Este agar solo permite el crecimiento

de la Levadura debido a que favorece el
crecimiento de levaduras por su alto
contenido de carbohidratos
principalmente la glucosa, un pH ácido
que inhibe el crecimiento de bacterias,
pero favorece el de hongos y levaduras.
Además, no contiene antibióticos o
sustancias selectivas.
 Agar Nutritivo (neutro):

Este agar favorece unicamente el

crecimiento de la cepa Shigella. Al ser
un agar de pH neutro permite el
crecimiento de una gran variedad de
cepas y es universalmente utilizado
para muchas de ellas por los nutrientes
que les proporciona: extracto de carne o
peptona: fuente de aminoácidos,
péptidos y vitaminas y dextrosa
(opcional): fuente de energía.

El crecimiento de la cepa 3 y 4 se ve
frenado dadas las condiciones no
favorables para ellas, sin embargo, se observa una contaminación en uno de los
espacios.

Agar TCBS (alcalino):

2
En este agar la bacteria Vibrio
3 parahemoliticus encuentra un pH
adecuado para su crecimiento, además
este agar está diseñado para inhibir el
crecimiento de bacterias Gram positivas
y muchas Gram negativas no Vibrio ya
que contiene sales biliares y citato de
sodio, que suprimen bacterias
competidoras por lo que se puede
4 observar a las cepas 2 y 3 frenadas.
Vibrio parahemoliticus forma colonias
azul – verdosas debido a que no fermenta
sacarosa ni H₂S.
 • Presión Osmótica (A.W.)

Las cepas empleadas para esta prueba son: 2) Shigella flexneri, 3) Levadura 9 y 5)
Staphylococcus aureus

Agar Sal Manitol:

5 En este agar se puede apreciar el

crecimiento de únicamente
2 Staphylococcus aureus y el crecimiento
de la cepa 2 y 3 se ve frenado dado que
este agar es selectivo para aislar y
diferenciar a géneros de
Staphylococcus. Contiene 7.5% de
NaCl, manitol como carbohidrato y rojo
fenol como indicador; si la bacteria
fermenta el manitol se acidifica el
medio y cambia a amarillo.

Agar Nutritivo 15% NaCl:

Este agar esta diseñado especialmente

para esepcies halófilas extremas o halófilas
altas – moderadas (Halobacterium
salinarum, Salinibacter ruber) por lo que
especies comunes y catalogadas como no
halofilas no suelen presentar crecimiento
en sistemas de alta presión osmótica.
 Agar Nutritivo 25% azúcar:

En este agar se ve favorecido el

crecimiento de las cepas 3 y 5, dejando
frenado el crecimiento de la cepa 2.

Al contener un alto porcentaje de azúcar

en su composición hace al agar que sea
un medio con alta presión osmótica y le
brinda nutrientes básicos para el
desarrollo de Levaduras y para algunas
bacterias tolerantes como en este caso
Stap. Aureus.

• Prueba de O2

a b

Ilustración a. Pseudomonas aeruginosa, Ilustración b. Shigella flexneri, Ilustración c. Muestra

La cepa cultivada en el tubo a) es una bacteria aerobia estricta, por lo cual crece en
presencia de oxígeno y es visible en la parte de arriba del tubo.

La cepa cultivada en el tubo b es una cepa que no posee motilidad, por lo que su
crecimiento se concentra solamente en la zona de punción del cultivo.
La muestra cultivada en el tubo c) es una bacteria anaerobia estricta, crece en
ausencia de oxígeno y se concentra en el fondo del tubo.

PARTE 2

Resistencia o Sensibilidad de la Bacteria E. coli

En esta prueba se sometió a la bacteria

E. coli a cristal violeta para observar la
2 resistencia o sensibilidad a esta
sustancia a diferentes concentraciones.

En el espacio que se observa mayor

1 crecimiento de la cepa es donde no se
forma un halo alrededor del círculo de
papel con cristal violeta de
concentración 1:100,000 (1) dado que es
más baja.

El círculo de papel con cristal violeta de

concentración 1:100 (2) presenta un halo
de inhibición pequeño alrededor, el cual
impide en medida pequeña el crecimiento de la bacteria haciéndolo en baja medida
sensible.

Por último, el círculo de cristal violeta concentrado presenta un halo de inhibición más
grande y notorio impidiendo el crecimiento en esa área y haciendo que sea sensible.

En esta prueba de resistencia o

sensibilidad de la bacteria se emplearon
cuatro antibióticos comunes los cuales
son: 1) Cloranfenicol: presenta un halo
de inhibición grande y claro de tamaño
similar al antibiótico 2, al cual la bacteria
es SENSIBLE. 2) Ampicilina: al igual que
4
el antibiótico 1 presenta un halo de
inhibición grande y claro, impidiendo el
la proliferación de la bacteria haciendo
que sea SENSIBLE. 3) Carbenicilina:
aunque el halo de inhibición no es tan
grande como los primeros antibióticos si
impide en bajo porcentaje el
crecimiento de la bacteria por lo que se podría considerar que es intermedia SENSIBLE
– RESISTENTE. 4) Eritromicina: la bacteria E. coli es completamente RESISTENTE a este
antibiótico, no presenta un halo de inhibición y permite el crecimiento sin ningún
impedimento.

Práctica 8: Conteo Microbiano

En el medio ARVB no hubo crecimiento de
coliformes en la técnica vaciado en placa
debido a que el agar aún estaba muy
caliente, al momento de verterse sobre la
alícuota de la muestra mató a los
microorganismos que pudo contener.

Con la técnica de la gota se hizo el conteo

de número más probable, principalmente
con las diluciones 1:100 de ambos
agares.

Fue un poco más difícil contar las

colonias existentes en el agar CST debido
a que las colonias están más cerca una
de las otras y parece que son una misma,
cuando esto sucede y se aglomeran se
toma como si fuera 1 sola.

En medio CST se encuentran 55,000 UFC

y en medio ARVB 34,000 UFC,
considerándose una buena cantidad de
células viables para el crecimiento de
esta microorganismo.
La siembra de este microorganismo en
caldo lactosado indica la producción de
gas y si el microorganismo es apto para
crecer en diversos ambientes;
dependiendo la concentración del
mismo. En varios de los tubos se
encuentra el precipitado.
Práctica 9: Metabolismo microbiano: producción de exoenzimas
• Prueba de Urea

Las cepas utilizadas son: 1) E. coli y 2)

Proteus mirabilis; en esta prueba
interviene la enzima ureasa,
1 2 produciendo 2NH3 + CO2. Utiliza rojo
fenol como indicador de pH. En este caso
el tubo 2) presenta un ph alcalino
indicando la presencia positiva de la
enzima y un cambio de color del medio
de naranjoso a un rojo – rosado. Proteus
es una bacteria con enzima ureasa +.

• Prueba de Plasma

En esta prueba si la bacteria

presentaba la enzima
coagulasa se debía formar
un coágulo de fibrina; el cual
es evidente en el tubo 1)
donde fue colocada a
Staphylococcus aureus
siendo + en la enzima
coagulasa.
 • Caldo R.F.

En este caldo solo se logra apreciar la

producción de gas, la fermentación de los
2 carbohidratos por parte de los
1 microorganismos. La mayoría de los
productos finales de la fermentación de
carbohidratos son ácidos orgánicos que en
presencia de rojo de fenol producen un
cambio de color en el medio de rojo a
amarillo. Si el gas se produce durante la
reacción de fermentación se observa en la
campana de Durham. La cepa 1
(Staphylococcus aureus coagulasa) si
presenta fermentación, la cepa 2 (Staphylococcus aureus lipasa) no.

• Caldo R.F. con concentración de nutrientes

En este lote de caldos rojo fenol fue sembrada una sola cepa, en nuestro caso fue E.
coli

1. Xilosa: presenta fermentación de gas

2 3 4 positivo el cual se observa en el tubo de
1 Durham. Cambio de pH negativo.
2. Lactosa: presenta fermentación de
gas positivo el cual se observa en el tubo
de Durham; los ácidos orgánicos
reaccionan con el indicador y acidifican el
medio.
3. Sacarosa: presenta fermentación de
gas positivo el cual se observa en el tubo
de Durham; los ácidos orgánicos
reaccionan con el indicador y acidifican el
medio.
4. Glucosa: esta cepa la fermenta en forma de gas y se observa en el tubo de
Durham (+); los ácidos orgánicos reaccionan con el indicador y acidifican el
medio.
• Medio O.F.

En este medio fue sembrada la cepa E. coli;

el tubo 1) estaba complementado con
1 2 lactosa 1%, el tubo muestra movilidad y
fermentación en toda la línea de siembra,
así como un coagulo en la parte superior del
tubo. No hubo un cambio notorio de color.

El tubo 2 tiene glucosa como nutriente al

5%, este presenta turbidez en la parte
media – superior del tubo; además de
mostrar movilidad en la línea de siembra.

• Agar Bilis Esculina

Este medio es especializado y utilizado

para el aislamiento e identificación
5 presuntiva de estreptococos. En este
caso las cepas utilizadas fueron E.
fecalis, Bacillus 235S y E. coli.
4 Fecalis y Bacillus hidrolizan la esculina lo
que provoca un oscurecimiento del
medio de cultivo y ennegrecimiento de
las colonias.

E. coli es un resultado negativo en ambos

6 parámetros ya que no es de la familia de
los Estreptococos.
 • Agar Almidón

En este agar en la reacción interviene la

enzima amilasa y dando como producto
final un contenido de glucosa el cual es
utilizado como nutriente de crecimiento
el cual entra a la vía de la glucolisis y
luego de procesar el nutriente forma
colonias muy evidentes y gruesas, no
cambia el color del medio, no hay
producción de H2S, la cepa Fecalis no
hay crecimiento alguno, la cepa
Pseudomona parece tener una
contaminación de las cepas.

• Prueba Catalasa En esta prueba se utiliza el peróxido de

hidrogeno para determinar si los
microorganismos tienen la capacidad de
utilizar la enzima catalasa. Si la prueba
resultaba positiva el microorganismo producía
burbujas e identifica entre géneros
Estafilococos y Estreptococos (prueba
negativa).

El microorganismo E. fecalis es catalasa

negativo, ya que no pertenece a ninguno de los
géneros y no produce la enzima catalasa.
Práctica 10: Pruebas Bioquímicas para enterobacterias
Para estas pruebas se utilizaron los 3 tipos de medios para aprovechar las propiedades
que cada uno nos brinda. La cepa que fue empleada para cultivarse en los medios es:
Enterobacter aerogenes.

AGAR INCLINADO
El agar TSI contiene 3 tipos de azúcares: glucosa, lactosa y
sacarosa y el indicador Rojo Fenol. La cepa fue sembrada en
el pico de flauta y en profundidad para poder observar todas
las características del microorganismo.
En este medio hubo una producción positiva de Glucosa el
cual se observa con el fondo del tubo en un color amarillo,
además Sacarosa positiva, también identificada con el color
amarillo en la superficie del tubo, pero no una producción de
Lactosa (ni prueba positiva/negativa). Además, tiene una
producción de gas positivo.
Esta prueba va en conjunto con la prueba Kligler y así es como
se da un resultado concreto, verificando ambas pruebas.

El medio Kligler solo contiene 2 azúcares a diferencia del TSI, en

este se excluye la sacarosa. La producción de Glucosa se
evidencia positiva debido al color amarillo del medio y la
Lactosa es un resultado negativo debido a que hubo un cambio
de color evidente del medio, aunque no muy perceptible, pero si
se observa antes de las horas de incubación, se hizo más
oscuro.
El resultado de ambas pruebas para el cultivo de la cepa es:

• Glucosa +
• Lactosa –
• Sacarosa +
• Producción H2S –
• Producción de gas +
 En la prueba de Citrato se debía observar una producción de
citrato mediante una cambio de coloración del pico de flauta.
Enterobacter aerogenes es prueba de citrato positiva gracias a la
producción de ácidos carboxílicos en el medio, el pico de flauta
cambio a una coloración azul rey oscuro.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias
poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido
tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato genera
progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en
presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que,
al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es
indicativo de la producción de citrato permeasa.

El medio FEA esta enriquecido con fenilalanina, la prueba consistía

en observar la producción o aprovechamiento del microorganismo
en este medio.
Se le debían agregar 4 – 5 gotas de reactivo de Fenilalanina sobre el
pico de flauta con suavidad para que el reactivo hiciera reacción, se
esperan unos minutos para observar la reacción:
Positivo: el pico de flauta cambiaba a color verde y también el
líquido de condensación.
Negativo: no hay cambio de color y una reacción de triptofanosa
negativo.
El resultado es: Triptofanosa -

Prueba LIA: el nutriente en el medio es la lisina y utiliza el indicador purpura de

bromocresol, la prueba resulto positiva en la descarboxilación de la lisina, como
producto final una amina (no hubo foto debido a que no hubo mucho cambio evidente).
CALDOS
En el caldo RM se encuentran de nutrientes
principales Glucosa y Fosfatos. La glucosa puede
ser metabolizada por los microorganismos, a
través de distintas vías metabólicas. Según la vía
utilizada, se originarán productos finales ácidos
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano,
podría ser reconocida por la adición de un
indicador como rojo de metilo, para revelar la
presencia de productos ácidos, y por la adición
de alfa naftol e hidróxido de potasio para
evidenciar la presencia de productos finales
neutros. La prueba dio positivo dado que se
acidificó el medio y dio un cambio de color a rojo.

En el medio Vogues Proskauer para que se

pueda leer los resultados completos se debía
primero seguir un procedimiento:

Adicionar gotas de KOH, α – naftol y dejarlo

reposar. Al igual que el caldo Rojo de Fenol el
medio VP cuenta con glucosa y fosfatos. La
coloración que debe adquirir el caldo se debe
a la oxidación del acetil – metil carbinol a
diacetilo el cual reacciona con la peptona del
medio para dar un color rojo.

En este caso la prueba resultó negativo por la evidente ausencia del anillo de color rosa
en la superficie.
En el medio Malonato hay una reacción enzimática competitiva
reversible donde el malonato actúa como un succinato análogo al
citrato en el ciclo de Krebs.

La prueba de malonato se basa principalmente en la capacidad que

tienen algunos microorganismos de utilizar como única fuente de
carbono el malonato de sodio y como fuente de nitrógeno al sulfato
de amonio.

La prueba de Malonato para enterobacterias dio un resultado +.

En la prueba liquida de Urea, se debe llevar a cabo una

reacción donde las bacterias hidrolizan la urea por medio de la
enzima ureasa, liberan amoníaco y dióxido de carbono. Estos
productos alcalinizan el medio de cultivo haciendo virar el
indicador rojo de fenol del medio del color amarillo al rojo y la
prueba sería positiva.

En el caso de Enterobacter aerogenes la hidrolización de la

urea no sucede y no hace que el indicador vire de color y el
caldo permanece de color amarillo.

Prueba Urea –
 En una prueba de nitratos donde la reacción es anaerobia los
nitratos son el aceptor terminal de e-. Donde el α – naftilamina
y ác. Sulfanilico hay una reducción de NO3 → NO2- y produce una
coloración roja indicando una prueba positiva. Una prueba
negativa es porque no hay cambio de color.

Las enterobacterias reducen a los NO3 → NO2- y además no

producen gas.

El resultado de esta prueba fue:

• Producción de gas – y Reducción Nitratos +

SEMISÓLIDOS

El medio MIO esta enriquecido con el nutriente ornitina y triptófano. Si la

bacteria descarboxila la ornitina (o no), si la prueba es positiva se
observa el fondo del tubo de color morado intenso. La prueba de
detección de Indol se lleva a cabo con la adición del reactivo de Kovacs,
si reacciona produciría un color rojo vino, si no, (nuestra prueba) el
medio se queda de color amarillo y es un resultado Indol -.

La prueba de movilidad debe evidenciar una turbidez en la línea de

siembra o en el fondo del tubo.

Enterobacter aerogenes da como resultado:

• Movilidad +
• Indol –
• Ornitina +
En el medio SIM se determinan la producción de H2S en
conjunto con un precipitado negro producto de la reacción entre
las sales férricas del medio y este, la prueba de Indol (reactivo
de Kovács) y si el microorganismo es capaz de presentar
movilidad en el medio.

Con el medio de cultivo MIO se puede observar que

Enterobacter no efectúa la deaminación del Triptófano, por lo
que en SIM también es producción de Indol negativa.
Si la bacteria tenía movilidad el tubo se puede apreciar con
cierta turbidez en el fondo y en la línea de siembra, sin embargo,
al no cambiar de color de amarillo a rosa y no observar un ppdo.
negro en él el resultado es negativo; en conjunto los resultados
son:

• S–
• Indol –
• Movilidad +
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Práctica 1
Durante la observación microscópica de las muestras de agua de suelo, se
identificaron diversos grupos de algas microscópicas (como diatomeas y euglenas) y
rotíferos, pero no a algún protozoo (rotífero Monogononta). La presencia de estos
organismos indica que el ambiente acuoso del suelo presenta condiciones adecuadas
de humedad, nutrientes y luz para sostener comunidades microbianas activas.

La diversidad observada puede estar relacionada con la riqueza de materia orgánica y

la estructura del microhábitat del suelo. Por ejemplo, la detección de algas verdes
sugiere una posible exposición a la luz, mientras que la presencia de protozoos como
amebas indica actividad bacteriana, ya que estos organismos se alimentan
principalmente de bacterias.

La observación de ciliados móviles sugiere un entorno acuático relativamente

oxigenado, ya que muchos de estos protozoos requieren oxígeno para vivir. La
variabilidad en formas y tipos de organismos también puede deberse a diferencias en
la composición del suelo (arcilloso, arenoso, orgánico) o en su uso (agrícola, natural,
contaminado).

Las aguas del suelo albergan comunidades microscópicas complejas, que juegan un
papel clave en procesos como la descomposición de materia orgánica, el ciclo del
nitrógeno y el control biológico de bacterias.

Además, las diferencias entre muestras sugieren que factores como la profundidad del
muestreo, la época del año y la vegetación circundante también influyen
significativamente en la composición de los microorganismos presentes.

Cuando la materia orgánica aumenta considerablemente en el agua las poblaciones

de microorganismos se multiplican y se rompe el balance que existe en la naturaleza.
Es entonces cuando se desarrolla una mayor cantidad de microorganismos que
pudieran no ser benéficos, apunta la especialista (Castillo, 2021).
Práctica 2
Los hongos son organismos microscópicos que viven en las plantas y en los animales.
La mayoría son organismos filamentosos y la producción de esporas es característica
de los hongos en general. Estas esporas pueden ser transportadas por aire, agua o
insectos. Cuando se expone al aire, las esporas dispersan el hongo de un lugar a otro.

A diferencia de las bacterias que son unicelulares, los hongos están compuestos de
muchas células y a veces pueden verse a simple vista. Bajo el microscopio, estos
aparecen como hongos delgados. En muchos hongos, el cuerpo consiste de:

• Raíces en forma de hilos que invaden los alimentos donde viven

• Un tallo que crece elevándose por encima del alimento y

• Esporas que se forman al final del tallo (Todo lo que debes saber de los hongos
en los alimentos, 2022).

Las muestras de alimentos contaminadas que se analizaron principalmente contienen

mohos, se concluyó esta conjetura gracias a que se observaron los esporangios
formados, tanto intactos como en liberación de las esporangiosporas.

Los géneros encontrados (Rhizopus, Penicillium, Alternaria y Geotrichum) suelen

aparecer en lugares húmedos y con poca luz. Las temperaturas altas les favorecen,
pero el frío no impide su crecimiento, por lo que incluso en el refrigerador pueden
proliferar. La proliferación de los hongos ya que se encuentran establecidos en el
alimento se suele dar con rapidez debido a la propagación y manipulación del mismo,
gracias a la liberación de las hifas que se establecen en profundidad del alimento, lo
que se observa en la superficie son las partes más externas del desarrollo del hongo,
si se eliminan las partes de la superficie, es muy probable que quede contaminación
en partes más internas debido a la profundidad y la extensión de las raíces de este, con
el afán de sobrevivir a los ambientes poco favorables para su crecimiento (Hongos en
los alimentos ¿son peligrosos?, 2024).
Práctica 3
En esta práctica se hizo distinción, diferenciación e identificación de bacterias tanto
Gram positivas como Gram negativas mediante diversas pruebas, tinciones y
observación a primera vista.

Las bacterias gram positivas son un tipo de microorganismos que destacan por la
composición única de su pared celular. Esta característica las hace sensibles a ciertos
antibióticos, como los betalactámicos, que interfieren con la síntesis de
peptidoglicano. Entre las características principales de las bacterias gram positivas se
incluyen:

• Una pared celular gruesa de peptidoglicano que retiene el colorante cristal

violeta.

• Presencia de ácidos teicoicos y lipoteicoicos, que contribuyen a la estabilidad

estructural y la adherencia a superficies.

• Falta de membrana externa, a diferencia de las bacterias gram negativas (Gram

positivas, 2023).

Las bacterias gram negativas constituyen un grupo diverso de microorganismos.

Estas bacterias habitan diferentes entornos, desde el suelo hasta el tracto
gastrointestinal del ser humano. Su característica distintiva es la presencia de una
membrana externa que las diferencia de las bacterias grampositivas. Esta membrana
las protege contra ciertos antibióticos, como la penicilina. Al deteriorarse, esta
membrana libera sustancias tóxicas llamadas endotoxinas, que contribuyen a la
gravedad de los síntomas en las infecciones por bacterias gram negativas (Rico, 2024).

Las bacterias Gram + y Gram – es posible catalogarlas como una u otra gracias a los
métodos de tinción de Gram, gracias al contenido de su pared celular y sobre todo la
prueba de KOH al 3%, la cual debe producir (o no) hebras dependiendo que
microorganismo fuera. Las bacterias Gram + adquieren una coloración morada o azul
marino y no forman hebras; las bacterias Gram – adquieren una coloración roja o rosa
y tiene una producción de hebras evidentes con la prueba de KOH.
Práctica 4
Se analizaron muestras de productos lácteos para observar la presencia de
lactobacillus y estreptococos respectivamente. Las bacterias lácticas son un grupo de
microorganismos grampositivos que pertenecen a los géneros Lactobacillus,
Lactococcus, Streptococcus y Leuconostoc. Estas bacterias son anaerobias
facultativas, lo que significa que pueden crecer en presencia de oxígeno o en su
ausencia, aunque suelen preferir aquellos ambientes que son pobres en oxígeno.

Estas desempeñan un papel indispensable en la producción de alimentos

fermentados. Su principal tarea es convertir los azúcares de los alimentos en ácido
láctico, lo que acidifica el medio y proporciona un ambiente desfavorable para que
crezcan microorganismos patógenos.

Las bacterias lácticas tienen varias características que las convierten en las más
indicadas para llevar a cabo este proceso de fermentación ya que toleran el ácido,
crecen en temperaturas normalmente ambiente, producen compuestos aromáticos y
sabores que contribuyen al perfil sensorial característico de los alimentos
fermentados además de poseer la capacidad para utilizar diferentes sustratos (la
lactosa, la glucosa, la fructosa y otros azúcares presentes en los alimentos) por ultimo
otra característica importantes es la formación de biopelículas las cuales las protegen
de condiciones adversas y ayudan a mejorar su tasa de supervivencia durante el
almacenamiento (¿Qué son las bacterias lácticas y para qué sirven?, 2023).

Los Lactobacillus y los Streptococcus presentes en las muestras analizadas se

encontraban en concentración normal y bajo los parámetros establecidos por las
normas de salubridad alimenticia, si estas bacterias hubieran estado en
concentraciones mayores se consideraría benéfico para el mismo producto si no era
fermentado. Si la concentración de bacterias lácticas estuviera en concentraciones
altas en un producto fermentado indicaría contaminación cruzada o un mal
almacenamiento, la prueba con azul de metileno permite observarlas y determinar el
estado del producto.
Práctica 5
Los medios de cultivo son un elemento básico en la materia de Microbiología, son
herramientas fundamentales para el crecimiento y la identificación de
microorganismos. Estos proporcionan los nutrientes necesarios (pueden incluir
carbohidratos, proteínas, sales minerales y vitaminas) para el crecimiento, la
diferenciación y la identificación de bacterias, hongos y virus, lo que los convierte en
una pieza fundamental para la microbiología.

Además de proporcionar nutrientes, los medios de cultivo también pueden contener

indicadores que permiten la identificación de diferentes tipos de microorganismos. Por
ejemplo, un medio de cultivo selectivo puede contener ciertos componentes que
permiten el crecimiento de una especie de bacterias específicas, mientras que inhiben
el crecimiento de otras especies. Los medios diferenciales, por otro lado, permiten
distinguir entre diferentes especies de microorganismos. Existen varios tipos de
medios de cultivo, cada uno con una función específica en el laboratorio, y se pueden
diferenciar en distintas categorías según su consistencia, función, origen. En el
laboratorio se clasificaron principalmente por su consistencia y función, ya que todos
son medios de origen sintético.

Los medios sólidos que fueron utilizados a lo largo del semestre en las prácticas son:

XLD, Sulfito de Bismuto (SB), Agar Salmonella – Shigella (SS), Desoxicolato, EMB,
ENDO, HE, Sal Manitol, T – 7 y Agar Chocolate

• Agar XLD

La degradación de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa, lactosa y sacarosa)

genera la producción de ácido haciendo virar el indicador (rojo fenol) de rojo a amarillo.
En este medio se incorpora la xilosa porque es prácticamente fermentada por todas
las enterobacterias con excepción de los microorganismos pertenecientes al género
Shigella. La lisina se incluye para aumentar la diferenciación de los microorganismos
pertenecientes al género Salmonella, ya que sin la lisina estos microorganismos
rápidamente fermentan la xilosa produciendo la acidificación del medio y no se
pueden diferenciar de otras especies no patógenas. Como la cantidad de este
carbohidrato es limitada, una vez que estos microorganismos lo consumen,
comienzan a utilizar la lisina lo cual produce la alcalinización del medio; este hecho se
evidencia porque el rojo fenol nuevamente vira a un color rojo. En el caso de los
coliformes lisina positiva, para prevenir la alcalización del medio por la utilización de
la lisina, se incorpora en el medio un exceso de lactosa y sacarosa. El medio también
tiene la capacidad de detectar la producción de H2S, a través del sistema indicador
tiosulfato de sodio y citrato férrico amonio. Cuando el microorganismo produce H2S se
observan colonias con el centro negro. Los microorganismos no patógenos
productores de H2S no descarboxilan la lisina; cuando están presentes estos
microorganismos la reacción ácida producida por la utilización de los carbohidratos
previene en ennegrecimiento de las colonias. El desoxicolato de sodio es utilizado
como un inhibidor de los microorganismos Gram positivos (Agar XLD, 2016).

• Agar Sulfito de Bismuto (SB)

Este medio de cultivo es una modificación de la fórmula de Wilson y Blair, quienes

pusieron de manifiesto la superior aptitud de este medio en relación a otros para el
aislamiento de Salmonella entérica serotipo Typhi a los que además superaba en
estabilidad y sensibilidad. En el medio de cultivo la peptona y el extracto de carne
proporcionan nitrógeno, vitaminas y minerales necesarios para el crecimiento de los
microorganismos. La dextrosa es una fuente de energía. El sulfato ferroso actúa como
indicador en la producción de sulfuro de hidrógeno, los microrganismos capaces de
producirlo se manifiestan con el centro de la colonia con un precipitado negro, que
puede dar lugar a tonalidades marrones más o menos oscuras e incluso negras.
También se puede reducir el bismuto a metal dando un brillo metálico alrededor de las
colonias correspondientes. El fosfato disódico actúa como buffer. El sulfito de bismuto
y el verde brillante inhiben conjuntamente a las bacterias Gram positivas y coliformes,
permitiendo al mismo tiempo el crecimiento abundante de las Salmonellas. El agar es
el agente solidificante. Es recomendable hacer un enriquecimiento previo al caldo
(Andrews, 2014).
 • Agar Salmonella – Shigella (SS)

El Agar Salmonella Shigella, también conocido como Agar SS, es un medio diferencial
y selectivo que inhibe el crecimiento de la mayoría de los coliformes y permite el
crecimiento de especies de Salmonella y Shigella a partir de muestras de heces, orina,
alimentos conservados y frescos. Agar Salmonella Shigella es una modificación del
Agar Desoxicolato y Citrato descrito por Leifson. Ewing y Bruner, quienes encontraron
que este agar tiene la ventaja de inhibir microorganismos coliformes Gram-positivos y
el swarming de Proteus spp., esto por el contenido de sales biliares, citratos y el verde
brillante. Sin embargo, permite el crecimiento de Salmonella spp. y Shigella spp. En el
medio de tiosulfato de sodio y el citrato férrico permiten la detección de bacterias
productoras de H2S tales como Proteus spp. y algunas cepas de Salmonella, las
cuales producen colonias con centro negro y halo claro. La diferenciación de las
Enterobacterias se logra por la incorporación de lactosa al medio, la cual proporciona
la fuente de carbohidratos. Los microorganismos que fermentan la lactosa producen
ácido, el cual en presencia del rojo neutro que es el indicador de pH, resultan en la
formación de colonias rosas o rojas. Los microorganismos no fermentadores de la
lactosa forman colonias incoloras. El agar bacteriológico se usa como agente
solidificante (Agar Salmonella Shigella, 2006).

• Agar Desoxicolato

Agar Desoxicolato Citrato es una modificación de la fórmula del Agar Desoxicolato de

Leifson y es ideal para la investigación de enterobacterias patógenas en alimentos
altamente contaminados. Es particularmente útil para aislar Salmonella y muchas
Shigella spp. Los organismos Gram-positivos, coliformes y muchos Proteus spp. son
altamente inhibidos por el aumento de la concentración de citrato de sodio y
desoxicolato de sodio. El citrato férrico ayuda en la detección de la producción de H2S.
La peptona de carne y el extracto de carne proporcionan nitrógeno, vitaminas,
minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. La lactosa es el carbohidrato
fermentable. El rojo neutro es un indicador de pH. El agar bacteriológico es el agente
solidificante. Se utiliza junto con el Caldo Bilis Tetrationato Verde Brillante (Cat. 1253)
como confirmación de Salmonella spp. Las bacterias que fermentan la lactosa forman
colonias rojas en presencia de rojo neutro. Las colonias que fermentan la lactosa
pueden tener una zona de precipitación de desoxicolato alrededor de ellas. Los no
fermentadores de lactosa aparecerán como colonias incoloras. Los productores de
H2S tendrán centros negros. Los tipos de Salmonella typhi, S. paratyphi y Shigella
producen colonias incoloras bien desarrolladas, mientras que los organismos
positivos a la lactosa como Escherichia coli son de color rosado a rojo (E., 2022).

• Agar EMB

El medio de cultivo combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para
obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras
especies de bacilos Gram negativos. Es nutritivo por la presencia de peptona que
favorece el desarrollo microbiano. La diferenciación entre organismos capaces de
utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por
los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una
amplia variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente solidificante. Muchas
cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo
metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada
o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. También, pueden crecer
especies de Candida y se observan como colonias rosadas y puntiformes; la siembra
en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus
spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que
Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas se observan como colonias de color
azul lavanda; esto puede ocurrir, aunque las cepas no sean capaces de acidificar a
partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus
membranas. En este medio se obtiene. además, un buen desarrollo de especies de
Salmonella y Shigella (Teague, 2010).
 • Agar ENDO

En 1904, Endo describió el desarrollo de un medio de cultivo para diferenciar entre

microorganismos fermentantes y no fermentantes de la lactosa. La fórmula original se
ha modificado ampliamente desde su introducción. Durante años el agar Endo ha sido
un importante medio para el examen microbiológico del agua potable y residual, los
productos lácteos y los alimentos; no obstante, el compendio actual de métodos
estándar para analizar estos elementos recomienda las formulaciones de otros
medios. El medio se utiliza aún en microbiología clínica y en otros sectores para el
aislamiento y la diferenciación de la familia Enterobacteriaceae. La selectividad del
agar Endo se debe a la combinación del sulfito de sodio con fucsina básica, lo cual
ocasiona la supresión parcial de los microorganismos gram-positivos. Los coliformes
fermentan la lactosa, produciendo colonias color rosa oscuro a rojizo con un brillo
metálico verdoso iridiscente y una coloración similar en el medio. Las colonias de
microorganismos que no fermentan la lactosa son incoloras o de color rosa pálido en
contraste con el fondo rosa claro del medio (Levin, 2013).

• Agar HE

En el medio de cultivo la proteasa peptona y el extracto de levadura aportan los

nutrientes para el desarrollo microbiano. La lactosa, sacarosa y salicina son los
hidratos de carbono fermentables. Las sales biliares inhiben el desarrollo de la flora
Gram positiva, de algunos coliformes y de la mayoría de las cepas de Pseudomonas
spp. El azul de bromotimol y la fucsina ácida son los indicadores de la fermentación de
hidratos de carbono, mientras que el citrato de hierro actúa como indicador de la
formación de SH2 a partir del tiosulfato debido a que se forma sulfuro de hierro,
compuesto de color negro. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar
es el agente solidificante. El desarrollo de Shigella spp. es adecuado debido a que la
inhibición de este microorganismo por las sales biliares está disminuida por la adición
de cantidades relativamente elevadas de proteasa peptona y de hidratos de carbono,
así como la baja toxicidad de los indicadores presentes en el medio de cultivo (S.,
2021).

• Agar Sal Manitol

El Agar Manitol-Sal es usado para el aislamiento selectivo e identificación presuntiva

de Staphylococcus a partir de diversos materiales, incluyendo muestras clínicas.
Cumple con las especificaciones de The United States Pharmacopeia (USP) para
realizar pruebas de Microbial Limit Test1. La fermentación del manitol permite la
diferenciación, y la selectividad se logra por la tolerancia a altas concentraciones de
sal. Ambas características son propias de Staphylococcus aureus. Koch en 1942
reporta que Staphylococcus tienen tolerancia a altas concentraciones de sal2.
Estudios posteriores realizados por Chapman concluyen que la adición de cloruro de
sodio en concentración de 7.5% al agar manitol con rojo de fenol, da como resultado
un medio de cultivo eficiente en el aislamiento de Staphylococcus coagulasa
positivos3. Las peptonas y el extracto de carne aportan a este medio de cultivo los
nutrientes esenciales necesarios. La concentración de cloruro de sodio al 7.5% inhibe
el desarrollo de muchas otras bacterias, permitiendo el desarrollo selectivo de
Staphylococcus, los que pueden identificarse presuntivamente según la fermentación
del manitol. Cuando ocurre esta fermentación se observa un viraje del indicador rojo
de fenol hacia amarillo, debido a la caída del pH en el medio de cultivo. El Agar Manitol
Sal permite un aislamiento selectivo de Staphylococcus aureus. Las colonias de S.
aureus presentan buen desarrollo, rodeadas de zonas amarillas (USP, 2021).

• Agar T – 7

Medio diferencial para la detección rápida de E. coli y coliformes en muestras de aguas

y alimentos. Medio diferencial, aunque poco selectivo, para la colimetría de aguas por
el método de Filtración de Membrana (MF). Presenta la ventaja sobre el ENDO de una
muy superior recuperación de coliformes totales, aunque aparezcan muchos falsos
positivos (en el ENDO lo que abundan son los falsos negativos). El Agar Tergitol 7 es un
medio de cultivo selectivo y diferencial diseñado para favorecer el crecimiento de
bacterias coliformes Gram negativas, como E. coli, e inhibir el crecimiento de
microorganismos Gram positivos. Contiene Tergitol 7, un detergente no iónico que
actúa como agente selectivo, así como lactosa como fuente de carbono fermentable y
un indicador de pH que permite la detección visual de la fermentación de lactosa
(Tergitol 7 agar, s.f.).

• Agar Chocolate

Agar Chocolate consiste en un medio enriquecido y no selectivo para cultivo de

bacterias sensibles y exigentes con complemento VX de tal forma que favorece el
crecimiento de diversos patógenos fastidiosos como Haemophilus spp. y Neisseria
spp. aislados de materiales clínicos nobles (LCR, aspirados invasivos) o no (sangre,
secreciones) entre otros. La adición de bacitracina al medio facilita el desarrollo de
especies como Haemophilus spp., promoviendo ligera inhibición sobre algunos
microorganismos de la microbiota. Indicado para la investigación clínica de
microorganismos fastidiosos en muestras de origen noble y en muestras de
secreciones. Carpenter y Morton describieron un medio mejorado para el aislamiento
del gonococo en 24 horas. La eficacia de este medio, Agar GC complementado con
hemoglobina y concentrado de levadura, se demostró en un estudio de doce medios
utilizados en la altura para el aislamiento de este microorganismo. La BBL® mejoró el
medio sustituyendo el concentrado de levadura por el complemento de
enriquecimiento IsoVitaleX Enrichment®, un complemento definido químicamente,
desarrollado especialmente para auxiliar en el crecimiento de gonococos, aunque se
aplique ampliamente a otros microorganismos como, por ejemplo, el Haemophilus
spp. y Streptococcus pneumoniae (Monteiro, 2019).
Práctica 6
Una columna de Winogradsky es un dispositivo de laboratorio diseñado para cultivar
diversas comunidades de microorganismos para la investigación científica.
Desarrollada por el microbiólogo ruso Sergei Winogradsky en la década de 1880, esta
innovadora columna simula diversas condiciones ambientales mediante la
superposición de materiales como barro, periódico y yemas de huevo. Estas capas
crean zonas distintas con diferentes niveles de oxígeno y azufre, proporcionando
fuentes de nutrientes únicas que apoyan el crecimiento de diferentes
microorganismos. Este ecosistema autónomo permite la observación de las
interacciones microbianas, ya que los productos de desecho de un tipo de bacteria a
menudo sirven como nutrientes para otras.

Para crear una columna de Winogradsky, normalmente se llena un recipiente

transparente con una mezcla de tierra y otros materiales, lo que permite que las
bacterias anaeróbicas florezcan en la parte inferior mientras que las bacterias
aeróbicas prosperan cerca de la parte superior. Con el tiempo, se desarrollan capas
coloreadas, lo que indica la presencia de varias bacterias, como especies oxidantes
de azufre y oxidantes de hierro, así como algas y cianobacterias que dependen de la
luz solar para obtener energía. El diseño de la columna se puede adaptar con
componentes adicionales, como fertilizantes u otras sustancias, para explorar
diferentes dinámicas microbianas. Este experimento práctico no solo mejora la
comprensión de la ecología microbiana, sino que también ilustra procesos biológicos
fundamentales como el ciclo del nitrógeno y la quimiosíntesis (Sheposh, 2024).

La muestra de agua y tierra que e equipo utilizó como medio para desarrollar la
columna no fue la más optima para hacerlo, ya que contaba con poca población
microbiana, así como de sedimentos y luego de pasado el tiempo de incubación no era
posible observar crecimiento alguno de bacterias, el único crecimiento que fue
observado fue el de los fotosintetizadores, que suelen comenzar a crecer en las capas
superiores del sedimento. Estos microorganismos fotosintéticos se componen en gran
medida de cianobacterias, que producen oxígeno y aparecen como una capa verde o
marrón, la cual era muy evidente en el tercio superior del envase y en una capa muy
gruesa, pero fuera de este grupo de microorganismos el ambiente, y el lugar de toma
de la muestra no era apto para el desarrollo de una gama más amplia de
microorganismos.

Práctica 7:
El crecimiento de un microorganismo depende del medio de cultivo y de los factores
ambientales que hay en ese medio, a saber: temperatura, presión osmótica e
hidrostática, y pH.

• Temperatura

Controla tanto la tasa o velocidad de crecimiento de una población microbiana como

el metabolismo interno de las células. Puesto que los microorganismos son
prácticamente todos unicelulares, la temperatura de las células refleja la del medio
ambiente. Para cada microorganismo se define un grupo de 3 temperaturas: las
temperaturas cardinales, dentro de las cuales se desarrolla su actividad.

Hay una temperatura mínima, por debajo de la cual no puede crecer. Otra temperatura
máxima, por encima de la cual no puede crecer. Y una temperatura óptima donde se
da la mayor capacidad de crecimiento del microorganismo (está más cerca de la
máxima que de la mínima).

• Presión osmótica

Algunos microorganismos cuando son expuestos a un incremento en la osmolaridad

de su medio de crecimiento, responden elevando la tensión osmótica interna
consiguiendo con ello evitar la perdida de agua. El incremento se debe a la
acumulación de moléculas osmóticamente activas ya sea de origen endógeno o
exógeno. Este mecanismo regulatorio se le conoce como osmorregulación y a los
microorganismos que disponen de el se les llama osmotolerantes. Las moléculas
involucradas en el balanceo osmótico se denominan osmoreguladores,
osmoprotectores o agentes para el balanceo osmótico, e incluyen sustancias
orgánicas como son aminoácidos, azucares, polioles y bioquímico.

• Presión hidrostática

La presión hidrostática afecta a la fisiología y a la bioquímica de los microorganismos.

La mayoría de los microorganismos que viven en ambientes no extremos no pueden
tolerar altas presiones. Esto es debido a que esa alta presión genera un aumento de la
viscosidad del citoplasma, bajada de la capacidad enzimática de unirse a sus
respectivos sustratos, además de interferir en la división celular. La célula puede
alargarse, pero no forma el tabique transversal, así que la célula crece, pero no puede
dividirse.

• pH

Es un parámetro crítico para el crecimiento microbiano. Los microorganismos solo

toleran cambios mínimos del pH del medio en el que viven. Generalmente viven a pH
neutro. Las bacterias toleran variaciones ligeramente acidas (pH=6,5). Los hongos
permiten ambientes un poco más ácidos (pH=5’5-6’5).

El pH interno de la célula es ligeramente superior al pH del medio siempre. De esta

forma se mantiene la membrana energizada con los protones en el exterior y se puede
generar una fuerza protón-motriz. Los daños que produce en la estabilidad celular las
variaciones bruscas de pH son de dos tipos:

El pH daña la permeabilidad de la membrana plasmática y produce inhibición de la

actividad enzimática y de los sistemas de transporte. Durante la endosporulación, uno
de los pasos era una bajada del pH interno, lo que ralentizaba el metabolismo celular.

Variaciones bruscas de pH alteran el estado iónico de los solutos a transportar.

• Oxígeno

Sobre la base de la necesidad de oxígeno, las bacterias se clasifican en tres grupos

Aerobio: El oxígeno es estrictamente necesario para el crecimiento de estas bacterias.
Estos también se denominan aerobios obligados debido al requerimiento de oxígeno
para el crecimiento. Ej.: Pseudomonas aeruginosa.

Anaerobios facultativos: Son el grupo de bacterias que pueden crecer tanto en

presencia como en ausencia de oxígeno. La mayoría de las bacterias patógenas son
anaerobias facultativas. Ej.: E. coli.

Anaerobios: Estos también se conocen como anaerobios obligados, ya que no pueden

crecer en presencia de oxígeno en el medio ambiente. Ej.: Clostridium tetani.

Aparte de estos, hay otro grupo llamado microaerófilo que crece en presencia de una
pequeña cantidad de oxígeno. Ej.: Helicobacter pylori.

Sobre la base del tipo bacteriano, es necesario mantener el contenido de oxígeno para
adquirir un crecimiento óptimo.

Práctica 8:
El crecimiento de una población bacteriana puede ser entendido desde diferentes
perspectivas y de acuerdo a éstas se puede llegar a determinar la medida del
crecimiento mediante diversas metodologías. Para algunos, el crecimiento es la
capacidad para multiplicarse que tienen las células individuales, esto es iniciar y
completar una división celular. De esta forma, se considera a los microorganismos
como partículas discretas y el crecimiento es entendido como un aumento en el
número total de partículas bacterianas. Para otros, el crecimiento implica el aumento
de los microorganismos capaces de formar colonias debido a que sólo se tiene en
cuenta el número de microorganismos viables, esto es capaces de crecer
indefinidamente.

Para los fisiólogos bacterianos, bioquímicos y biólogos moleculares una medida del
crecimiento es el incremento de biomasa. Para ellos, la síntesis macromolecular y un
incremento en la capacidad para la síntesis de los componentes celulares es una
medida del crecimiento. Para este grupo la división celular es un proceso esencial pero
menor que rara vez limita el crecimiento, ya que lo que limita el crecimiento es la
capacidad del sistema enzimático para utilizar los recursos del medio y formar
biomasa. El recuento en placa es uno de los métodos más utilizados para determinar
cuál es el número de microorganismos viables en un medio líquido.

Del método de recuento en placa se dividen dos variables muy utilizadas que son:

- El recuento en placa por siembra en profundidad: que consiste en añadir medio de

cultivo fundido y enfriado a 50ºC sobre placa de Petri que contiene una cantidad
determinada de la muestra diluida. Es un método generalmente utilizado para el
recuento de microorganismos anaerobios facultativos o microaerófilos.

- El recuento en placa por siembra en superficie que consiste en la siembra de un

volumen conocido de la dilución de la muestra sobre la superficie de un medio de
cultivo en placa Petri. Generalmente se utiliza esta técnica para el recuento de
bacterias aerobias (S. J. A., 2002)

Práctica 9:
Muchos microorganismos, como las bacterias, los hongos y las arqueas, son
incapaces de absorber ciertas moléculas para utilizarlas en el crecimiento, ya que sólo
las pequeñas moléculas solubles pueden pasar a través de sus membranas. Estos
microorganismos secretan exoenzimas, que están activas fuera de las células, con el
fin de descomponer varias moléculas para que puedan ser ingeridas más fácilmente.

El principal tipo de organismos que utilizan exoenzimas son los osmótrofos. Los
osmótrofos son organismos, principalmente microorganismos, que absorben
nutrientes de su entorno por ósmosis. Un tipo más específico de osmótrofo es la
lisotropía, que es donde se secretan exoenzimas para descomponer los nutrientes con
el fin de poder absorberlos por ósmosis.

Las exoenzimas son un componente vital para la supervivencia de muchos

microorganismos, desde las exoenzimas fúngicas dentro del suelo que degradan la
materia vegetal, hasta las exoenzimas producidas a partir de patógenos para promover
su infección.

Las exoenzimas tienen una serie diversa de objetivos y existen muchos tipos diferentes
para degradar la mayoría de los tipos de materia orgánica. Algunos ejemplos de
exoenzimas comunes incluyen proteasas, amilasas, xilanasas, pectinasas, celulasas,
quitinasas, manosas, ligninasas y lipasas.

Todos estos son muy importantes para el mantenimiento de la biosfera. La materia

orgánica vegetal y animal se descompone en el suelo por los osmótrofos, a través de
la secreción de diversas exoenzimas hidrolíticas. Todos los diferentes componentes
del tejido vivo necesitan ser degradados por diferentes enzimas, por lo que la
diversidad de organismos dentro del suelo que secretan estas enzimas es muy
importante.

Las moléculas orgánicas como las proteínas, los carbohidratos y los lípidos necesitan
ser degradadas extracelularmente y son vitales para el crecimiento de muchos
microorganismos y son importantes fuentes de energía para el metabolismo celular
(Davis, 2020).

Proteinasas (también conocidas como peptidasas o proteasas): Estas exoenzimas

catalizan la proteólisis, la descomposición de las proteínas en polipéptidos más
pequeños o aminoácidos individuales. Las proteinasas son indispensables para que
muchos microorganismos utilicen las proteínas como fuente de nitrógeno.

Lipasas: Actúan específicamente sobre los lípidos, descomponiendo las moléculas

complejas de grasa en ácidos grasos más simples y glicerol. Las lipasas desempeñan
un papel crucial en la digestión y absorción de los lípidos alimentarios en muchos
organismos.

Carbohidrasas: Incluyen una amplia gama de exoenzimas que pueden descomponer

los hidratos de carbono en unidades más pequeñas. Las subcategorías incluyen las
celulasas, que actúan sobre materiales celulósicos, y las amilasas, que actúan sobre
el almidón.

Nucleasas: Estas enzimas pueden degradar los ácidos nucleicos rompiendo los
enlaces fosfodiéster entre las subunidades de nucleótidos. En contextos
microbiológicos, suelen funcionar en los procesos de reparación o replicación del ADN
(Hulatt, s.f.).

Práctica 10:
Las pruebas bioquímicas son herramientas fundamentales en microbiología para la
identificación y caracterización de microorganismos, especialmente bacterias,
mediante el análisis de sus capacidades metabólicas y enzimáticas. Estas pruebas
permiten detectar la fermentación de azúcares, la producción de gases, ácidos,
enzimas específicas como catalasa, oxidasa o ureasa, así como otros productos
metabólicos. Su aplicación es amplia, abarcando desde el diagnóstico clínico hasta el
control de calidad en alimentos, agua y productos farmacéuticos. Gracias a estas
pruebas, es posible diferenciar especies bacterianas, determinar su comportamiento
metabólico y orientar tratamientos adecuados.

Prueba de la Catalasa: La catalasa es una enzima que cataliza la descomposición del

peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. La prueba se utiliza para comprobar la
presencia de la enzima catalasa que se encuentra en la mayoría de las bacterias
aerobias y anaerobias facultativas que contienen el citocromo oxidasa. La principal
excepción son los estreptococos (Streptococcus). Originariamente, esta prueba era
utilizada para diferenciar entre los siguientes géneros: Streptococcus (catalasa -) de
Micrococcus (catalasa +) y/o Staphylococcus (catalasa +). Bacillus (+) de Clostridium
(-). Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de las
especies C. pyogenes y C. haemolyticum, ambas -) de Erysipelothrix (-).

Prueba de Citrato: Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de

utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única
fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio.
Entre las enterobacterias estas características se dan en los siguientes géneros:
Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella. Sin
embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son
incapaces de crecer con esos nutrientes. Se cultiva el microorganismo en agar citrato
de Simmons. Este medio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes
de carbono y de nitrógeno respectivamente, y azul de bromotimol, como indicador de
pH. Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este
medio y liberarán iones amonio lo que, junto con la eliminación del citrato (ácido),
generará una fuerte alcalinización del medio que será aparente por un cambio de color
del indicador de pH, de verde a azul.

Prueba de Fenilalanina: Esta prueba determina la capacidad de un organismo para

desaminar el aminoácido fenilalanina en ácido fenilpirúvico por la actividad de la
enzima fenilalanina desaminasa, con la consiguiente acidez resultante. Esta actividad
enzimática es característica de todas las especies del género Proteus y del grupo
Providencia por lo que se usa para separar ambos géneros de otras enterobacterias. El
ácido fenilpirúvico puede detectarse por la adición de un reactivo (cloruro férrico al
10%) Se cultiva el microorganismo en agar fenilalanina sembrando la superficie del
slant con abundante inóculo e incubando durante 24 horas a.37 ºC. Seguidamente se
añade 4-5 gotas de la solución de cloruro férrico al 10% de manera que inunde todo el
medio inclinado. La presencia de ácido fenilpirúvico (prueba positiva) se manifiesta por
la aparición de un color característico verde oscuro o verde-azulado.

Prueba de Indol: El indol es uno de los productos de degradación del aminoácido

triptófano. La presencia de la enzima triptofanasa en la bacteria provoca la hidrólisis
del aminoácido y su desaminación, produciendo indol, ácido pirúvico y amoníaco. Si
la bacteria posee la enzima triptofanasa, al añadir al medio las gotas del reactivo de
Kovacs, se producirá un anillo de color rojo cereza en la superficie del caldo y la prueba
será considerada positiva. Si esto ocurre después de 24 horas, la prueba se considera
completa, pero si es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.
Por ello es conveniente hacer siempre la prueba no en el tubo incubado sino en una
porción de unos 2 ml que se retira de él asépticamente.

Prueba de Lactosa: Esta prueba se usa para diferenciar entre las enterobacterias en
general y el grupo de los coliformes. Se trata por tanto de una prueba de gran
importancia debido a que los coliformes se utilizan como organismos indicadores de
contaminación fecal en análisis, sobre todo, de aguas. En bacteriología se define el
grupo de organismos coliformes como los "bacilos Gram negativos, aerobios y
anaerobios facultativos, no formadores de esporas y que fermentan la lactosa con
formación de gas a 37 ºC en 48 horas". No se trata de un grupo taxonómico e incluye
una gran variedad de bacterias, la mayoría de ellas de origen intestinal. Una manera
sencilla de realizar la prueba de la fermentación de la lactosa en enterobacterias es
sembrar el microorganismo en agar McConkey, ya que este medio, además de
selectivo frente a bacterias no entéricas, es diferencial ya que contiene lactosa y un
indicador de pH (rojo neutro). En agar McConkey las bacterias Gram positivas ven
inhibido su crecimiento debido a la presencia de sales biliares y cristal violeta y sólo
crecerán las enterobacterias, pero entre ellas las que fermenten la lactosa (coliformes)
liberarán productos ácidos que producirán un cambio de pH que se detectará gracias
al rojo neutro. Las colonias lactosa (+) aparecerán de color rojo o violeta contrastando
con la coloración amarillenta de las colonias lactosa (-).

Además de emplear el agar McConkey para la detección de bacterias coliformes por la

producción de lactosa, se emplean pruebas confirmativas un poco más certeras como
lo son la prueba TSI y Kligler, las cuales al estar compuestas por azucares principales
de utilización en procesos de obtención de energía por las bacterias (o no) te dan un
resultado confirmatorio.

Prueba TSI: es un medio destinado a la identificación de enterobacterias mediante la

detección rápida de la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa, así como por la
producción de sulfuro de hidrogeno. La degradación del azúcar con formación de
ácido, se detecta por el viraje a amarillo en el indicador, mientras que la alcalinización
vira a púrpura.

En el caso de que solo se degrade la glucosa, la producción del ácido es débil, y se

evapora en la superficie, permitiendo la re-oxidación del indicador, con lo que queda
una superficie alcalina (roja) y un fondo amarillo (ácido). Si se degrada la lactosa o la
sacarosa, la producción de ácido es intensa y todo el medio queda amarillo. La
producción de gas se detecta por la formación de burbujas y, eventualmente, un
agrietamiento del agar. La producción de sulfhídrico, ya sea a partir del tiosulfato o de
los aminoácidos azufrados de las peptonas, se manifiesta por la formación de
precipitados negros SFe al reaccionar con las sales de hierro. El medio debe usarse en
tubos inclinados, con fondo abundante y con posibilidad de sembrar en estría en la
superficie. Es recomendable usar tubos que incluyan torunda de algodón, para
permitir la re-oxidación del indicador. En caso de utilizar tapones roscados, estos
deben aflojarse para permitir la entrada de aire.

Prueba Kligler: En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los

nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los
hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para
la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones
Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de
color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcares se
producen ácidos que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al
color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno
el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro
de color negro.

En conjunto, la siembra en agar MacConkey, con las pruebas confirmativas TSI y Kligler,
permiten dar una respuesta más certera de si el microorganismo en estudio es un
coliforme o solo emplea esos azucares como una fuente energía para su crecimiento y
proliferación o si es un patógeno del cual se deba tener precaución.

Prueba Manitol: Sirve para detectar si los gérmenes son capaces de fermentar el
manitol liberando productos ácidos que serán detectados gracias al indicador rojo de
fenol que cambiará a color amarillo. Para esta prueba el medio manitol movilidad
incluye 7,5 g/l de D-Manita. Bacterias manitol (-) son, dentro de las enterobacterias,
Proteus mirabilis, Proteus vulgaris y Shigella dysenteriae. Entre las bacterias de
importancia clínica, la prueba del manitol sirve para diferenciar Staphylococcus
aureus (+) de Staphylococcus epidermidis (-).

Prueba de Movilidad: Sirve para determinar si un organismo es móvil o inmóvil. Las

bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos que se encuentran
principalmente entre los bacilos, aunque existen algunas formas de cocos móviles. El
medio manitol movilidad permite la realización de esta prueba gracias a ser semisólido
ya que presenta solamente 3,5 g/l de agar. En estas condiciones, las bacterias móviles
producirán un enturbiamiento homogéneo del medio debido a la distribución aleatoria
de los microorganismos. Por el contrario, las bacterias inmóviles permanecerán en la
misma línea de la picadura en que se sembraron. Entre las enterobacterias, la
movilidad nos permite diferenciar el género Klebsiella (-) de las restantes que suelen
ser movilidad (+). Dentro del género Bacillus, nos permite diferenciar B. anthracis (-) de
otras especies generalmente (+).

Prueba de la reducción de Nitratos: Sirve para determinar la capacidad de un

organismo de reducir el nitrato en nitritos. Para ello, el medio manitol movilidad
incorpora 1 g/l de nitrato potásico y para revelar la presencia de nitritos después de su
incubación se añaden los reactivos A y B de Griess-Ilosvay en cantidades iguales (1ml
aprox.). Un cambio de color (rojo) dentro de los 30 seg indica prueba completa con
resultado positivo. Si no cambia de color, se agrega directamente al tubo una pizca
(unos 20 mg) de polvo de cinc purísimo, totalmente exento de nitratos o nitritos, y se
observa el cambio de color durante otros 30 seg, al cabo de los cuales se realiza la
interpretación final. Las enterobacterias son generalmente nitratos (+). Esta prueba se
utiliza principalmente para diferenciar entre sí determinadas bacterias de los géneros
Haemophylus y Neisseria.

Prueba de la Oxidasa: Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas

oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromo
oxidasa. Los citocromos son enzimas que forman parte de la cadena de transporte de
electrones en la respiración aeróbica, transfiriendo electrones al oxígeno, con la
formación de agua. Por lo general, el sistema citocromo oxidasa sólo se encuentra en
los organismos aerobios, algunos anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en
algún microaerófilo (Vibrio fetus), pero los anaerobios estrictos carecen de actividad
oxidasa. Asimismo, la presencia de oxidasa va ligada a la producción de catalasa, ya
que ésta degrada el peróxido de hidrógeno que se produce como consecuencia de la
reducción del oxígeno y cuya acumulación es tóxica. La prueba de la oxidasa se usa
sobre todo para: Identificar todas las especies de Neisseria (+), y diferenciar
Pseudomonas de los miembros oxidasa negativos de las enterobacterias. El reactivo
de la oxidasa más recomendado es la solución acuosa al 1% de diclorhidrato de
tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de Kovacs). Es menos tóxico y mucho más
sensible que el correspondiente compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod),
pero es más caro. Este reactivo tiñe las colonias oxidasa positivas de color lavanda que
vira gradualmente a púrpura-negruzco intenso.

Prueba del Rojo de Metilo/y Voges-Proskauer: Estas dos pruebas forman parte del
IMViC de las colimetrías y permiten la diferenciación dentro de las enterobacterias del
grupo coli y aerógenes. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán
la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aeróbicamente, consumiendo
rápidamente el oxígeno del medio, para, en segundo lugar, continuar metabolizándola
por vía anaerobia (fermentación). Ésta puede ser de dos tipos: Fermentación ácido
mixta: La realizan las bacterias del grupo de E. coli y los productos finales son ácidos
orgánicos (ácidos fórmico, acético, láctico y succínico) que provocan un fuerte
descenso del pH inicial del medio. Puede detectarse por el viraje del indicador de rojo
de metilo que permanece amarillo por encima de pH 5,1 y rojo por debajo de 4,4.
Fermentación butilén glicólica: La realizan las bacterias del grupo Klebsiella
Enterobacter (antiguo aerógenes). Los productos finales son compuestos neutros
como el butaneidol y el etanol, produciéndose acetoína como intermediario que podrá
ser detectada añadiendo al medio KOH (reactivo A de Voges-Proskauer) y α-naftol
(reactivo B de Voges-Proskauer) que reaccionarán con este compuesto produciendo
un color rojo característico. La prueba consiste en comprobar si el microorganismo en
estudio fermenta la glucosa con producción de ácidos o vía ácido mixta. Para la
realización de estas dos pruebas se cultiva el microorganismo en caldo RM-VP (medio
de Clark y Lubs) y se incuba a 37 º C durante un periodo 24-48 horas. Pasado este
tiempo, se separa el cultivo en dos porciones de unos 2 a 5 ml que servirán para cada
uno de los dos ensayos: Rojo de Metilo: A uno de los tubos se le añade unas gotas (4-
5) de solución indicadora de Rojo de Metilo. Se agita ligeramente para homogeneizar y
se observa la coloración. Se considera positiva si vira al rojo y negativa si permanece
amarillo. Voges-Proskauer: A la otra porción de cultivo se le añade: 0,6 ml del Reactivo
A de Voges-Proskauer (α-naftol al 5% en alcohol etílico absoluto). El medio adquiere
un aspecto lechoso. 0,2 ml del Reactivo B de Voges-Proskauer (KOH 40%). Desaparece
el aspecto lechoso y se agita fuertemente. Si la prueba es positiva, transcurridos 10
minutos desde la adición de los reactivos, aparecerá un color rosado-violáceo, más o
menos intenso, que se inicia en la parte superior del tubo. El cambio de color nos indica
que la acetoína se ha oxidado pasando a diacetilo. Si la prueba es negativa no aparece
coloración alguna.

Prueba de la Ureasa: Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea

formando una molécula de dióxido de carbono y dos moléculas de amoniaco por
acción de la enzima ureasa. Esta actividad enzimática es característica de todas las
especies de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este género de otras
enterobacterias que dan negativo o positivo retardado. Se cultiva el microorganismo
en slant en agar urea de Christensen. Este medio se complementa después del
autoclavado con 50 ml/l de urea. Ésta será degradada por aquellos microorganismos
capaces de producir la enzima ureasa. Esta degradación produce amoniaco que hará
variar el color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así de manifiesto la
actividad ureasa (UPGC, s.f.).

La amplia gama que se tiene de pruebas bioquímicas para la detección e identificación

de estos microorganismos permite tener todas las pruebas confirmativas de que
especie se esta tratando mediante los procesos de utilización de los diversos
sustratos, medio ambiente y condiciones que les son brindadas, si estas pruebas son
estudiadas y puestas en practica con regularidad es fácil que los diferentes resultados
que cada prueba arroja sean comprendidos con mayor facilidad y no solo que se sepan
porque deben, si no que sean un modo de fácil identificación y acercamiento a estas
técnicas.
CONCLUSIONES
La presencia de Navículas en la muestra de agua analizada evidencia la contaminación
de la misma y que debe ser descartada al instante.
Los reservorios de energía de las Navículas se encuentran en el centro del cuerpo
alargado en los cloroplastos (principalmente clorofila a y b)
La forma característica de canoa, alargada de los extremos y ancho del centro demás
de su color amarillo – ocre da la facilidad de identificar a una navícula en cuanto es
observada.
Las diatomeas son un grupo de algas de fácil identificación para el grupo de las
Chrysophytas por su forma peculiar y pigmento amarillo característico que es
reconocible en muestras de agua con materia orgánica.
Se les considera como organismos indicadores de contaminación en un medio
acuático.
Se utilizan como excelentes indicadores de las condiciones del agua en donde viven
(calidad del agua, concentración de nutrientes, acidez en el agua, contaminación,
metales pesados, etc.).
Las diatomeas se utilizan para evaluar el cambio climático a través de las condiciones
ambientales.
La posterior desecación de las diatomeas en el suelo es de gran utilidad en el sector
agrícola como nutriente en suelos.
Euglena es de fácil reconocimiento gracias al “ojo” rojo que posee, a su color verde muy
intenso y vivo que posee, a la carencia de pared celular y por tanto a la forma irregular
que la caracteriza.
El “ojo” rojo de Euglena le permite tener una dirección de hacia dónde se encuentra el
alimento beneficioso para su crecimiento y les brinda movimiento.
El rotífero de clase Monogononta que fue encontrado es típico de aguas frescas, como
estanques y aguas residuales que permanecen estancadas luego de su liberación,
siendo ricas en nutrientes para su crecimiento.
Los rotíferos de esta clase cuentan con un mantrax, el cual les permite digerir el
alimento que consumen para su crecimiento.
Los rotíferos cuentan con una corona de cilios la cual les da movilidad y capacidad de
abrirse paso dentro del medio donde se encuentren.
En un alimento contaminado de moho no es recomendable quitarle la parte que tenga
moho y consumir el resto, ya que los hongos por su medio de reproducción, instauran
las raíces de los esporangios en las profundidades de este alimento o superficie, por lo
que la parte que se observa es solo una mínima parte del cuerpo completo del hongo
y si se hace esto igual se estaría consumiendo algo contaminado.
Rhizopus tiene la capacidad de proliferar con varios esporangios al mismo tiempo
desde la misma raíz si el medio es rico en nutrientes y le brinda el ambiente óptimo
para hacerlo.
Penicillium es fácil de identificar en las muestras por su característica forma de
escobilla y el medio en el que se desarrolla (muestras alimenticias en este caso).
Alternaria al igual que Penicillium pertenecen al grupo de hongos mitospóricos,
caracterizados así por ser de tipo imperfecto; por la falta de quitina y tener una
reproducción asexual.
El hongo Geotrichum también perteneciente al grupo de hongos mitospóricos tiene la
característica particular de formar cadenas largas, que asemejan un tren y sus
vagones, porque se logra apreciar una leve separación entre cada uno de los
componentes de la cadena, esto se debe a su tipo de reproducción por Talosporas.
El género Candida que se logró observar fue identificado con rapidez gracias a las
clamidosporas de este tipo de hongo y motivo por el cual pertenece al grupo
Ascomycetos, los cuales parecen estar en un saco grueso
Las bacterias Gram+ poseen una pared celular gruesa, conformado en un 90% de
peptidoglicanos y un 10% de ácido teicoicos.
Las bacterias Gram+ adquieren un color violeta en la tinción diferencial.
Con la prueba de KOH al 3% las bacterias Gram+ no presentan formación de hebras
debido a la gran barrera que se tiene en la pared celular para que esta sea
descompuesta.
Las bacterias Gram- tienen una pared celular delgada compuesta en su mayoría por
lipopolisacaridos (40 niveles de glicanos) y el resto de esta composición es de
peptidoglicanos.
Las bacterias Gram- toman una coloración rosa/roja con la tinción diferencial de Gram
gracias a la safranina.
En la prueba de KOH al 3% las bacterias Gram- presentan una evidente formación de
hebras por el escaso contenido de proteinas de barrera que evitarían que esta se
rompiera.
Los estreptococos que se encuentran en muestras de yogurt comercial se agrupan en
cadenas o pares, y se pueden visulizar gracias a la tinción con azul de metileno.
Los diversos tipos de medios de cultivo brindan diferentes beneficios para la cepa que
será incubada, ya sea nutrientes, pH, condiciones aerobicas, de movilidad, etc.
Los medios de cultivos que son diferenciales para un determinado grupo de bacterias
contienen inhibidores para el resto de bacterias y portencializadores para el
crecimiento del grupo en especifico que se busca.
Shigella flexneri en agar XLD se torna de un colo rojizo luego del tiempo de incubación
debido a que esta bacteria tiene la caoacidad de descarboxilar la lisina.
Salmonella enteritidis tiene una producción de H2S en agar XLD.
E. coli tiene una producción de acidos al consumir la lactosa, acidifica el medio y hace
que vire el indicador Rojo de Fenol a un color amarillo.
La reducción de bismuto a metal en el agar Sulfito de Bismuto da un brillo metalico
alrededor de las colonias de Salmonella, ya que solo este grupo crece.
En el agar HE se puede aislar de forma eficaz a las cepas de Shigella gracias al
contenido triplicado de sales en su composición.
El agar ENDO permite diferenciar a las baterias coliformes fermentadoras de lactosa
(E. coli) por las colonias de color rosa oscuro con un brillo metálico verdoso.
Los indicadores eosina y azul de metileno que son añadidos a los agares, tienen un
efecto de inhibición sobre muchas de las Gram +.
Staphylococcus aureus posee la enzima manitolasa capaz de utilizar el manitol como
sustrato principal, entrar en la vía metabólica de la Glucolisis y usarlo como fuente
energía, por lo que, en el medio Sal Manitol, da manitol + con coloración amarilla del
medio.
Staphylococcus edpidermidis no tiene la capacidad de utilizar al manitol como
sustrato para obtención de energía, por lo que su crecimiento es nulo y en el medio Sal
Manitol evidencia manitol – sin un cambio de color en el medio.
Shigella flexneri tiene una utilización negativa de lactosa, haciendo que en el medio
Tergitol 7 el azul de bromotimol vire a un color verde bandera.
En el agar chocolate no se cuenta con ningún inhibidor o sustrato adicional que
favorezca a algún microorganismo en particular, más bien, permite el crecimiento sin
interposiciones.
Las bacterias rojas del azufre, presentes en el espacio de la columna de Winogradsky,
comprenden un grupo de microorganismos anaeróbicos, parcialmente sensibles a la
presencia de oxígeno molecular y sulfuro de hidrógeno.
El crecimiento de las bacterias y la temperatura a la que lo hacen las clasifican en cinco
grupos que viran desde los 0°C hasta los 116°C.
E. coli, Bacillus y Pseudomonas tienen una temperatura de crecimiento optimo
alrededor de los 35°C.
La Levadura de tipo 9 crece de manera favorable en un medio ácido.
En un agar de pH neutro como el agar Nutritivo favorece únicamente el crecimiento de
la cepa Shigella.
Los microbios tienen una gran variedad de capacidades metabólicas. Se pueden
encontrar muchos ejemplos de esto en una muestra genérica del medio ambiente.

Una combinación del metabolismo microbiano y parámetros físicos (como la

disponibilidad y difusión de la luz) resultan en una estratificación del ecosistema.

Los requerimientos metabólicos de un grupo de organismos pueden ser cubiertos por

los subproductos de otro grupo.

Aunque los diferentes microbios están adaptados a diferentes nichos ecológicos,

también desempeñan un papel en la formación de esos nichos.

Los microbios cumplen una función en los ciclos de los elementos.

El agar TCBS al poseer un pH alcalino permite el desarrollo de Vibrio parahemoliticus y
la inhibición de Gram+ y muchas Gram-.
Las levaduras aprovechan un medio con una alta concentración en azucares para un
crecimiento optimo.
Pseudomonas aeruginosa es una bacteria aerobia estricta, por lo que crece en
presencia de oxígeno.
Para el método de conteo microbiano de vaciado en placa es de suma importancia que
el agar se encuentre en una temperatura estable y de buen manejo para evitar matar al
microorganismo que se haya encontrado presente en la muestra.
Proteus mirabilis posee la enzima ureasa capaz de degradar la urea en moléculas de
amoniaco y dióxido de carbono en el medio para alcalinizarlo y virar a un rojo el medio.
Staphylococcus aureus tiene presencia + de la enzima coagulasa.
E. coli es capaz de utilizar como sustratos fuentes de energía a la Lactosa, Sacarosa y
Glucosa
Enterobacter fecalis y Bacillus logran hidrolizar la esculina que al combinarse con las
sales férricas presentes en el medio forman ese precipitado negro alrededor de las
colonias.
En el agar TSI se puede distinguir a bacterias fermentadoras de lactosa y a las que
utilizan la vía de la Glucolisis por cualquiera de los sustratos empleados como fuente
de energía.
La prueba de malonato se basa principalmente en la capacidad que tienen algunos
microorganismos de utilizar como única fuente de carbono el malonato de sodio y
como fuente de nitrógeno al sulfato de amonio.

.
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