2. TESTPRINZIP 5. LAGERUNG 9.

QUALITATIVE TESTMETHODE
Mit Tanninsäure vorbehandelte Hühnererythrozyten, die mit Für jede Probe werden 4 Vertiefungen einer Mikrotiterplatte
spezifischem Antigen beschichtet sind, liegen in Form einer benötigt.
Suspension vor2,3,4. Wird diese Test- Zellsuspension mit einer Lagerung bei 2–8°C. Bei Einhaltung dieser Bedingungen bleibt Hinweis: Die Kit-Kontrollen sind vorverdünnt und sollten
Key Code TSMX5203C verdünnten Probe vermischt, so lösen die eventuell in der Probe die Aktivität der Reagenzien bis zum angegebenen Verfalldatum direkt in die einzelnen Vertiefungen in Reihe 3 und 4 (kein
vorliegenden Antikörper gegen das sensibilisierende Antigen unbeeinträchtigt. Verdünnungsmittel erforderlich) gegeben werden.
[Link]/ifu eine Agglutination der Zellen aus (Bindung antigenhomologer
6. KONTROLLVERFAHREN 1. Den Verdünnungspuffer nach folgendem Schema in die
Europe +800 135 79 135 US 1 855 2360 190 Antikörper an das Antigen). Am Boden der Vertiefungen einer
Anhand der mitgelieferten Kontrollseren sollte die einwandfreie Mikrotiterplatte pipettieren:
Mikrotiterplatte weisen die agglutinierten Zellen ein typisches
CA 1 855 805 8539 ROW +31 20 794 7071 Muster auf. In Abwesenheit des spezifischen Antikörpers bilden Reaktion der Zellsuspensionen täglich vor den Routinetests Vertiefung 1:25 μl
die Zellen am Boden der Vertiefung ein kompaktes, punktförmiges überprüft werden. Vertiefung 2:100 μl

TPHA Test
Sediment. Mit dem positiven Kontrollserum sollten die Erythrozyten der Test- Vertiefung 3:25 μl
Zur Kontrolle werden mit Tanninsäure vorbehandelte, unbeladene Zellsuspension innerhalb von 60 Minuten bei Raumtemperatur Vertiefung 4:25 μl.
Hühnererythrozyten eingesetzt. agglutinieren und das typische Muster am Boden der Vertiefungen
2. 25 μl der Probe in Vertiefung 1 pipettieren.
DE
der Mikrotiterplatte aufweisen.
DR0530M.��������������������������������������� 200 3. BESTANDTEILE DES TESTS 3. Die Probe folgendermaßen verdünnen:
DR531 Test-Zellsuspension Mit dem negativen Kontrollserum darf entsprechend keine
Agglutination innerhalb von 60 Minuten auftreten. Am Boden Den Inhalt der Vertiefung 1 mischen und davon 25 μl in
1. EINLEITUNG 2 Tropfflaschen mit jeweils 8,5 ml vorbehandelten, mit Antigen Vertiefung 2 geben. Erneut mischen und davon 25 μl in
beladenen Hühnererythrozyten. der Vertiefungen der Mikrotiterplatte sollte ein kompaktes,
Treponema-pallidum- Hämagglutinationsassay (TPHA) zum Vertiefung 3 pipettieren. Nach Mischen 25 μl aus Vertiefung
punktförmiges Sediment erscheinen.
serodiagnostischen Nachweis von Syphilis. Das Volumen der abgegebenen Tropfen beträgt 75 μl. Der Inhalt 3 verwerfen.
einer Packung reicht für 200 Tests. 7. WICHTIGE HINWEISE
Syphilis ist eine durch Treponema pallidum hervorgerufene 25 ml aus Vertiefung 2 in Vertiefung 4 geben, mischen und
Geschlechtskrankheit. Treponema pallidum gehört zur Ordnung Vermeiden Sie, daß die Reagenzien durch Berührung 25 μl aus Vertiefung 4 verwerfen.
DR533 Verdünnungspuffer
der Spirochaetales und läßt sich weder auf Nährböden noch der Tropfflaschen mit dem Probenmaterial in den
2 Flaschen mit jeweils 20 ml Puffer. 4. Die Test- und Kontroll-Zellsuspension vor Gebrauch kräftig
in Zellkulturen isolieren und züchten. Normalerweise wird Mikrotiterplattenvertiefungen kontaminiert werden. Achten
DR534 Positives Kontrollserum Sie darauf, daß die Reagenzfläschchen nach Gebrauch fest schütteln, damit eine homogene Suspension entsteht.
eine Infektion über den Nachweis spezifischer Antikörper
1 Flasche mit 2 ml vorverdünntem (1/20) Serum, welches verschlossen sind, damit die Reagenzien nicht austrocknen oder 5. Einen Tropfen (75 μl) der Test- Zellsuspension in Vertiefung
gegen Treponema pallidum im Blut oder Liquor des Patienten
Antikörper gegen T. pallidum enthält. kontaminiert werden. Stellen Sie die Packung nach Gebrauch 4 und einen Tropfen (75 μl) Kontroll-Zellsuspension in
diagnostiziert.
Beim qualitativen Testansatz (Screening Test) erzeugt das positive wieder in den Kühlschrank, und achten Sie darauf, daß die Vertiefung 3 geben. Durch vorsichtiges Schwenken der
Die Antikörper sind erstmalig etwa 3–4 Wochen nach der Fläschchen dort nicht liegend oder schräg gelagert werden. Mikrotiterplatte den Inhalt der Vertiefungen mischen. In
Kontrollserum eine Agglutination.
Infektion nachweisbar, können dies aber auch noch längere den Vertiefungen 3 und 4 liegt das Serum (Probe) in einer
Zeit nach einer Behandlung sein. Es werden zwei Gruppen von Beim quantitativen Testansatz erzeugt das positive Kontrollserum Die Kontroll-Zellsuspension sollte in den Tests keine Agglutination
Verdünnung von 1:80 vor.
Antikörpern gebildet: eine Agglutination, die bis zu einer Verdünnungsstufe von 1/2560 zeigen. Sofern die Kontroll-Zellen (Erythrozyten) dennoch
± einer Verdünnungsstufe 1:2 stabil bleibt. agglutinieren, liegt ein anti-Zellen Antikörper vor. Der Test sollte 6. Die Mikrotiterplatte abgedeckt 45–60 Minuten (alternativ
1.1. Antikörper, die mit nichttreponemenspezifischen dann wiederholt werden, nachdem dieser Antikörper durch auch über Nacht) bei Raumtemperatur inkubieren.
Antigenen reagieren (Reagine oder antilipoidale DR535 Negatives Kontrollserum
nachfolgendes Verfahren aus dem Testserum (Probe) absorbiert 7. Auf Agglutination prüfen.
Antikörper) 1 Flasche mit 2 ml vorverdünntem Serum, welches keine
wurde: – 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ ± – –
Antilipoidale Antikörper werden in der Regel in der akuten Phase Antikörper gegen T. pallidum enthält.
Hierzu wird das Testserum im Verhältnis 1:4 mit der
der Krankheit gebildet. Der Nachweis dieser Antikörper erfolgt Die zur Herstellung der Kontrollseren benutzen Humanseren,
Kontroll-Zellsuspension (100 μl + 300 μl) vermischt und bei
über einen Plasma-Reagin-Test (RPR-Test) oder über einen wurden auf Abwesenheit von HBsAg (Hepatitis B Surface
Raumtemperatur 45–60 Minuten stehengelassen. Anschließend
Veneral-Disease-Research-Laboratory-Test (VDRL-Test; Oxoid, Antigen) und Antikörpern gegen Hepatitis C, HIV 1 und 2 geprüft
wird die Probe zentrifugiert (1000 rpm/5 Minuten) und der
Art.-Nr. DR525M). Der Oxoid VDRL-Test ist ein makroskopischer (FDAMethoden).
Überstand im Verhältnis 1:5 mit Verdünnungspuffer (100 μl +
Cardiolipin-Mikroflockungs-Test. Der Test wird mit aktivem Die vorgeschriebenen Vorsichtsmaßnahmen im Umgang mit 400 μl) verdünnt. Diese Lösung wird dann unverdünnt unter – – – – – – – – – –
Serum durchgeführt, unter Verwendung eines mit Kohlepartikeln menschlichem Serum oder Plasma sollten eingehalten werden. Verwendung der Test- und Kontroll-Suspensionen getestet. Zur
angefärbten Antigens. Zusätzlich benötigte Materialien Bestätigung wird ein FTA-ABS-Test5 (Fluoreszenz-Treponema- 10. ABLESEN UND AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE
Der Titer der antilipoidalen Antikörper sinkt nach erfolgreicher Mikrotiterplatten mit U-förmigen Vertiefungen. Antikörper- Absorptions-Test) empfohlen. Agglutinierte Zellen bilden eine gleichmäßige Schicht auf dem
Therapie ab1. Die Kit-Kontrollen sind vorverdünnt und sollten direkt in die Boden der Vertiefung. Nicht-agglutinierte Zellen bilden ein
Mikropipetten und Spitzen (25 μl und 100 μl).
einzelnen Vertiefungen in Reihe 3 und 4 (kein Verdünnungsmittel kompaktes, punktförmiges Sediment in der Mitte der Vertiefung.
Die treponemenunspezifischen Antikörper können auch gebildet Desinfektionsmittel (z.B. Natrium-Hypochlorit >1,3% w/v).
erforderlich) gegeben werden. Schwach-agglutinierte Zellen bilden ein charakteristisches
werden, wenn keine Syphilisinfektion vorliegt. Bei positivem
4. VORSICHTSMASSNAHMEN Ringmuster aus. Eine Agglutination der Testzellen weist auf
Ausfall eines oben genannten Tests sollte das Ergebnis deshalb 8. PROBENNAHME UND- VORBEREITUNG spezifische Antikörper gegen Treponema pallidum hin. Bei
mit einem Test zum Nachweis der spezifischen Treponema- Für den Test kann nur humanes Serum verwendet werden. Es Agglutination der Kontroll-Zellen liegen anti- Zellen Antikörper vor.
Antikörper bestätigt werden (siehe Punkt 2). In vitro Diagnostikum. sollten keine Proben verwendet werden, die kontaminiert oder In diesem Fall ist der Test nicht auswertbar und zu wiederholen
1.2. Antikörper, die mit spezifischen Treponema-Antigenen Nicht tieffrieren. hämolysiert sind. Das Serum sollte klar und frei von Partikeln sein. (siehe ‘Wichtige Hinweise’). Bleibt eine Agglutination der Test-
reagieren Probenmaterial, das nicht am gleichen Tag getestet wird, kann Zellen aus, so ist das Ergebnis negativ, oder der Antikörper- Titer
Die Reagenzien enthalten zur Konservierung 0,095% Natriumazid.
Die spezifischen Antikörper sind auch lange nach erfolgreicher bis zu 3 Tagen bei 2–8°C aufbewahrt oder zur längeren Lagerung liegt unter der Nachweisgrenze des Tests.
Natriumazid kann in Blei- oder Kupferrohren hochexplosive
Behandlung nachweisbar. bei –20°C eingefroren werden. Der Gehalt an nachweisbaren 11. QUANTITATIVE TESTMETHODE
Metallsalze bilden. Zur Vermeidung einer Metallazidakkumulation
Zum Nachweis dient der TPHA-Test. sollten flüssige Abfälle daher umgehend mit reichlich Wasser Antikörpern verringert sich durch wiederholtes Auftauen und Sollen positive Ergebnisse routinemäßig quantifiziert werden,
nachgespült werden. Wiedereinfrieren. kann die qualitative Testmethode dahingehend modifiziert
Der Oxoid TPHA-Test ist ein sensitiver passiver
Hämagglutinationstest zum Nachweis von Antikörpern gegen Die entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen im Umgang mit Plasmaproben dürfen nicht verwendet werden. werden, daß die Kontroll-Zellen nicht mitgeführt werden müssen.
Treponema pallidum. humanem Serum sollten eingehalten werden. Die Reagenzien sind nach Erreichen der Raumtemperatur Sie können dann im quantitativen Ansatz eingesetzt werden.
gebrauchsfertig. Für jede Probe und jede Kontrolle wird eine Reihe der
Mikrotiterplatte benötigt.
1. Verdünnungspuffer in der Mikrotiterplatte wie folgt werden. Ein ansteigender Antikörper-Titer weist auf eine
vorlegen: akute Infektion hin. Es wird empfohlen eine FTA-ABS-Test zur
25 μl je Vertiefung der benötigten Reihen. Bestätigung einzusetzen, da dieser zwischen IgM-Antikörpern
(akute Infektion) und IgG-Antikörpern unterscheiden kann.
2. Von der Screening Platte (qualitative Testmethode) 25 μl aus
der Vertiefung 2 in die Vertiefung 1 der quantitativen Platte Ein quantitativer Reagin-Test8 (Oxoid VDRLTest) sollte eingesetzt
überführen, mischen und daraus 25 μl verwerfen. 25 μl aus werden, um den Therapieerfolg zu dokumentieren.
der Vertiefung 2 der Screening Platte in die Vertiefung 2 der Im Primärstadium der Syphilis kann es bei einigen Proben zu
quantitativen Platte überführen. Eine 1:2 Verdünnungsreihe einem negativen Ergebnis kommen. In diesen Fällen sollte
von Vertiefung 2 bis Vertiefung 8 der quantitativen Platte zusätzlich ein FTA-ABS-Test durchgeführt werden10,11.
anlegen.
15. REFERENCES
3. Einen Tropfen (75 μl) der Kontroll- Zellsuspension in 1. Garner, M. F., Backhouse, J. L., Daskalopoulos, G. and Walsh, J. L.
Vertiefung 1 und jeweils einen Tropfen (75 μl) der Test- (1973), J. Clin. Path., 26, 258–260.
Zellsuspension in die Vertiefungen 2 bis 8 geben. Durch 2. Rathlev, T. (1965). W.H.O. VDT/RES/77. 65.
vorsichtiges Schwenken der Mikrotiterplatte den Inhalt der
3. Rathlev, T. (1976). Brit. J. Vener. Dis., 43, 181.
Vertiefungen mischen.
4. Tomizawa, T., Kasamatsu, S. and Yamaya, S.-I. (1969). Jap. J. Med. Sci.
4. Die Mikrotiterplatte abgedeckt 45–60 Minuten (alternativ Biol., 22, 341–350.
auch über Nacht) bei Raumtemperatur inkubieren.
5. Sequeria, P. J. L. and Eldridge, A. E. (1973). Brit. J. Vener. Dis., 49,
12. ABLESEN UND AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE 242–248.
Die höchste Verdünnungstufe, bei der noch eine Agglutination 6. Cox, P. M., Logan, L. C. and Norins, L. C. (1969). Appl. Microbiol., 18,
sichtbar ist, entspricht dem Antikörpertiter der Probe. Das positive 485–489.
Kontrollserum sollte innerhalb einer 1:2 Verdünnungsstufe von 7. Johnston, N. A. (1972). Brit. J. Vener. Dis., 48, 474–478.
1/2560 eine Agglutination aufweisen. Die Ausgangsverdünnung
8. Uete, T., Fukazawa, S., Ogi, K. and Takeuchi, Y. (1971). Brit. J. Vener.
der quantitativen Testmethode beträgt 1/80. Dis., 47, 73–76.
13. LEISTUNGSMERKMALE 9. Young, H., Henrichsen, C. and Robertson, D. H. H. (1974). Brit. J. Vener.
Die Leistungsfähigkeit des Oxoid TPHATests wurde durch ein Dis., 50, 341–346.
unabhängiges europäisches Institut validiert. Die Proben wurden 10. Coffey, E. M., Bradford, L. L., Naritomi, L. S. and Wood, R. M. (1972).
mit dem Oxoid TPHA-Test und einem anderen kommerziell Appl. Microbiol., 24, 26–30.
erhältlichen TPHA-Test untersucht. Alle positiven Ergebnisse 11. Dyckman, J. D., Storms, S. and Huber, T. W. (1980). J. Clin. Microbiol.,
wurden mit einem FTA-ABS-Test bestätigt. 12, 629–630.
Insgesamt wurden 252 Proben getestet. Die Ergebnisse sind in 16. VERPACKUNG
Tabelle 1 dargestellt. DR0530M������������������������������������������������������������� 200
Tabelle 1: Ergebnisse des Oxoid TPHA-Tests mit klinischen Proben
Anzahl positive Anzahl negative 17. SYMBOLLEGENDE
Testergebnisse Testergebnisse Sensitivität Spezifität
Oxoid TPHA 163 83 98,7% 95,4%
Kommerziell Katalognummer
erhältlicher 161 79 97,5% 90,8%
TPHA-Test In-vitro-Diagnostikum
FTA-ABS 165 87 100% 100%
In der Packungsbeilage (IFU) nachlesen
14. TESTBESCHRÄNKUNG
Mikrotiterplatten aus Vinyl dürfen mit dem Oxoid TPHA-Test nicht Temperatureinschränkungen
eingesetzt werden. (Lagertemperatur)
Nur Serum- und CSF-Probenmaterial darf in den Oxoid TPHA-Test
eingesetzt werden. N Ausreichend für "n" Ansätze
Kein serologischer Hämagglutinationstest ist in der Lage zwischen Chargencode (Lotnummer)
Antikörpern zu unterscheiden, die durch eine T. pallidum- Infektion
oder durch eine Infektion anderer pathogener Treponemen6, z.B. Verwendbar bis“ (Verfallsdatum)
T. pertenue und T. carateum ausgelöst wurden.
Es wird empfohlen, alle positiven Ergebnisse mit einem FTA-ABS- Hergestellt von
Test zu bestätigen, da bestimmte Krankheiten bei einigen Patienten
zu falsch positiven Ergebnissen geführt haben (z.B. bei Infektiöser
Mononukleose, Knotenlepra oder Bindegewebsstörungen).
Ein postivies Ergebnis weist auf eine akute oder eine bereits
zurückliegende Infektion hin, da die Antikörper auch nach einer IFU X5203C, überarbeitet Februar 2014
Behandlung immer noch nachweisbar sein können5,7,8,9.
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Eine akute Infektion kann von einer zurückliegenden Crossways, Dartford, Kent DA2 6PT, UK
unterschieden werden, indem mehrere aufeinanderfolgende,
quantitative Testungen mit dem Patientenmaterial durchgeführt Weitere Informationen erhalten Sie von Ihrem Händler vor Ort.